細胞塊石蠟包埋及免疫細胞化學染色技術在胸腹水細胞病理學診斷中的應用價值

黃金長，張功亮，郭廣秀，王建，彭芳，陳青

(贛州市人民醫院病理科，江西贛州341000)

細胞塊石蠟包埋及免疫細胞化學染色技術在胸腹水細胞病理學診斷中的應用價值

黃金長，張功亮，郭廣秀，王建，彭芳，陳青

(贛州市人民醫院病理科，江西贛州341000)

目的探討細胞塊石蠟包埋及免疫細胞化學染色技術在胸腹水細胞病理診斷中的意義。方法收集有異型細胞及癌細胞的漿膜腔積液50例，進行離心涂片、細胞塊切片HE染色，并進行CK、CK7、CK20、CDX-2、MC、Calretinin、Vimentin、TTF-1、CA125等免疫細胞化學染色，選擇性標記。結果常規細胞涂片厚，背景不清晰；離心沉渣包埋切片細胞多而集中，背景清晰，染色鮮艷，并有一定的組織結構，免疫細胞化學染色效果較好，陽性定位準確，可靠性高。結論細胞塊石蠟包埋及免疫細胞化學染色技術，能提高胸腹水腫瘤細胞的檢出率，對腫瘤的診斷、鑒別診斷及細胞來源有重要的價值。

胸腹水，細胞塊，石蠟包埋，免疫細胞化學染色

脫落細胞病檢是目前各級醫院病理科的一個工作重點及發展方向，其中胸腹水細胞學檢查在制片及診斷技術上都存在很大困難[1]。對臨床送檢的胸腹水，國內大部分醫院采用直接離心涂片法來做出診斷。但在實際應用中，我們發現直接涂片法存在涂片厚，細胞重疊，結構不清，細胞量少而陽性檢出率低等缺點[2，3]，很難鑒別腫瘤細胞及增生的間皮細胞，并且不能判斷瘤細胞的起源。通過對胸腹水離心涂片、細胞塊石蠟包埋切片及免疫細胞化學染色技術的結合，能提高胸腹水腫瘤細胞的檢出率，對腫瘤的診斷、鑒別診斷及細胞來源有重要的意義。

1 材料與方法

1.1 樣本收集我院臨床科室送檢的胸腹水共50例。其中胸水36例，腹水14例。男性20例，女性30例。年齡在35～81歲。臨床明確有器官占位15例，胸腹水原因待查22例。

1.2 試劑所有的免疫組化試劑、即用型試劑盒及DAB顯色劑均購于福州邁新生物技術有限公司，按說明書進行實驗步驟操作。

1.3 方法(1)收集患者胸腹水，取50～300ml進行離心(2000r/min,10min)；(2)離心后棄去上清液，取少量沉淀做細胞涂片；(3)在沉淀中加入消化液體至30ml，震蕩2min后離心(2000r/min,10min)；(4)離心后棄去上清液，加入10%福爾馬林液體50ml，震蕩5～10min后離心(2000r/min,10min)；(5)離心后靜置2～3h，棄去福爾馬林液體，將沉淀用紙包裹進行脫水；(6)常規石蠟包埋、切片，蘇木精-伊紅染色，中性樹膠封固；(7)用CK(pan)、CK7、CK20、CDX-2、Calretinin、MC等抗體進行免疫細胞化學染色，胸水加做TTF-1、腹水加做CA125，以試劑盒中提供的對照作為陰陽性對照，DAB顯色。

2 結果

檢測結果均由高年資的病理醫師閱片并復習臨床資料，診斷腺癌26例，鱗癌2例，非腫瘤性增生的間皮細胞22例(結果見表1)。與常規的涂片法相比較，該法制作的切片[蘇木精-伊紅染色]色彩鮮艷，背景清晰，收集到的細胞比常規涂片多，并且有一定的組織結構(圖1)。根據不同的抗體，所表達的陽性部位與組織學相同，陽性顆粒呈棕黃色(圖2)。

圖1 腹水細胞塊石蠟包埋，H-E染色，背景清晰，染色鮮艷，并有一定的組織結構(×100)

圖2 免疫細胞化學染色(CK7)，陽性顆粒位于細胞漿內，呈棕黃色SP法(×100)

表1 50例胸腹水常規涂片及細胞塊石蠟包埋切片結果比較(n，%)

3 討論

胸腹水細胞學檢查為病理科日常工作，但部分胸腹水受其它因素的影響，對作出正確的診斷帶來一定的困難，如炎性胸腹水增生或退變的間皮細胞與某些惡性細胞尤其是腺癌細胞在形態上易于混淆[4]；細胞涂片診斷惡性胸腹水，因涂片厚，常有大量紅細胞、炎性滲出物及黏液，細胞結構重疊，背景不清晰，其敏感度只有50%～78%[5]；細胞塊石蠟包埋切片法收集的有核細胞多，細胞結構清晰，與常規涂片法相結合，大大提高了細胞學的陽性檢出率[2]；同時，用細胞塊做免疫細胞化學染色，能做連續切片，可以多種抗體組合運用或對某一特定細胞的比較觀察，以滿足診斷的需要及對其組織來源進行判別；如Calretinin、Vimentin、MC陽性多提示為增生的間皮細胞，CK7、TTF-1陽性多提示腫瘤細胞來源于肺，CK7、CA125陽性多提示腫瘤細胞來源于卵巢，CDX2、CK20陽性提示腫瘤細胞來源于胃腸道；但要說明的是，抗體的組織特異性并非絕對，多種抗體聯合進行免疫細胞化學染色并設立對照有助于克服某些抗體表達意義不明確造成的困惑[6]。

[1]陳建華,陳中,丁博.血漿凝固法胸腹水細胞塊技術的臨床應用[J].實驗與檢驗醫學,2012,30(4):412-413.

[2]郭智俊,彭桂香,潘乃梁.胸腹水沉淀物瓊脂石蠟雙包埋切片法與常規涂片法的對比[J].臨床與實驗病理學雜志,2002,18(4):437.

[3]李琳,胡海,黃曉楠.胸腹水沉淀物制片方法介紹[J].診斷病理學雜志,2003,10(1):50.

[4]肖同浩,陳壽松,熊麗萍,等.提高胸腹水腫瘤細胞檢出率的方法探討[J].臨床軍醫雜志,2009,37(2):277-278.

[5]Queiroz C,Barral-Netto M,Bacchi CE.Characterizing subopulations of neoplastic cells in serous effusions.The role of immunocytochemistry[J].Acta Cytol,2001,45(1):18-22.

[6]毛瑛玉,楊敏,劉冬戈,等.細胞塊切片免疫細胞化學染色在漿膜腔積液細胞學診斷中的應用[J].中華病理學雜志,2009,38(8):547-550.

R446.8，R392.11

A

1674-1129(2013)05-0489-02

10.3969/j.issn.1674-1129.2013.05.035