淳安縣新型桑葉病害及防控技術研究初報

肖建京，豐洪平，豐衛忠，姚仙嶺，管圣浩

（1 .淳安縣繭絲綢總公司，杭州 311700；2 .淳安縣汾口林場，杭州 311719）

淳安縣新型桑葉病害及防控技術研究初報

肖建京1，豐洪平1，豐衛忠2，姚仙嶺1，管圣浩1

（1 .淳安縣繭絲綢總公司，杭州 311700；2 .淳安縣汾口林場，杭州 311719）

2011年秋季首次在淳安縣桑園內大面積發生一種罕見的桑葉真菌病害，2012年全縣87.4%的桑園面積均有發生。據16個病害監測樣方調查，平均株發病率為87.9%，葉發病率為48.6%，晚秋葉損失率為21.2%。對其田間發生規律、病原真菌種類和防控技術等作了研究與示范。

新型桑葉病害；病原真菌；防控技術

淳安縣是國家現代蠶桑產業技術體系建設示范縣之一。蠶桑是占全縣農業總產值近10%的傳統優勢產業，2011年秋季首次在淳安縣桑樹上發生一種罕見的、葉上病斑特別大的新型桑葉真菌病害，唐村、浪川等蠶桑示范園區大面積發生，而且危害嚴重。2012年該新型桑葉病害發生呈現危害面積持續擴大，病原累積迅速增加，危害程度不斷加重，是淳安蠶業史上發生面最廣、危害損失最為嚴重的一種病害。兩年來，在中國蠶研所和浙江省農科院的大力支持下，對發生的桑葉病害進行了發生情況監測和病原種類、生物學特性、田間發生規律及防控技術等系統研究與示范，現將兩年來的病害調查研究情況報告如下。

1 病害發生情況

1.1 病害分布

截止2012年10月上旬，全縣所有蠶桑重點鄉鎮和9個蠶桑示范園區，連片2 hm2以上的桑園均發生這種新型桑葉病害，全縣病害發生面積約4685 hm2，占全縣總面積的87.4%，比11年增加18.6%。據16個病害監測樣方10月上旬調查，平均株發病率為87.9%，葉發病率為48.6%，晚秋葉損失率為21.2%（見表1、2）。其中危害嚴重的唐村、郭村、浪川示范園區等333 hm2，余畝桑園葉發病率達70%，晚秋葉損失率為38%。

1.2 病害癥狀

病葉主要發生在桑樹中下部成熟葉，頂梢桑葉較少。病菌侵染桑葉初期，葉面褪綠呈褐色水漬狀病斑（圖1-a），病斑少而小，進而形成灰褐色病斑，色澤變土黃色后葉肉組織失水死亡；隨著病情發展，病斑以同心圓狀向外延伸，葉面病斑顏色由里到外逐漸變深呈現輪紋狀（圖1-b）。病斑可見于葉面、葉背。葉背呈現灰色圓形病斑，外觀可見多個同心圓形絨毛狀菌絲體和分生孢子（圖1-c）。病斑大小不等，最大病斑直徑可達121 mm。發病嚴重時葉片病斑較多，多個病斑常相互連接，形成大病斑（圖1-d）。遇陰雨天氣，病斑吸水膨脹，腐敗破裂；遇干燥天氣，病斑中部常開裂。1.3危害程度

表1 2012年新型桑葉病害發病率調查Table 1 The eincidence rate of the new mulberry disease in 2012

表2 2012年新型桑葉病害危害損失調查Table 2 The leaf loss caused by the new mulberry disease in 2012

圖1 病葉特征Figure 1 the symptoms of affected leaves

根據不同立地條件、不同栽培管理形式確定具有代表當地病害發生實情的標準地桑園，連片栽培2 hm2畝以上的桑園至少調查一個樣方（sample）［1］；在調查樣方內隨機抽查30株桑樹，調查株發病率；在調查樣方桑樹上每株隨機抽取1根枝條，調查枝上著葉總數和病葉數，計算葉發病率；并從中抽取5根枝條上的所有病葉，調查每片桑葉上的病斑數量和病斑直徑，用4級分類法統計發病指數，表示危害程度。

發病指數［2］=｛Σ（各級病葉數×各級代表值）/（調查病葉總數×最高級別的代表值）｝×100%。其中危害程度分0～4級標準［3］如下：1級為葉上病斑小，病斑1～5個，占全葉面積的1%以下，代表分值為5；2級為葉上病斑小，病斑6～10個，占全葉面積的1%～10%，代表分值為20；3級為葉上病斑擴大，病斑10～20個，占全葉面積的11%～50%，代表分值為50；4級為葉上病斑多于20個，面積約占全葉的51%以上，代表分值為90；0級為健康葉片，代表分值為0。

2012年8月24 ～28 日開展了全縣范圍的新型桑葉病害普查工作，調查了62個樣方的1860株桑樹，其平均株發病率為11.1%，葉發病率為10.9%。10月上旬16個定點病害監測樣方調查，平均株發病率為87.9%，葉發病率為48.6%，晚秋葉損失率為21.2%。其中危害嚴重的唐村、郭村、浪川示范園區等333 hm2桑園葉發病率為70%，晚秋葉損失率為38%。

1.4 田間發生規律

2011年秋季病害發生后，全縣確立了16個有代表性的病害監測點。采用大面積普查和監測點系統觀察相結合的方法，以盡快掌握新型桑葉病害的田間發生規律，為病害的有效防控提供科學依據。

1.4.1病害發生與氣象條件的關系

新型桑葉病害的發生與當地的氣候條件關系十分密切。據監測，2012年6月上旬最早在春蠶余葉養桑發現新型桑葉病害，7月底在春蠶余葉養桑旁邊的夏伐桑樹基部桑葉上發現有少數桑葉發生病害，進入8月份隨著枝條增長，著葉數快速增加，病害開始蔓延擴大，自9月至10月中旬止，氣溫、空氣濕度適宜，桑園小環境非常有利于這種病原的繁衍和傳播，桑葉發病達到高峰期。據氣象資料記載，9月份平均氣溫為22～26℃，10月份為18～20℃（見表3）。9月～10月份的降雨量為114.7 mm，光照時數低于歷年平均值。分析認為，在這樣的溫度和相對較低的陰濕氣象環境條件下，極有利于新型桑葉病害的發生流行。

表3 桑葉病害發生期平均氣溫（℃）Table 3 The average temperatures during the exploding of the new mulberry disease

1.4.2 病害發生與栽培管理方式的關系

一般通風透光差、低洼高濕、樹勢弱、樹齡長、上一年發病的桑園危害嚴重。發病嚴重的桑園多數為大田連片的成林桑園，種植密度為1.5萬～1.8萬株/hm2，低干樹型養成，桑園通風透光能力較差。加之千島湖特有的氣候效應，致使桑園相對濕度較高，尤其是夏秋季余葉較多的桑園更是有利于新型桑葉病害病原菌的繁衍。栽培條件構成的小氣候環境利于病原真菌的傳播，是造成病害發生流行的主要原因之一。

1.4.3 病害發生與桑品種的關系

淳安縣桑園栽培的桑品種有湖桑32號、強桑1號、農桑14、農桑12、豐田系列、育71-1等，調查發現所有栽培桑品種和草桑均發生這種新型桑葉病害。從大面積調查的數據統計中可見強桑1號品種危害程度相對較輕。

1.4.4 病害程度與病原積累相關

病原菌的積累也是引起該病嚴重發生的首要因素。這種桑葉病害最早在6月上旬的春蠶余葉桑上發現，說明桑葉菌核病菌核可能在土壤內越冬的。在自然條件下，凡上年危害的桑園，病原積累較多的桑園，次年病害發生往往病斑多危害嚴重，符合真菌病害流行規律。

2 病原鑒定

2.1 病癥鑒定

對發病癥狀鑒定，查閱國內外文獻資料，得到同一癥狀有2種病名與病原菌。一種稱為桑葉菌核病，病原為富克爾灰葡萄孢（Botryotinia fuckeliana）［4-6］；另一種稱為桑輪紋病，病原為桑椎枝孢（Spondylocladium mori）［7］。

2.2 病原菌的分離與接種

2011年經過多次分離工作，得到1個菌種，為桑葉菌核病，病原為富克爾灰葡萄孢。2012年夏、秋季對富克爾灰葡萄孢病原菌分別進行2次室內和1次室外致病性回接試驗，但沒有接種成功。2012年秋季再次對桑葉病斑周圍的病原菌進行反復的分離和純化，得到了另一種為輪紋病的病原真菌，病原為貝氏葡萄座腔菌（B.berengeriana）（不同于桑椎枝孢）。因后期氣溫較低，活體桑樹不能正常生長開葉，未能完成病原菌的致病性接種工作。

2.3 病原種類研究

圖2 病原菌PDA平板形態特征Figure 2 The morphological characteristics of the pathogenic

2012年，中國蠶研所從浙江淳安采集的桑樹病葉，其病征為桑葉表面出現褐色水漬狀同心輪紋斑點，較大的病斑中心出現空洞，與報道的桑輪紋病及典型癥狀非常接近。對病斑周圍的菌進行反復的分離和純化，得到了一株病原真菌。該分離的病原菌在PDA上28℃培養4 d菌落長滿培養皿，氣生菌絲呈棉絮狀、白灰色，菌落背面產生暗綠色素（見圖2、圖3）。經培養后，提取真菌DNA，經PCR純化，連接轉化目的基因，藍白斑挑選陽性克隆進行ITS序列測定，結果顯示，該菌為子囊菌綱，假球殼目，葡萄座科，葡萄座腔菌（B.berengeriana）（見圖4）。

圖3 ITS目的基因瓊脂糖凝膠電泳圖Figure 3 The electrophoretogram of ITS target gene

經測序，該測序該菌株的ITS基因序列全長為544 bp，進一步將所得的序列在美國國家生物技術信息中心（National Center for Biotechnology Information，NCBI，http：//www.ncbi.nlm.nih.gov/）中進行blast同源性比較，發現與已報道葡萄座腔菌（B.berengeriana）相似性高達99%。

01-40TTCCT CCGGT TATTG ATATG CTTAA GTTCA GCGGG TATCC

41-80CTACC TGATC GAGGT CAACC TTGAG AAAAG TTCAG AAGGT

81-120 TCGTC CGGCG GGCGA CGCCA ACCGC TCCAA AGCGA GGTGT

121-160 ATTCTACTACGCTTGAGGGC TGAAC AGCCA CCGCC GAGGT

161-200 CTTTG AGGCG CGTCC GCAGT GAGGA CGGTG CCCAA TTCCA

201-240 AGCAG AGCTT GAGGG TTGTA ATGAC GCTCG AACAG GCATG

241-280 CCCCC CGGAA TACCA AGGGG CGCAA TGTGC GTTCA AAGAT

281-320 TCGATGATTCACTGAATTCT GCAAT TCACA TTACT TATCG

321-360 CATTTCGCTGCGTTCTTCAT CGATG CCAGA ACCAA GAGAT

361-400 CCGTTGTTGAAAGTTTTAGT TTATT AACTT GTTTA TCAGA

401-440 CGTCTGCGTTTACTGACTGG AGTTT GAAG GTCCT TTGGC

441-480 GGCCG GAGCC GCCAA AGCAA CAGAG GTACG TTCAC AAAGG

481-520 GTGGG AGAGT CGAGC CGGAG CTCGA AAACT CGGTA ATGAT

521-544 CCTTCCGCAGGTTCACCTAC GGAA

圖4 ITS基因同源性BLAST比對分析結果Figure 4 The result of homology BLAST comparison of ITS gene

3 病害防控技術

針對病害的發生特點和真菌病害的流行規律，新型桑葉病的防控主要從病原累積控制、防治藥劑控制和環境條件控制三方面著手。

3.1 徹底清除病原

桑園冬季開展土壤深翻，上年發病嚴重的桑園，尤其要做好桑園清潔工作，清除銷毀桑園病葉，減少次年初次侵染來源。發病初期及時摘除病葉，并帶出桑園集中處理。

3.2 適時開展藥物防治

七月份是夏伐桑園新型桑葉病害初次侵染的高峰期，抓住夏蠶結束后的有利時機，選用70%甲基托布津1000倍液或多菌靈800倍液噴霧防治，一周后再噴一次，對無病桑樹起到預防作用，對發病桑樹防治效果可達90%以上。3.3改善桑園管理，減少病原誘發因素

根據不同品種特性，密度為0.9萬～1.2萬株/hm2，種植方式以寬行窄株方式為宜；減少間作，特別是早春容易造成交叉感染的蠶豆、油菜等作物；適時進行開溝降漬，翻地除草，整枝剪梢，改善桑園通風透光條件，減少病原的誘發因素，抑制病原孢子的產生；同時，要增施有機肥，以增強樹勢，提高桑樹耐病生長能力。

3.4 合理布局，提高桑葉利用率

根據我縣的氣候特點和大田栽培新品種桑的生產規律，原有的全年五期布局更有利于提高桑葉利用效率，減少春季余葉和秋季桑葉老化，是抑制病原的繁衍、減少病原積累和減輕桑葉危害損失的最經濟適用的防治措施。2012年新型桑葉病害防控示范桑園，不僅葉發病率控制在4.8%，比同一園區內葉發病率減少15.8%，而且667 m2桑荷種量增加了0.19張，為全縣新型桑葉病的防控起到很好的示范輻射作用。

3.5 地膜覆蓋

地膜覆蓋是有效隔斷從土壤越冬的病原擴散到桑葉的最有效措施，同時對抵制雜草生長、土壤保溫保濕和促進桑樹生長作用明顯。通過地膜覆蓋，達到提高地溫、保持土壤水分，促進作物生長發育和提高作物抗病蟲害的目的。

4 討論

4.1 病原鑒定有待進一步證實

由于病原菌存在有性世代和無性世代復雜性以及接種困難性問題，致使對富克爾灰葡萄孢菌的2次室內回接試驗和1次室外回接試驗都沒能獲得成功。對葡萄座腔菌雖然進行了PCR、ITS序列測定，明確了病原及其分類學上的種屬地位，但未能完成病原菌的致病性回接試驗，還無法證實病原鑒定的準確性和科學性，因此關于致病病原的研究鑒定有待進一步證實。

4.2 存在大量的傳染源

在發病嚴重的桑園套種的玉米、蔬菜和周邊栽培的桂花樹上也發現有較多類似癥狀的病害，說明此病不僅危害桑樹，病原菌還能侵染蔓延到果、蔬、花卉等經濟作物，大量的傳染源有可能導致更多、更大的經濟損失。

［1］吳福安.桑樹病蟲害防控體系的構建［M］.北京：中國農業出版社，2006：附錄B11.

［2］國家蠶桑產業技術體系，桑樹病蟲害及防治藥劑普查方案（討論稿）.

［3］肖建京，蒯元璋，張帆，等.浙江省淳安縣發生桑葉菌核病的病原與發病規律調查［J］蠶業科學，2012，38（4）610～616.

［4］木村勝太郎.原色日本桑樹病害圖說［M］東京：東京建帛社，1979，96～97.

［5］遠藤保太郎.桑樹病理學［M］.東京：東京明文堂，1929，109～111.

［6］Qi et al.，Botryotinia fuckeliana（de Bary）Whetzel。［J］. Mycologia，1945，37：679.

［7］匡英秋，葉武光，盧衛芳等.桑輪紋病的化學防治初報［J］中國蠶業，32（4）17～19.

A new Mulberry Disease Report in Chun'an and its Prevention Control Research

XIAO Jian-jin1,FENG Hong-ping1,FENG Wei-zhong2,YAO Xian-ling1,GUAN Sheng-hao1
(1.Cocoon and Silk Corporation of Chun'an County,Hangzhou 311700，China; 2.Fenkou Forest Farm of Chun'an County,Hangzhou 311719，China)

A kind of rare fungi disease on mulberry exploded in Chun'an in the fall of 2011，and it was found in 87.4% mulberry field area in 2012.Accoding to the investigation of 16 effected quadrats,the average plant incidence and leaf incidence were 87.9%and 48.6%,and the leaf loss rate in late autumn reached to 21.2%.This article mainly researched the occurring pattern in field,pathogenic fungi species and prevention and control methods of this kind of disease.

new mulberry disease;pathogenic fungi;prevention and control methods

S888.71

A

0258-4069[2013]01-