胃癌組織中腫瘤轉移抑制基因KISS-1的表達水平及對細胞外基質作用的研究

烏力吉白乙，湯媛宇，王宏偉

（1.內蒙古民族大學醫學院病歷科，內蒙古通遼028000；2.內蒙古通遼市科爾沁區第一人民醫院病歷科 028000）

胃癌是臨床上最常見的惡性腫瘤之一，而癌細胞的浸潤和轉移則是其治療的主要難點。近年有研究［1］顯示，腫瘤轉移抑制基因KISS-1與胃癌細胞的各種生物學行為具有顯著的相關性，同時可能影響細胞外基質（extracellular matrix，ECM）的表達水平，而后者也與癌細胞的分化、浸潤和轉移關系密切［2］。本次研究選取38例胃癌患者的胃癌組織與38例正常胃黏膜組織，觀察胃癌組織中KISS-1的表達水平與胃癌浸潤、轉移的關系及其對細胞外基質的作用，旨在探討其對胃癌發生、發展和轉歸的影響，為今后胃癌的靶向治療提供理論依據。

1 資料與方法

1.1 一般資料 收集2011年10月至2012年6月在通遼市科爾沁區第一人民醫院進行胃癌根治術的38例胃癌患者手術后預留的新鮮胃癌組織標本，手術前均未接受化學或放射治療。其中，男23例，女15例，年齡34～79歲，平均（58.6±11.2）歲。分化程度：分化型癌14例，未分化癌24例；浸潤深度：T1～T2（未侵及肌層）27例，T3～T4（侵及肌層）11例；無淋巴轉移者25例，有淋巴轉移者13例。收集同期胃潰瘍手術切除后經病理檢查確認的正常胃黏膜組織38例。

1.2 KISS-1檢測 每份標本取0.1g加入總RNA抽提試劑（TRIzol）中充分裂解，分離核酸與核蛋白，按TRIzol RNA提取試劑盒說明書進行后續步驟，用分光光度計測定所得的總RNA的濃度及純度。采用逆轉錄聚合酶鏈反應（RT-PCR）一步法進行基因檢測，以流式細胞術檢測KISS-1蛋白表達量。TRIzol和RT-PCR試劑盒均購自上海江萊生物科技有限公司。

1.3 ECM檢測 所有標本均以10%甲醛固定，采用石蠟包埋切片。鏈霉菌抗生物素蛋白-過氧化物酶連結法即SP法（streptavidin perosidase）染色按試劑說明書進行。以磷酸緩沖液（PBS）替代一抗作為陰性對照，以已知陽性切片為陽性對照。層粘連蛋白（LN）及Ⅳ型膠原根據顯色范圍和腺體周邊完整程度歸為連續線狀型、間斷線狀型、碎片型和完全缺失型。纖維連接蛋白（FN）則與陰性對照進行對比分析，有陽性產物沉積則為陽性。胃癌細胞、基底膜和間質中FN表達分別記為細胞FN、基膜FN及間質FN。

2 結 果

2.1 胃癌組織中KISS-1表達水平 KISS-1mRNA在胃癌組織中的陽性率為56.2%，表達水平為（0.57±0.06），其在正常胃黏膜組織中的陽性率為87.1%，表達水平為（0.83±0.02）。顯示KISS-1在胃癌組織中的表達水平明顯低于在正常胃黏膜組織中的表達水平，二者比較差異有統計學意義（P＜0.01）。同時，KISS-1在不同浸潤深度及是否存在淋巴結轉移患者中的表達量亦有顯著性差異（P＜0.05），見表1。

2.2 KISS-1對ECM表達的作用 此外，在不同KISS-1陽性水平下，ECM的主要成分：LN、Ⅳ型膠原及FN的表達情況也表現出明顯差異，KISS-1表達與ECM表達呈現正相關。不同KISS-1陽性水平下ECM表達水平比較差異有統計學意義（P＜0.05），見表2。

表1 KISS-1在不同病理學特征組中的表達水平比較

表2 不同KISS-1陽性水平下ECM的表達水平比較［n（%）］

3 討 論

腫瘤轉移抑制基因KISS-1是Kostadima等［3］在1996年從人黑色素瘤細胞株中率先發現的一種新的腫瘤轉移抑制基因。KISS-1在正常組織中有廣泛表達，而其表達缺失被認為與乳腺癌、胰腺癌、肝癌、胃癌等惡性腫瘤細胞的局部浸潤和遠處轉移等主要生物學行為具有顯著相關性［4］。

本研究顯示，KISS-1在胃癌組織中的表達水平明顯低于在正常胃黏膜組織中的表達水平，表明KISS-1的表達水平可能與胃癌的發生、發展及癌細胞的生物學行為具有高度相關性，KISS-1高表達時可抑制腫瘤的發生、發展，低表達時則促使腫瘤細胞的生長和轉移［5］。同時，在不同浸潤深度和是否有淋巴結轉移的胃癌組織中，KISS-1的表達也顯示出明顯差異。KISS-1表達的陽性率越低，胃癌細胞的侵犯越深，且KISS-1在存在淋巴結轉移組中的陽性率明顯低于無淋巴結轉移組，顯示KISS-1也影響了胃癌細胞的淋巴轉移［6］。其作用機制可能在于KISS-1基因通過降低細胞質內核轉錄因子（NF-κB）的活性，減少其與基質金屬蛋白酶-9（MMP-9）啟動子的結合，從而降低癌細胞的浸潤性和機動性［7-8］。

一般認為，腫瘤的實質對細胞外基質起決定作用，后者又反過來影響腫瘤細胞的形態、極性及運動，影響其局部浸潤和遠處轉移等主要生物學行為［9］。LN、Ⅳ型膠原及FN是ECM的主要成分。研究證實，正常胃組織中，LN及Ⅳ型膠原表現為連續線型分布，在胃癌組織中則表現為斷裂缺損。此外，在正常胃組織中各種基膜都存在完整的FN分布，而胃癌組織中細胞FN和基膜FN表達呈明顯下降［10-11］。本研究發現，不同KISS-1陽性水平下，LN、FN和Ⅳ型膠原的表達水平具有明顯差異，KISS-1的表達水平越高，LN、FN和Ⅳ型膠原的表達水平也相應提高。提示KISS-1可通過對ECM表達的影響間接作用于腫瘤的發生與發展過程［12］。

［1］Mitchell DC，Abdelrahin M，Weng JS，et al.Regulation of KISS-1metastasis suppressor gene expression in breast cancer cells by direct in teraction of t ranscription factors act ivator protein-2alpha and specificity protein-1［J］.J Biol Chem，2006，281（1）：51-58.

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［11］姚宏亮，楊竹林，李永國，等.轉移抑制基因KISS-1和KAI-1在胃癌組織中表達的原位雜交研究［J］.中華胃腸外科雜志，2007，10（3）：274-277.

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