T細(xì)胞亞群變化與慢性重型病毒性肝炎轉(zhuǎn)歸關(guān)系分析

李 健，鄒文娟，梅小平

（1.川北醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院傳染科，四川南充637000；2.重慶市中醫(yī)院腫瘤科 400021）

慢性重型乙型肝炎在中國發(fā)病率高（占重型肝炎90%以上）［1-2］，病情危重，病死率高，嚴(yán)重威脅著人們的健康。其發(fā)病機制復(fù)雜，一直是研究的難點。現(xiàn)有的慢性重型乙型肝炎診斷標(biāo)準(zhǔn)主要根據(jù)其臨床表現(xiàn)及生化指標(biāo)，診斷明確時再進(jìn)行治療為時已晚，預(yù)后不佳。若在慢性乙型肝炎（CHB）演變成慢性重型乙型肝炎早期甚至在呈重癥肝炎趨勢之前就能準(zhǔn)確預(yù)測并及時治療將大大改善患者的預(yù)后。為了解CSHB患者T細(xì)胞亞群與預(yù)后的關(guān)系，本文對川北醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院傳染科2012年1月至2012年12月收住院的CSHB患者85例進(jìn)行T細(xì)胞亞群檢測與分析。現(xiàn)將有關(guān)結(jié)果報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選擇川北醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院傳染科2012年1月至2012年12月住院的慢性重型肝炎患者，診斷符合2000年（西安）中華醫(yī)學(xué)會傳染病與寄生蟲病學(xué)分會、肝病學(xué)分會聯(lián)合修訂的《病毒性肝炎防治方案》的標(biāo)準(zhǔn)［3］，排除其他類型病毒性肝炎、原發(fā)性肝癌或其他肝臟轉(zhuǎn)移性腫瘤、酒精性肝病、藥物性肝炎、自身免疫性肝病和遺傳性肝病等［4-6］；同時排除并發(fā)有嚴(yán)重感染、3個月內(nèi)接受過免疫調(diào)節(jié)劑治療及觀察不滿2周的患者。符合并完成觀察的CSHB病例共85例。其中，男66例，女19例；年齡22～75歲，平均（43.1±11.2）歲。85例中，好轉(zhuǎn)組59例，男45例，女14例，年齡29～67歲，平均（48.0±9.8）歲；無好轉(zhuǎn)組（包括2周后死亡13例）26例，男21例，女5例；CHB組每月隨機抽取5例共60例，男45例，女15例，年齡26～63歲，平均（45.3±10.6）歲；對照組20例，均為健康體檢者，男15例，女5例，年齡23～56歲，平均（39.0±11.2）歲。

表1 治療前4組病例肝功PTA和T細(xì)胞亞群情況（±s）

表1 治療前4組病例肝功PTA和T細(xì)胞亞群情況（±s）

a：P＞0.05，b：P＜0.01，與對照組比較；c：P＜0.01，與 CHB組比較；d：P＞0.05，與無好轉(zhuǎn)組比較。

組別 n CD3（個／μL） CD4＋（個／μL） CD8＋（個／μL） CD4＋／CD8＋ ALT（IU／L） TBil（μmol／L） PTA（%）好轉(zhuǎn)組 59 1 195±412bcd 637±193bcd 567±186bcd 1.21±0.62bcd 346.52±85.63bcd 347.83±58.23bcd 28.60±6.95bcd無好轉(zhuǎn)組 26 1 186±406bc 643±206bc 575±191bc 1.19±0.59bc 339.43±89.45bc 356.75±52.36bc 29.75±5.30bc CHB組 60 1 397±385a 783±217a 629±203a 1.29±0.61a 567.19±235.92b 65.22±45.50b 85.69±19.56b對照組 20 1 495±462 815±225 667±268 1.36±0.62 26.41±9.55 15.23±6.93 95.32±3.21

表2 治療后4組病例T細(xì)胞亞群情況（±s）

表2 治療后4組病例T細(xì)胞亞群情況（±s）

a：P＞0.05，b：P＜0.01，與對照組比較；c：P＜0.01，d：P＞0.05，與CHB組比較；f：P＜0.01，與無好轉(zhuǎn)組比較。

組別 n CD3（個／μL） CD4＋（個／μL） CD8＋（個／μL） CD4＋／CD8＋ ALT（IU／L） TBil（μmol／L） PTA（%）好轉(zhuǎn)組 59 1 386±356adf 756±213adf 516±205bcf 1.35±0.52adf 215.00±65.60bdf 182.47±45.62bcf 42.65±9.32bcf無好轉(zhuǎn)組 26 905±339bc 560±197bc 405±212bc 1.62±0.54bc 136.00±73.56b，d 425.45±72.46bc 22.51±7.83bc CHB組 60 1 445±367a 796±216a 637±198a 1.36±0.56a 176.00±34.52b 23.76±14.32a 90.58±10.57a對照組 20 1 495±432 815±225 667±268 1.36±0.62 26.41±9.55 15.23±6.93 95.32±3.21

1.2 治療及檢測 入院后予以綜合保肝、血漿及對癥支持治療，出現(xiàn)并發(fā)癥時進(jìn)行相應(yīng)治療，未用免疫增強劑和糖皮質(zhì)激素等免疫抑制劑。入院后次日檢測血生化、凝血酶原活動度、T細(xì)胞亞群、病毒性肝炎血清學(xué)標(biāo)志物、腹部B超、HBVDNA、自身免疫性肝病抗體，有腹水的患者作腹水生化、常規(guī)檢測。之后每周復(fù)查血生化、凝血酶原活動度，每2周查T細(xì)胞亞群并記錄相應(yīng)表現(xiàn)，共觀察4周。生化指標(biāo)檢測采用美國德靈公司全自動分析儀，PTA檢測用日本東亞CA-1500全自動血凝儀，均由相應(yīng)公司提供配套試劑。T細(xì)胞亞群用美國BD公司calibur流式細(xì)胞儀檢測，熒光標(biāo)記單克隆抗體CD4＋T細(xì)胞，CD8＋T細(xì)胞均為美國Beckman Coulter公司產(chǎn)品。所有檢測均由專人完成（按說明書操作）。

1.3 預(yù)后判斷 治療后根據(jù)病情變化CSHB組分為好轉(zhuǎn)組和無好轉(zhuǎn)組。好轉(zhuǎn)標(biāo)準(zhǔn)：乏力、消化道及腹脹等癥狀明顯好轉(zhuǎn)；總膽紅素（TBil）較基線化驗結(jié)果下降50%以上；凝血酶原活動度（PTA）＞40%，有肝硬化基礎(chǔ)者凝血酶原活動度大于30%且較基線化驗結(jié)果上升10%以上。符合以上全部3項標(biāo)準(zhǔn)者定為好轉(zhuǎn)，否則為無好轉(zhuǎn)。基線化驗結(jié)果為入院時首次化驗結(jié)果或CSHB炎確診時檢驗結(jié)果。

1.4 統(tǒng)計學(xué)處理 應(yīng)用SPSS17.0統(tǒng)計軟件，數(shù)據(jù)均采用±s表示，計數(shù)資料比較采用χ2檢驗，均數(shù)比較采用t檢驗，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 治療前4組病例各項指標(biāo)情況 CD3、CD4＋T細(xì)胞、CD8＋T細(xì)胞、CD4＋／CD8＋：CSHB組（好轉(zhuǎn)組和無好轉(zhuǎn)組）較對照組、CHB組均有明顯下降（P＜0.01），好轉(zhuǎn)組與無好轉(zhuǎn)組比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05），對照組與CHB組比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）；ALT、TBil、PTA：CSHB好轉(zhuǎn)組、無好轉(zhuǎn)組比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05），與對照組、CHB組比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.01），CHB組與對照組比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.01），見表1。

2.2 治療4周后4組病例各項指標(biāo)情況 CSHB無好轉(zhuǎn)組CD3、CD4＋T細(xì)胞、CD8＋T細(xì)胞進(jìn)一步下降、CD4＋／CD8＋比值上升，好轉(zhuǎn)組 CD3、CD4＋T細(xì)胞、CD4＋／CD8＋比值上升，CD8＋T細(xì)胞下降。CD3、CD4＋T細(xì)胞、CD8＋T細(xì)胞、CD4＋／CD8＋比值：無好轉(zhuǎn)組與好轉(zhuǎn)組、CHB組、對照組之間比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.01）；CHB組與對照組比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）；好轉(zhuǎn)組與CHB組、對照組之間 CD3、CD4＋T細(xì)胞、CD4＋／CD8＋比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）；CD8＋T細(xì)胞下降，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.01）。ALT、TBil、PTA：CSHB好轉(zhuǎn)組好轉(zhuǎn)，無好轉(zhuǎn)組損害進(jìn)一步加重，兩組比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.01），CSHB組（好轉(zhuǎn)組和無好轉(zhuǎn)組）與對照組、CHB組比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.01），CHB組與對照組ALT比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.01），TBil、PTA差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05），見表2。

3 討 論

HBV感染人體后，所引起的肝臟和其他臟器病變以及疾病的發(fā)生、發(fā)展，與人體的免疫狀態(tài)有一定的關(guān)系。根據(jù)目前的認(rèn)識，以細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞（CTL）介導(dǎo)的細(xì)胞免疫反應(yīng)，在清除HBV和損傷肝細(xì)胞2個密切相關(guān)的過程中扮演主要角色［7］。

T細(xì)胞由不同的亞群組成，CD4＋、CD8＋細(xì)胞代表兩類主要T細(xì)胞，CD4＋T細(xì)胞主要是輔助型T細(xì)胞（Th），Th細(xì)胞受抗原刺激后分化為Th1和Th2兩種類型。Th1細(xì)胞主要分泌IL-2、IFN-γ、IL-12等細(xì)胞因子，促進(jìn)細(xì)胞介導(dǎo)的免疫應(yīng)答；Th2細(xì)胞主要分泌血清IL-4、IL-5、IL-6、IL-10等細(xì)胞因子，參與抗體介導(dǎo)的免疫應(yīng)答［8］。Th在病毒的免疫應(yīng)答中發(fā)揮中心作用，同時對病毒清除起重要作用［9］。CD8＋T細(xì)胞激活和抑制嚴(yán)格依賴CD4＋T細(xì)胞。CD8＋T細(xì)胞主要包括CTL、抑制性T細(xì)胞（Ts），Ts通過釋放分泌可溶性介質(zhì)下調(diào)體液免疫和細(xì)胞免疫。Ando等［10］在重型肝炎的動物模型中證實導(dǎo)致大量肝細(xì)胞壞死的細(xì)胞免疫主要由CD8＋T細(xì)胞所致。CTL在病毒清除以及肝細(xì)胞損傷中可能起關(guān)鍵作用［11］。在正常情況下，兩者保持一定比例，處于動態(tài)平衡狀態(tài)，維持機體細(xì)胞免疫功能。為了解CSHB患者T細(xì)胞變化情況，本試驗檢測了85例CSHB、60例CHB和20例健康對照組T淋巴細(xì)胞亞群，發(fā)現(xiàn)外周血 CD3、CD4＋T 細(xì)胞、CD8＋T 細(xì)胞、CD4＋／CD8＋：CSHB組（好轉(zhuǎn)組和無好轉(zhuǎn)組）較對照組、CHB組均有明顯下降（P＜0.01），差異有統(tǒng)計學(xué)意義，對照組與CHB組比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05），提示CSHB存在細(xì)胞免疫功能異常，肝功損害程度與細(xì)胞免疫功能異常的程度存在一定相關(guān)性。與辛紹杰等［12］報道的結(jié)果一致，與肖光明等［13］報道的對照組、CHB組患者的結(jié)果有差異，其原因是否與CHB組病情輕重不一有關(guān)，需進(jìn)一步觀察。重型肝炎患者早期免疫活性CD4＋、CD8＋T細(xì)胞引起機體強烈的細(xì)胞免疫反應(yīng)，通過釋放多種淋巴因子誘導(dǎo)炎癥反應(yīng)而損傷肝細(xì)胞。機體在免疫應(yīng)答清除體內(nèi)病毒及免疫介導(dǎo)的肝細(xì)胞損傷過程中，消耗了大量的淋巴細(xì)胞，再生補充部分不足以抵消機體淋巴細(xì)胞消耗的數(shù)量，就會造成血中淋巴細(xì)胞計數(shù)降低，亦可能存在T細(xì)胞向肝臟聚集致外周血T細(xì)胞亞群減少，在一定程度上反映機體的免疫應(yīng)答能力過強。

動態(tài)觀察T淋巴細(xì)胞亞群的改變發(fā)現(xiàn)，CSHB無好轉(zhuǎn)組CD3、CD4＋T細(xì)胞、CD8＋T細(xì)胞進(jìn)一步下降、CD4＋／CD8＋比值上升，好轉(zhuǎn)組 CD3、CD4＋T細(xì)胞、CD4＋／CD8＋比值上升，CD8＋T細(xì)胞下降，無好轉(zhuǎn)組與好轉(zhuǎn)組比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.01）；同期 ALT、TBil、PTA：無好轉(zhuǎn)組損害進(jìn)一步加重，CSHB好轉(zhuǎn)組好轉(zhuǎn)，兩組比較差異明顯（P＜0.01）。與高海兵等［14］、丁巧云等［15］報道類似，但與辛紹杰等［12］報道的結(jié)果有差異。提示CSHB持續(xù)的細(xì)胞免疫功能異常，導(dǎo)致大量肝細(xì)胞壞死，肝功損害加重。隨著細(xì)胞免疫功能的恢復(fù)，肝功好轉(zhuǎn)。

本研究表明，CSHB患者存在細(xì)胞免疫功能異常，細(xì)胞免疫功能異常的程度與肝功損害程度有一定相關(guān)性，隨著細(xì)胞免疫功能的恢復(fù)，肝功好轉(zhuǎn)。臨床上通過檢測CSHB患者外周血T細(xì)胞亞群變化趨勢對其診斷及預(yù)后的判斷有一定的指導(dǎo)意義。

［1］王宇明，陳耀凱，顧長海，等.重型肝炎命名和診斷分型的再認(rèn)識——附477例臨床分析［J］.中華肝臟病雜志，2000，8（2）：261-263.

［2］鄒正升，陳菊梅，辛紹杰，等.565例重型病毒性肝炎的臨床特點分析［J］.中華肝臟病雜志，2001，9（2）：247-248.

［3］中華醫(yī)學(xué)會傳染病與寄生蟲病學(xué)分會，肝病學(xué)分會.病毒性肝炎防治方案［J］.中華傳染病雜志，2001，19（1）：56-62.

［4］中華醫(yī)學(xué)會肝病學(xué)分會脂肪肝和酒精性肝病學(xué)組.酒精性肝病診療指南［J］.臨床肝膽病雜志，2010，26（3）：229-232.

［5］Kaplovitz N.Drug induced liver disorders implication for drug development and regulation［J］.Drug Saf，2001，24（3）：489-490.

［6］王燕，陸倫根.自身免疫性肝炎評分系統(tǒng)在臨床診斷中的應(yīng)用和評價［J］.中華肝臟病雜志，2010，18（5）：394-396.

［7］Maini MK，Boni C，Lee CK，et al.The role of virus specific CD8（＋）cells in liver damage and viral control during persistent hepatitis B virus infection［J］.J Exp Med，2000，191（8）：1269-1280.

［8］毛衛(wèi)林，陳瑜.T細(xì)胞亞群對乙型肝炎發(fā)病機制的作用［J］.國際流行病學(xué)傳染病學(xué)雜志，2007，34（2）：128-130.

［9］李鴻賓，江曉萍.測定慢性乙型肝炎患者外周血T淋巴細(xì)胞亞群的臨床意義［J］.安徽醫(yī)藥，2006，10（8）：588-589.

［10］Ando K，Moriyama T，Guidotti LG，et al.Mechanisms of class I restricted immunopathology.A transgenic mouse model of fulminant hepatitis［J］.J Exp Med，1993，178（13）：1541-1554.

［11］陳瑜，李蘭娟.乙型肝炎病毒感染的特異性CTL細(xì)胞免疫應(yīng)答研究進(jìn)展［J］.國外醫(yī)學(xué)：流行病學(xué)傳染病學(xué)分冊，2004，31（1）：27-30.

［12］辛紹杰，鄒正升，李保森，等.慢性乙型重型肝炎患者外周血各亞群淋巴細(xì)胞絕對值的特點［J］.第二軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報，2006，27（4）：413-416.

［13］肖光明，姚細(xì)安，連粵湘，等.乙型肝炎患者外周血T淋巴細(xì)胞亞群的變化［J］.實用肝臟病雜志，2005，8（1）：22-24.

［14］高海兵，許利軍，潘晨，等.慢性乙型肝炎病毒感染者外周血T細(xì)胞亞群及NK細(xì)胞的特點及意義［J］.中華實驗和臨床感染病雜志，2009，3（1）：13-19.

［15］丁巧云，俞海英，孫薇薇，等.重型肝炎外周血T淋巴細(xì)胞亞群變化［J］.江蘇醫(yī)藥，2010，36（19）：2336-2337.