扶正顆粒劑含量測定方法的研究

于秀娟

（內蒙古興安盟婦幼保健所 內蒙古 興安 137400）

扶正顆粒劑屬于院內制劑，原處方由黃芪、當歸、枸杞和陳皮四味中藥組成，臨床上用于提高放化療后腫瘤患者血中的白細胞數，以提高機體免疫力，從而降低放化療毒副作用[1－7]。原劑型為湯劑。為實現規模化生產，方便腫瘤患者用藥，擬將其改為顆粒劑。以方便患者使用。為保證產品質量的可控性，采用HPLC法對扶正顆粒劑中黃芪甲苷進行含量研究，[8]方法準確、簡便、快速，能有效控制扶正顆粒劑的質量。該研究為完善和提高藥品質量標準提供依據。

1 實驗材料和儀器

1.1 試劑與試藥：正丁醇（天津市風船化學試劑科技有限公司 批號080912）；氨水（天津市風船化學試劑科技有限公司 批號090118）；甲醇（天津威晨化學試劑科貿有限公司 批號080509）；無水乙醇 （天津市化學試劑三廠 批號090512）；黃芪甲苷對照品（成都曼思特生物科技有限公司批號20070901）。芪歸扶正顆粒劑三批 本實驗室制備。

1.2 儀器：p230高效液相色譜儀EC2000色譜工作站（大連依利特）；蒸發光散射檢測器 ELSD800（Alltech）；色譜柱（大連依利特E1720833 Hypersil ODS 5ul 4.6mm＊200mm）；KH3200E型超聲波清洗機（昆山禾創超聲儀器有限公司）；AB135－S電子天平 （METTLER TOLEDO）101－3型電熱鼓風箱（上海市上海縣實驗儀器廠）；旋轉蒸發儀RE－52A（上海亞榮生化儀器廠）

2 含量測定方法

精密量定芪歸扶正顆粒劑約3.7g，加入40倍量70%乙醇，充分振搖，放置30min后，超聲提取30min，過濾，濾渣用70%的乙醇50ml充分沖洗，濾液蒸干，殘渣加水20ml，微熱使溶解，轉移至分液漏斗中，用水飽和正丁醇振搖萃取4次，每次80ml，合并正丁醇液，用氨試液充分洗滌2次，每次80ml，棄去氨試液，正丁醇液蒸干，殘渣用甲醇定容至2ml量瓶中，進樣10μl，以乙腈－水＝36∶64為流動相，流速1.0ml/min，ELSD檢測器漂移管溫度為70℃，氣體壓力為3MP測定扶正顆粒劑中黃芪甲苷的含量。

3 方法學考察[9]

3.1 色譜條件與系統適用性試驗：色譜柱：大連依利特E－1720833Hypersil ODS 5ul 4.6mm＊200mm；流動相：乙腈－水＝36∶64，流速1.0ml/min；ELSD檢測器參數：漂移管溫度為70℃，氣體壓力為3 MP。

3.2 溶液的制備

3.2.1 對照品溶液的制備：精密稱取黃芪甲苷對照品5.26mg，用甲醇定容至5ml量瓶中，超聲3min，搖勻，即得，濃度為1.052mg/ml。

3.2.2 供試品溶液的制備：取芪歸扶正顆粒劑約3.7g，精密稱定，加入40倍量70%乙醇，充分振搖，放置30min后，超聲提取30min，過濾，濾渣用70%的乙醇50ml充分沖洗，濾液蒸干，殘渣加水20ml，微熱使溶解，轉移至分液漏斗中，用水飽和正丁醇振搖萃取4次，每次80ml，合并正丁醇液，用氨試液充分洗滌2次，每次80ml，棄去氨試液，正丁醇液蒸干，殘渣用甲醇定容至2ml量瓶中，即得。標準品溶液和供試品溶液的HPLC色譜圖見圖1和圖2。

圖1 標準品溶液HPLC色譜圖

3.3 線性關系考察：精密量取對照品溶液0.1ml、0.3ml、0.5ml、0.7ml、1ml置于1ml量瓶中，用甲醇定容。微孔濾膜過濾，棄去初濾液，收集續濾液于EP管中，進樣20μl，以峰面積與對照品濃度進行線性回歸，回歸方程：y＝1027.1x－29.349，R2＝0.9996。結果表明，黃芪甲苷濃度在0.1052mg/ml～1.0520mg/ml的范圍內與峰面積呈良好線性關系。結果見表1、圖3。

圖2 供試品溶液HPLC色譜圖

表1 黃芪甲苷標準曲線測定值

圖3 黃芪甲苷標準曲線

3.4 精密度試驗：樣品液配制同“供試品溶液的制備”，用微孔濾膜過濾，棄去初濾液，收集續濾液。連續平行進樣五次，每次進樣10ul，測定黃芪甲苷的峰面積，結果見表2。

表2 精密度試驗數據

表3 重現性試驗數據

3.5 重復性試驗：樣品液制備同“供試品溶液的制備”，平行提取樣品5份，用微孔濾膜過濾，棄去初濾液，收集續濾液，分別進樣10ul，測定每份樣品黃芪甲苷的峰面積，結果見表3。

3.6 穩定性試驗：樣品液配制同“供試品溶液的制備”，用微孔濾膜過濾，棄去初濾液，收集續濾液。每隔2小時進樣一次，連續測定6次，即分別于0h、2h、4h、6h、8小時、10h進樣測定，每次進樣10μl，測定不同時間點黃芪甲苷的峰面積，結果見表4。

表4 穩定性試驗數據

表5 加樣回收試驗數據

表6 含量測定試驗數據

3.7 加樣回收試驗：取芪歸扶正顆粒劑5份，每份約1.8g，精密稱定，每份加入1.044mg/ml的黃芪甲苷對照品1ml，以下步驟同“供試品液制備”，得到的樣品液用微孔濾膜過濾，收集續濾液。每份進樣10μl，測每份樣品中黃芪甲苷的峰面積，結果見表5。

3.8 芪歸扶正顆粒劑中黃芪甲苷的含量測定：稱取平行制備的三批芪歸扶正顆粒劑，按“供試品溶液的制備”項下的方法提取，提取液微孔濾膜過濾，棄去初濾液，收集續濾液，每份進樣10ul，測黃芪甲苷的峰面積，結果見表6。

4 結果

本課題應用高效液相色譜法測定芪歸扶正顆粒劑中黃芪甲苷的含量，并對標準曲線的線性范圍（0.1052mg/ml－1.0520mg/ml），精密度（RSD＝1.92%），重復性（RSD＝1.01%），穩定性（RSD＝1.64%），平均加樣回收率（96.60%RSD＝1.85%）進行了考察，結果均符合方法學要求，可以作為芪歸扶正顆粒劑中黃芪甲苷的含量測定方法。

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[9] 國家藥典委員會.中華人民共和國藥典（2010版一部）[M].化學工業出版社