貴陽地區(qū)1 143例孕婦地中海貧血篩查及基因檢測結果分析＊

馬星衛(wèi)，許 吟，戴 薇，李貴芳，劉興梅，陳銘希，蘇 莉，黃盛文△

（貴州省人民醫(yī)院：1.產科；2.檢驗科，貴陽550002）

地中海貧血（簡稱地貧）是一類由于珠蛋白合成障礙而引起的慢性溶血性疾病。根據合成障礙的珠蛋白類型，地貧主要分為α-地貧和β-地貧。據估計，全球約有1.7%的人是α-地貧或β-地貧基因攜帶者，每10 000出生活嬰就有4.4個地貧患者［1］。迄今，對地貧尚無理想的治療方法，開展產前篩查和產前基因診斷，防止新的受累胎兒出生，仍是目前控制地貧發(fā)生最為有效的措施［2-3］。為了解貴陽地區(qū)孕婦人群的地貧發(fā)生情況，并探討地貧產前篩查的臨床意義，作者對本院1 143例孕婦產前地貧篩查和基因診斷的結果進行分析報道如下。

1 對象與方法

1.1 對象 2010年6月至2012年3月在本院產科門診進行孕期保健的孕婦1 143例，均為貴陽戶籍，年齡19～41歲，平均（28.3±3.8）歲。

1.2 篩查方法 采用紅細胞指數分析結合血紅蛋白電泳檢測，篩查地貧表型陽性的孕婦。如MCV＜82fL和／或MCH＜27pg，列為重點篩查對象。再按血紅蛋白電泳結果進行表型分析，如 HbA2≥3.5%，HbF正常或增高，擬診為β-地貧；如HbA2≤2.5%，擬診為α-地貧；如 HbA2在2.5%～3.5%之間，擬診為α-地貧或β-地貧，或α復合β-地貧，統(tǒng)稱為α／β-地貧。

1.3 基因診斷 對地貧表型陽性的孕婦，抽取外周靜脈血2 mL，EDTA-Na2抗凝，按試劑盒操作說明提取基因組DNA，進一步做基因檢測以明確基因型。（1）α-地貧基因診斷：應用跨越斷裂點聚合酶鏈反應（Gap-PCR）檢測--SEA、-α4.2和-α3.73種常見α-珠蛋白基因缺失突變，應用反向點雜交（reverse dotblot，RDB）檢測αCS、αQS和αWS3種常見的α-珠蛋白基因點突變。（2）β-地貧基因診斷：應用RDB檢測中國人8種常見和9種少見的β-珠蛋白基因點突變，依次為CD41-42（-TCTT）、IVS-Ⅱ-654（C→T）、CD71-72（＋A）、CD17（A→T）、CD26（G→A）、-28（A→G）、-29（A→G）、CD43（G→T）、CD31（-C）、CD14-15（＋C）、Int（T→G）、CD27-28（＋C）、IVS-Ⅰ-1（G→T）、IVS-Ⅰ-5（G→C）、-32（C→A）、-30（T→C）、CAP＋40―＋43（-AAAC）。PCR擴增儀為E-CyclerTM96PCR儀，試劑購自深圳益生堂生物企業(yè)有限公司，具體操作步驟按說明書進行。

2 結 果

2.1 篩查結果 1 143例孕婦經MCV和MCH篩查表型陽性68例（5.95%）。經血紅蛋白電泳分析，擬診為α-地貧19例（1.66%），擬診為β-地貧41例（3.59%），擬診為α／β-地貧8例（0.70%），見表1。另外，篩出異常血紅蛋白2例，分別是HbJ和HbG各1例。

表1 1 143例孕婦地貧篩查情況

2.2 基因診斷 68例地貧表型陽性的孕婦經基因檢測，有63例（5.51%）確診為地貧，確診率為92.65%，其中表型為β-地貧的確診率最高（97.62%）。8例表型為α／β-地貧的孕婦，有6例均確診為α-地貧，未檢測出α復合β-地貧，見表1。63例地貧孕婦的基因型分布見表2，其中α-地貧23例（2.01%），β-地貧40例（3.50%）。23例α-地貧中，靜止性8例，標準型15例，基因型以--SEA／αα最多，占60.9%。40例β-地貧均為輕型，基因型以CD17／N最多，占45.0%，其次是CD41-42／N和IVS-Ⅱ-654／N，分別占27.5%和15.0%。

表2 63例地貧孕婦基因型分布情況

3 討 論

中國南方各省是地貧的高發(fā)區(qū)，其中廣東、廣西兩省的α-和β-地貧總發(fā)生率分別為11.07%［4］和25.30%［5］。貴州也屬地貧的高發(fā)區(qū)，該地區(qū)β-地貧的發(fā)生率已基本清楚，不同民族的發(fā)生率為2.66%～7.85%［6-8］，與本調查結果（3.50%）相吻合。目前，還沒有關于貴州省α-地貧發(fā)生率的大樣本調查結果。本課題組前期關于貴陽地區(qū)新生兒α-地貧發(fā)生率的初步調查結果為2.63%［9］，略高于本研究的結果（2.01%），這可能與調查的人群不同有關。

本研究結果顯示，貴陽地區(qū)α-地貧基因型以缺失型為主，其中--SEA／αα基因型占60.9%，與國內其他地區(qū)的α-地貧基因突變類型類似［10-12］。本組數據表明，貴陽地區(qū)的β-地貧基因突變類型以CD17（A→T）最多，其次是CD41-42（-TCTT）和IVS-Ⅱ-654（C→T），與國內其他地區(qū)的β-地貧基因突變類型明顯不同。廣東［4，12］、廣西［13］β-地貧基因突變類型以 CD41-42（-TCTT）最多，在海南黎族人中，β-地貧基因突變幾乎全是CD41-42（-TCTT）［14］。這表明即使是在國內，不同地域和人群的β-地貧基因突變譜的構成也不盡相同。

本組調查人群中的地貧表型陽性率為5.95%，確診率為92.65%，說明紅細胞指數分析結合血紅蛋白電泳檢測是地貧篩查的有效方法，尤其是MCV、MCH和HbA2定量檢測是β-地貧篩查的可靠血液學指標。本組中有5例表型陽性的孕婦未檢測出相應的珠蛋白基因突變位點，這可能是缺鐵性貧血或存在罕見突變類型所致。因此，對于這類孕婦需要了解是否存在缺鐵性貧血，同時應進一步作珠蛋白基因序列分析，排除罕見突變類型。

雖然目前還沒有治療地貧的有效方法，但地貧是可以預防的遺傳性疾病。進行產前篩查和產前基因診斷，完全可以避免中、重型地貧患兒的出生。自20世紀70年代開始，塞浦路斯政府強制實施婚前和產前篩查，已使重型地貧患兒的出生率幾乎降為零。在中國的廣東、廣西地區(qū)，也在廣泛開展婚前和產前篩查，對減少重型地貧患兒的出生起到了積極作用。貴陽地區(qū)作為地貧高發(fā)區(qū)，在地貧的預防工作方面還處于起步階段，應盡快建立地貧產前篩查和產前診斷網絡，對孕婦人群開展以紅細胞指數分析和血紅蛋白電泳技術為主的產前篩查工作，表型陽性的樣本交由有條件的醫(yī)院進一步作基因診斷和產前診斷，避免重型地貧患兒的出生。

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