甲苯磺酸索拉非尼片劑含量測定方法研究

劉冰松，袁昕蓉

(1.遼寧中醫藥大學附屬第四醫院，遼寧 沈陽 110101;2.遼寧省沈陽市食品藥品檢驗所，遼寧 沈陽 110013)

甲苯磺酸索拉非尼是一種多激酶抑制劑，能夠抑制腫瘤細胞的生長，臨床用于治療不能手術的晚期腎細胞癌及遠處轉移的原發肝細胞癌。其治療的耐用性良好，主要的不良反應為可控制的腹瀉、皮疹、疲乏、手足綜合征、高血壓、脫發、惡心嘔吐和食欲不振。美國食品和藥物管理局快速批準了甲苯磺酸索拉非尼作為晚期腎癌治療的新藥，也是世界上第一個批準應用于臨床的多靶點靶向治療藥物。筆者參閱文獻[1]采用高效液相色譜(HPLC)法測定自制甲苯磺酸索拉非尼片劑的含量，為甲苯磺酸索拉非尼及其制劑的進一步研究開發提供有效的檢測方法，現報道如下。

1 儀器與試藥

Agilent 1200型高效液相色譜儀(安捷倫儀器公司);AUW220D型分析天平(島津儀器制作所);KQ－300型超聲清洗器(昆山市超聲儀器有限公司)。甲苯磺酸索拉非尼原料(自制，純度為99.6%，批號為20111208);甲苯磺酸索拉非尼工作對照品(自制，純度為 99.8%，干燥失重 0.21%，批號為 20111201);甲苯磺酸索拉非尼片(自制，批號分別為 20111212，20111213，20111214);甲醇(色譜純，天津市康科德科技有限公司)，水為重蒸餾水，磷酸二氫鉀、磷酸等均為分析純。

2 方法與結果

2.1 色譜條件

色譜柱:Agilent Eclipse C18柱(250 mm × 4.6 mm，5 μm);流動相:25 mmol/L磷酸鹽緩沖液(磷酸調pH=2.5)－甲醇(30∶70);檢測波長:250 nm;流速:1 mL/min;進樣量:20 μL。

2.2 溶液制備

取甲苯磺酸索拉非尼工作對照品，配制成質量濃度為每1 mL中含甲苯磺酸索拉非尼0.1 mg的對照品溶液。取按處方配制不含甲苯磺酸索拉非尼的空白輔料，精密稱定，用流動相制成陰性對照品溶液。取自制甲苯磺酸索拉非尼片適量(約相當于甲苯磺酸索拉非尼1.0 g)，精密稱定，溶解后置100 mL容量瓶中，流動相定容，濾過，取續濾液加流動相稀釋10倍，搖勻，即得供試品溶液。

2.3 方法學考察

專屬性試驗:分別取對照品溶液、陰性對照品溶液和供試品溶液各20 μL，注入液相色譜儀，按上述色譜條件測定，記錄色譜圖。結果見圖1。

圖1 高效液相色譜圖

最低檢測限和定量限確定:當信噪比為3∶1時，最低檢出限為0.25 ng/mL;當信噪比為10∶1時，定量限為1 ng/mL。

精密度試驗:在上述色譜條件下，取對照品溶液，連續進樣6次，每次進樣20 μL。結果色譜峰面積 RSD為0.40%。

線性關系考察:取甲苯磺酸索拉非尼工作對照品約25 mg，精密稱定，溶解后置25 mL容量瓶中，用流動相稀釋至刻度，搖勻，再分別精密吸取 0.1 mL，置 50 mL 容量瓶中，取 0.1，0.5，1.0，1.5，2.0 mL，置 10 mL 容量瓶中，用流動相稀釋至刻度，搖勻，分別取各稀釋液20 μL，注入液相色譜儀，記錄色譜圖。以甲苯磺酸索拉非尼質量濃度(X)為橫坐標、色譜峰面積(Y)為縱坐標進行線性回歸，回歸方程為 Y=97.798 X－5.876 2，r=0.999 9(n=6)。結果表明，甲苯磺酸索拉非尼質量濃度在 5.1 ～200.1 μg/mL范圍內與峰面積呈良好線性關系。

加樣回收試驗:分別取甲苯磺酸索拉非尼工作對照品和甲苯磺酸索拉非尼片適量(相當于樣品含量測定項取樣量的80%，100% ，120%)，精密稱定，配制成供試液，用 0.45 μm 微孔濾膜過濾，備用。取上述供試液各20 μL進樣，記錄色譜圖。按外標法以峰面積計算回收率。結果見表1。

表1 加樣回收試驗結果(n=9)

穩定性試驗:取甲苯磺酸索拉非尼片適量，按供試品溶液的制備方法操作，制成的供試品溶液于室溫條件下放置，分別在0，2，4，8，24 h 時各進樣 20 μL。結果峰面積值 RSD 為 0.39%，表明供試品溶液在24 h內穩定。

2.4 樣品含量測定

取工作對照品和3批自制片劑各適量，按溶液制備項下方法制備供試液，進樣分析，記錄色譜圖，按外標法以峰面積計算含量。3批樣品的含量測定結果見表2。

表2 甲苯磺酸索拉非尼片含量測定結果(%)

3 討論

甲苯磺酸索拉非尼作為第一個被美國食品和藥物管理局批準用于治療晚期腎細胞癌的靶向藥物，已經成為備受關注的研究對象。本試驗中采用高效液相色譜法測定自制甲苯磺酸索拉非尼片的含量，并進行了方法學研究，結果顯示，該法可準確用于本品含量測定，為該藥的進一步研究開發提供了有效的質量檢測方法。

[1]黃自通.HPLC法測定索拉非尼含量及有關物質[J].黑龍江科技信息，2007(19):148，217.