血培養陽性標本直接細菌鑒定和藥敏試驗的評價

羅永慧，吳昌志，舒向榮

(江西省婦幼保健院,江西南昌330008)

血培養陽性標本直接細菌鑒定和藥敏試驗的評價

羅永慧，吳昌志，舒向榮

(江西省婦幼保健院,江西南昌330008)

目的比較直接法與常規法對血培養陽性標本進行細菌鑒定及藥敏試驗的一致性，探討直接法菌種鑒定及藥敏試驗的可行性。方法將血培養儀報警的陽性標本涂片革蘭染色鏡檢,依據染色結果選擇不同鑒定卡，直接上機進行菌種鑒定及藥敏試驗,同時將陽性標本轉種平板分離培養,分純后的菌落按常規法上機鑒定及藥敏試驗,并對兩種方法檢測結果進行比較。結果兩種方法細菌鑒定總一致率為93.5%，其中G-菌鑒定一致率為95.4%，G+球菌一致率90.9%;藥敏試驗總符合率達94.6%。結論直接法菌種鑒定及藥敏試驗明顯縮短了檢測時間,且與常規法檢測結果符合率高，為臨床盡早抗感染治療提供了重要依據。

細菌學技術；血培養；直接法；藥物敏感試驗

菌血癥和敗血癥是臨床嚴重危及患者生命的疾病，因此快速準確的細菌鑒定與藥敏試驗是臨床診斷和治療的關鍵。為了使臨床盡快地得到有效且合理的抗菌藥敏結果，我們從全自動血培養儀報警的陽性標本中抽取菌液，直接上全自動微生物分析儀檢測，同時與陽性標本按常規方法分離菌株，再上機檢測的結果進行比較，現報道如下。

1 材料與方法

1.1 標本來源選取2012年6月至2013年6月本院發熱伴感染的住院患者的血培養陽性標本396例，同一患者多次分離的菌株不重復記入，含有復合菌的血培養陽性標本不記入。

1.2 儀器與試劑BACTEC9120型全自動血培養儀、標準樹脂血培養瓶均為美國BD公司生產；MicroScan WA96全自動微生物分析儀、G-菌鑒定及藥敏復合板(NC50)、G+菌鑒定及藥敏復合板(PC33)為美國Dade Behring公司產品。分離用血平板、中國藍平板、巧克力平板為OXOID公司產品。質控菌株：金黃色葡萄球菌ATCC29213，大腸埃希菌ATCC25922，銅綠假單胞菌ATCC27853。

1.3 方法將BACTEC 9120型血培養儀報警的血培養陽性標本，用無菌注射器抽取陽性瓶中菌液涂片、行革蘭染色鏡檢,根據涂片染色結果,取菌液5～10μl,混勻于專用接種水中,接種于專用鑒定板上，直接上機做細菌鑒定和藥敏試驗。同時轉種血平板、中國藍平板、巧克力平板(巧克力平板置于5 %CO2環境中),經18～24h形成菌落后再行涂片革蘭染色,根據氧化酶和觸酶試驗初篩,常規上機進行細菌鑒定及藥敏試驗,并對二者的結果進行比較。

2 結果

2.1 菌株鑒定結果符合率396份血培養陽性標本中,常規法鑒定出細菌385株，其中革蘭陰性桿菌221株、革蘭陽性球菌164株，另有11株為革蘭陽性桿菌、念珠菌或兩種方法都沒能鑒定出來的細菌。而直接法與常規法鑒定相符的革蘭陰性桿菌211株、革蘭陽性球菌149株；兩種方法細菌鑒定革蘭陰性桿菌一致率為95.4%(211/221)、革蘭陽性球菌一致率為90.9%(149/164)、總一致率為93.5% (360/385)，詳見表1。

表1 血培養陽性標本直接上機與轉種菌落上機鑒定結果比較

2.2 藥敏結果符合率將385株細菌藥敏試驗結果進行比較,藥敏結果直接法與常規法符合率高，總一致率為94.6%，詳見表2。其中非發酵菌有2株，鏈球菌有5株，兩種方法都沒有藥敏結果。

表2 直接法與常規法對385株菌藥敏試驗結果的符合率

3 討論

血培養是菌血癥、敗血癥臨床診斷和治療的關鍵[1]。雖然大多數醫院應用全自動血培養系統,提高了血培養陽性率,但是對血培養陽性標本進行快速準確的菌種鑒定和藥敏試驗,依舊是微生物工作者亟待解決的問題[2-4]。

血培養陽性標本按常規法進行細菌鑒定和藥敏試驗,往往需要2～3d。明確病原菌、早期診斷、早期正確治療，是菌血癥治療成功的關健。我們采用的陽性瓶肉湯直接法較傳統法至少提前1d，且與傳統法比較對396例血培養陽性標本細菌鑒定結果為菌種鑒定陰性桿菌一致率為95.4%、陽性球菌一致率為90.9%、總一致率為93.5%，與有關資料相符[5]，但高于李慧[6]所報道的兩種方法菌種鑒定總一致率83.7%的結果。結果表明對腸桿菌科的鑒定一致率較高，對非發酵菌和鏈球菌的鑒定一致率相對較低。這可能與細菌本身培養環境要求較高,在鑒定板中生長緩慢或不充分有關；血培養液中微量的血液細胞和纖維成分等也可能影響了測試板的生化反應結果。

相對于菌種鑒定結果，臨床醫生更想盡早知道藥敏結果。我們在比較血培養陽性標本細菌鑒定一致性的同時,還對兩種方法藥敏檢測結果的符合率進行了比較，發現兩者的符合率達94.6%。按照相關要求，一種新方法的建立應與參考方法進行比較，其符合率應≥90.0%。結果表明對陽性血培養標本采用直接法藥敏試驗，可以獲得較為滿意的檢測結果。

我們利用直接法省略了常規法中的細菌分離培養步驟,所需時間縮短。因此直接法克服了常規法費時的缺點，對于及早確定病原菌和藥敏結果，為臨床選擇用藥提供了及時有效的依據，避免了經驗用藥，對提高菌血癥、敗血癥等感染性疾病的治愈率具有重要的意義。

[1]謝服役.血培養標本病原菌分布及耐藥性分析[J].中華醫院感染學雜志,2013,23(1):222-224.

[2]吳紹蓮,胡辛蘭,池春燕.血培養常見病原菌的變遷和耐藥性分析[J].實驗與檢驗醫學,2013,31(2):138-140.

[3]喬亞峰,葉振東,張國雄,等.血培養常見病原菌的分布及耐藥性分析[J].實驗與檢驗醫學,2011,29(2):136-137.

[4]張鴻.武漢市青山區血培養病原菌的分布及耐藥性分析[J].實驗與檢驗醫學,2011,29(4):411-412.

[5]漆堅.全自動細菌鑒定儀對血培養陽性標本直接鑒定及藥敏試驗比較[J].國際檢驗醫學雜志,2006,27(5):397-398.

[6]李慧.兩種細菌鑒定法在臨床血液檢驗中的應用[J].現代預防醫學,2011,38(9):1705-1706.

R446.5,Q939.92,R631+.3,R515.3

A

1674-1129(2013)05-0450-02

10.3969/j.issn.1674-1129.2013.05.017

羅永慧，男，1973年11月出生，漢族，畢業于中南大學湘雅醫學院，碩士學位，專業病原生物學，主要研究方向為臨床微生物。