類風濕性關(guān)節(jié)炎患者血清CD40L及IL-6hs-CRP表達及臨床意義

譚 軍，陳建國

（江蘇省鎮(zhèn)江市第一人民醫(yī)院：1.風濕科，2.檢驗科 212002）

類風濕性關(guān)節(jié)炎（rheumatoid arthritis，RA）是一種以軟骨組織或關(guān)節(jié)滑膜組織損傷為特征的器官特異性自身免疫性疾病，其主要的病理變化是巨噬細胞以及T淋巴細胞等慢性炎性細胞因子過度分泌，不斷滲入至滑膜組織中，導(dǎo)致關(guān)節(jié)滑膜的漸進式損傷及骨質(zhì)破壞［1-3］。RA的病因以及發(fā)病機制尚未完全明了，RA患者的炎癥過程與血清中白細胞介素-6（interleukin-6，IL-6）等細胞因子有關(guān)，各炎性細胞因子在RA的發(fā)生發(fā)展過程中起著非常重要的作用。本研究通過對RA患者外周血清IL-6、超敏C-反應(yīng)蛋白（high sensitivity C-reactive protein，hs-CRP）和T細胞CD40配體（CD40Ligand，CD40L）進行檢測，探討IL-6、hs-CRP及CD40L水平的變化與RA發(fā)病過程及病變程度的關(guān)系，以期為RA的診治提供參考性依據(jù)。

1 資料與方法

1.1 一般資料 收集2009年6月至2012年5月本院風濕科收治RA患者90例為觀察組。本研究獲得患者知情同意及醫(yī)院倫理委員會批準。病例入選標準：符合ACR于1987年修訂的RA分類標準。其中男51例，女39例；年齡38～67歲，平均（50.7±16.8）歲，病程2個月至16年，平均（6.3±5.5）年。另收集同期在本院體檢的健康志愿者90例為對照組，其中男49例，女41例，年齡36～68歲，平均（51.4±18.1）歲，病程4個月至15年，平均（6.1±5.8）年。兩組性別、年齡、病程等一般資料比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05），具有可比性。兩組研究對象均經(jīng)肝、腎功能、血糖血脂、激素、B超以及X線等檢查，排除肝、心及腎功能不全者、腫瘤及發(fā)生嚴重感染者、高血壓、具有自身免疫性及周圍血管閉塞性疾病史者、近期做過創(chuàng)傷性手術(shù)者。所有研究對象半月內(nèi)未曾使用抗凝或抗血小板藥物。

1.2 方法

1.2.1 分組 RA活動期的診斷需符合以下5項中的至少3項：（1）晨僵超過1h；（2）關(guān)節(jié)腫痛數(shù)不低于3個；（3）紅細胞沉降率（erythrocyte sedimentation rate，ESR）超過30mm／h；（4）類風濕因子（RF）高于正常值；（5）類風濕皮下結(jié)節(jié)；根據(jù)以上標準將90例RA患者分為穩(wěn)定期組（42例）和活動期組（48例）。血小板大于300×109／L判定為血小板升高的評定標準，將90例RA患者分為血小板正常組（50例）和血小板升高（40例）。

表1 RA組與健康對照組血清檢驗指標比較（±s）

表1 RA組與健康對照組血清檢驗指標比較（±s）

-：此項無數(shù)據(jù)。

組別 n BPC（×109／L） RF（IU／mL） ESR（mm／h） hs-CRP（mg／L） IL-6（pg／L） CD40L（ng／L）.6 2.5±0.8觀察組 90 283.5±56.8 40.1±7.3 40.5±10.9 9.7±3.4 7.6±2.4 8.6±2.2 t- 6.279 23.744 26.974 6.669 12.827 6.531 P對照組 90 227.7±62.3 15.3±6.7 8.2±3.2 2.8±1.5 3.7±1- 0.001 0.001 0.001 0.001 0.001 0.001

表2 RA穩(wěn)定組與活動組血清檢驗指標比較（±s）

表2 RA穩(wěn)定組與活動組血清檢驗指標比較（±s）

-：此項無數(shù)據(jù)。

組別 n BPC（×109／L） RF（IU／mL） ESR（mm／h） hs-CRP（mg／L） IL-6（pg／L） CD40L（ng／L）2.1 7.6±1.7 RA 活動組 48 292.5±56.8 41.2±8.2 45.1±11.2 10.6±2.2 8.4±2.7 9.2±2.0 t- 2.044 1.114 3.929 4.124 2.911 4.058 P RA穩(wěn)定組 42 267.5±59.1 39.5±5.9 36.5±9.3 8.8±1.9 6.9±- 0.044 0.268 0.001 0.001 0.005 0.001

表4 RA患者血小板正常組和血小板升高組檢驗指標比較（±s）

表4 RA患者血小板正常組和血小板升高組檢驗指標比較（±s）

-：此項無數(shù)據(jù)。

組別 n RF（IU／mL） ESR（mm／h） hs-CRP（mg／L） IL-6（pg／L） CD40L（ng／L）50 35.2±6.1 37.1±8.8 8.9±2.0 6.4±3.5 8.1±1.8血小板升高組 40 43.9±7.5 44.6±9.6 10.2±1.7 8.7±3.2 8.9±1.5 t- 6.070 3.858 3.272 3.217 2.253 P血小板正常組- 0.001 0.001 0.002 0.002 0.027

1.2.2 血清CD40L、IL-6及hs-CRP的檢測 于清晨空腹抽取靜脈血5mL，其中2mL保存于含乙二胺四乙酸（ethylenediaminetetraacetic acid，EDTA）Na＋的抗凝管中，以 2 500 r／min離心10min，取上清液以增強免疫比濁測量法檢測hs-CRP的濃度，酶聯(lián)免疫吸附法檢測CD40L、IL-6濃度，試劑盒均購于深圳矩英生物科技有限公司；同時進行血小板計數(shù)（blood platelets count，BPC）、RF、ESR等實驗室指標檢測。

1.3 統(tǒng)計學(xué)處理 采用SPSS 17.0軟件進行數(shù)據(jù)處理，計量資料以±s表示，組間比較采用兩獨立樣本t檢驗，率的比較采用χ2檢驗，檢驗標準α＝0.05，以P＜0.05為差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 RA組與對照組血清炎性因子比較 RA組患者外周血清BPC、RF、ESR、hs-CRP、IL-6及CD40L均明顯高于對照組，差異均具有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05），見表1。

2.2 RA穩(wěn)定組與活動組血清炎性因子比較 除RF外，RA活動組患者外周血清中BPC、ESR、hs-CRP、IL-6及CD40L均明顯高于RA穩(wěn)定組患者，差異均具有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05），見表2。

2.3 血小板正常組和血小板升高組檢驗指標比較 血小板升高組RA患者外周血清中RF、ESR、hs-CRP、IL-6及CD40L均明顯高于血小板正常組的RA患者，差異均具有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05），見表3。

3 討 論

通常認為RA是一種常見的以關(guān)節(jié)組織的慢性病變?yōu)楸憩F(xiàn)的自身免疫性疾病，眾多的炎性因子參與這一病理過程［4］。這些炎性因子之間相互作用而形成了一個炎性細胞因子網(wǎng)絡(luò)，其中任一環(huán)節(jié)都可能對RA的病理過程產(chǎn)生影響［5］。近年來，有研究表明hs-CRP、IL-6及CD40L為炎癥反應(yīng)急性發(fā)作期的重要非特異性標志物，不僅能對低水平的炎癥狀態(tài)作出區(qū)分，還對高水平炎癥反應(yīng)的發(fā)生發(fā)展及預(yù)后關(guān)系密切［6-8］。

IL-6是由184個氨基酸組成的糖蛋白，相對分子質(zhì)量23×103，主要由T淋巴細胞、單核細胞以及纖維母細胞產(chǎn)生，與腫瘤壞死因子-α（tumor necrosis factor-α，TNF-α）、IL-1等細胞因子一樣都是RA患者關(guān)節(jié)炎癥中的主要炎性介質(zhì)［9］。IL-6雖不能直接刺激軟骨細胞以及滑膜成纖維細胞產(chǎn)生前列腺素E（PGE），但能夠誘導(dǎo)TNF-α、IL-1或IL-2等細胞因子產(chǎn)生刺激而生成PGE，進而發(fā)揮致病作用［6］。金屬蛋白酶組織抑制劑（tissue inhibitor of metalloproteinase，TIMP）與基質(zhì)金屬蛋白酶（matrix metalloproteinases，MMP）之間的不平衡可導(dǎo)致關(guān)節(jié)損傷，IL-6可提高IL-1誘導(dǎo)產(chǎn)生MMP-1和MMP-3的前體化合物，即proMMP-1、proMMP-3，同時也能促進滑膜纖維母細胞產(chǎn)生TIMP，可調(diào)節(jié) MMP與TIMP之間的平衡［10］。IL-6可促進細胞間細胞黏附分子-1（intercellular cell adhesion molecule-1，ICAM-1）的表達，ICAM-1是嗜中性粒細胞黏附所必須的重要元素，黏附分子參與并介導(dǎo)多種炎性反應(yīng)的細胞黏附和跨內(nèi)皮轉(zhuǎn)移［11］。此外，IL-6還可通過肝臟產(chǎn)生hs-CRP。

hs-CRP是一種由肝細胞合成的急性期反應(yīng)蛋白，可由TNF-α、IL-1、IL-6及 PGE介導(dǎo)生成［12］。hs-CRP在正常人體外周血中的濃度極低，而在急性感染或組織創(chuàng)傷引起炎癥反應(yīng)時則迅速顯著增高。相關(guān)文獻報道hs-CRP在RA中的升高程度和關(guān)節(jié)炎活動性存在一定關(guān)系，活動期RA患者經(jīng)對癥治療后，血清中hs-CRP水平隨之明顯降低［13］。hs-CRP還能與脂蛋白結(jié)合，激活補體系統(tǒng)進而產(chǎn)生了大量的炎性介質(zhì)，氧自由基增多，致使炎癥反應(yīng)加重。體內(nèi)多種細胞如平滑肌細胞、單核巨噬細胞、血管內(nèi)皮細胞、血小板等活化后都可產(chǎn)生CD40L，通過CD40-CD40L信號傳導(dǎo)通路，誘導(dǎo)單核巨噬細胞、血管內(nèi)皮細胞等表達趨化因子、黏附分子及選擇素等參與調(diào)控極體的炎性反應(yīng)過程［14］。本研究中RA患者外周血血清中hs-CRP、IL-6及CD40L水平均明顯高于對照組的健康人群，且RA活動組明顯高于穩(wěn)定組，差異均具有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。提示hs-CRP、IL-6及CD40L可調(diào)節(jié)機體炎癥反應(yīng)，是RA發(fā)生與發(fā)展的重要危險因素。

在RA患病過程中常可觀察到血小板增高的現(xiàn)象，這種炎癥性血小板增多癥與RA患者機體IL-1β、IL-4及IL-6等多種細胞因子的活化有關(guān)。本研究RA患者中有50例血小板正常者和40例血小板升高者，對兩組患者血清hs-CRP、IL-6及CD40L進行了比較，結(jié)果顯示，血小板升高組RA患者血清RF、ESR、hs-CRP、IL-6及CD40L均明顯高于血小板正常組的RA患者，差異均具有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05），表明hs-CRP、IL-6及CD40L等可使血小板的釋放增多。

因此，聯(lián)合檢測血清hs-CRP、IL-6及CD40L，有助于臨床觀察RA患者的病情變化和治療效果，具有一定臨床應(yīng)用價值。

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