LA檢測隱球菌莢膜多糖抗原在隱球菌性腦膜炎診斷中的應用

劉珍瓊，熊國亮，辛茶香

(江西省胸科醫院檢驗科，江西南昌330006)

LA檢測隱球菌莢膜多糖抗原在隱球菌性腦膜炎診斷中的應用

劉珍瓊，熊國亮，辛茶香

(江西省胸科醫院檢驗科，江西南昌330006)

目的探討乳膠凝集試驗(LA)在隱球菌性腦膜炎中的早期診斷價值。方法收集56例確診的隱球菌性腦膜炎患者和25例結核性腦膜炎、病毒性腦膜炎患者的腦脊液，采用乳膠凝集試驗檢測隱球菌莢膜多糖抗原，并與真菌培養和直接鏡檢方法相比較，評價其診斷的靈敏度和特異度。結果乳膠凝集試驗、真菌培養和直接鏡檢3種方法診斷的靈敏度分別為91.1%、69.6%和73.2%，乳膠凝集試驗特異度分別為96.0%、100%、100%。結論乳膠凝集試驗檢測隱球菌莢膜多糖抗原可作為隱球菌性腦膜炎的早期診斷方法。

乳膠疑集試驗；隱球菌性腦膜炎；隱球菌莢膜多糖抗原

對于新型隱球菌性腦膜炎，傳統的診斷方法主要是鏡檢和培養，但在發病的早期鏡檢可呈正常，而培養方法耗時，且陽性率低，故在一定程度上延誤該病的診治。因此，尋找一種快速、靈敏、特異的早期檢測新型隱球菌感染的方法極其重要。本研究應用乳膠疑集試驗(LA)檢測新型隱球菌莢膜多糖抗原,探討其對隱球菌性腦膜炎的早期診斷價值。

1 材料與方法

1.1 病例來源56例病例來自2012年1月至2013年4月本院神經內科住院患者,根據病史、臨床癥狀、體征、實驗室檢查和病原學檢查，以及抗生素和抗結核藥物治療無效,改用抗真菌藥物治療有效,確診為隱球菌性腦膜炎者入選。其中男35例，女21例，年齡23～71歲。所有標本的留取均在用抗真菌藥物之前。對照組25例同樣來自本院神經內科，確診為結核性腦膜炎或病毒性腦膜炎患者入選，其中男14例，女11例，年齡20～70歲。

1.2 儀器和試劑真菌鑒定試劑條API-20CAUX(法國梅里埃生物有限公司)；隱球菌抗原乳膠凝集試劑：采用美國Immuno-Mycologies有限公司生產的隱球菌抗原乳膠檢測系統(LATEX-CRYTOCOCCUSANTIGEN DETECTION SYSTEM)；革蘭染液由貝索公司提供;BACTEC9120全自動血培養儀為美國BD公司產品。

1.3 方法

1.3.1 鏡檢墨汁染色:墨汁染色選用印度墨汁或國產優質墨汁，將腦脊液(CSF)標本離心后取沉淀物直接染色鏡檢，在黑色背景下可見到透亮的菌體和寬厚莢膜。革蘭染色:取CSF標本離心后沉淀物行革蘭染色后鏡檢，找到藍色的菌體和無色的莢膜為陽性。

1.3.2 培養和鑒定將無菌留取的腦脊液注入血培養瓶中,于BACTEC9120全自動血培養儀內監測，報警陽性的培養瓶立即轉種沙保羅培養基，生長并分純后采用真菌鑒定試劑條AI-20CAUX鑒定。

1.3.3 乳膠凝集試驗常規方法收集無菌樣本，1000×g離心15min以確保去除所有白細胞和微粒體，小心吸取腦脊液加入無菌容器(有渾濁或絮狀沉淀的標本棄去)，100℃孵育腦脊液5min備用。在環狀玻片的分離環中分別加入25μl隱球菌抗原陽性對照、陰性對照和經熱處理的腦脊液，然后在每個環中加入25μl隱球菌乳膠，用分離的涂藥棒徹底混合環中物質，室溫下手動旋轉5min后立即觀察結果。

1.3.4 結果判斷在無光背景中立即讀數并劃分等級從陰性到4+，陽性對照應該2+或更大一些，陰性對照應該低于1+，具體劃分依據如下：陰性(-):無可見團塊的均勻顆粒懸浮液；1+：乳狀背景下小但明顯塊狀；2+：輕微團塊背景下小但明顯塊狀；3+：清晰背景下大的和小的塊；4+：非常清晰背景下大塊狀。

2 結果

56例患者CSF檢查結果：鏡檢陽性41例，鏡檢包括革蘭染色和墨汁染色；真菌培養陽性39例；乳膠凝集試驗陽性53例；乳膠凝集試驗、真菌培養和直接鏡檢3種方法診斷的陽性率分別為91.1%、69.6%和73.2%。對照組26例鏡檢和培養結果均為陰性，而乳膠凝集試驗中有1例為陽性，特異度為96%。3種檢驗方法結果見表1。

表1 乳膠凝集試驗、真菌培養和直接鏡檢檢測結果比較

3 討論

近年來隨著臨床上廣譜抗生素、免疫抑制劑、糖皮質激素、腫瘤放化療的廣泛應用和近年來AIDS患者的不斷增多，隱球菌性腦膜炎患者明顯增多。大多數隱球菌性腦膜炎患者病情重、病死率高，且其臨床癥狀不典型，早期常誤診,不少患者被誤當炎癥和結核治療,部分病例當腦腫瘤手術后才確診。尤其是當前臨床常用的隱球菌腦膜炎的診斷方法敏感性低，極易延誤治療時機，導致病死率及致殘率增加。大量臨床資料也表明，隱球菌性腦膜炎的療效和轉歸很大程度上取決于早期明確診斷[1,2]。缺乏敏感而又特異的病原學檢測手段是隱球菌性腦膜炎易誤診的一個重要原因。

當前大多醫院檢測新型隱球菌方法為墨汁染色、革蘭染色和真菌培養。腦脊液涂片墨汁染色鏡檢，操作簡單、迅速，是診斷隱球菌性腦膜炎直接而快速的診斷方法，但在發病的初期，鏡檢可呈正常，需要反復多次檢查才能找到隱球菌；真菌培養方法耗時,且陽性率較低。故在一定程度上延誤該病的診治。因此,尋找一種快速、靈敏、特異的早期檢測深部隱球菌感染的方法尤為重要。乳膠凝集試驗是針對新型隱球菌莢膜多糖抗原的免疫學檢測,在早期診斷中優于傳統的培養法和鏡檢法。本研究數據顯示乳膠凝集試驗陽性率較高，真菌培養和鏡檢陽性率相對較低。本試驗結果表明利用乳膠凝集試驗檢測腦脊液中隱球菌莢膜多糖抗原的陽性率為91.1%，與Antionori等[3]報道腦脊液中隱球菌抗原檢測的陽性率為94.1%基本相符。但要注意的是，高濃度隱球菌抗原所致的鉤帶現象和體內未知非特異性蛋白對隱球菌抗原的掩蓋效應,能夠引起假陰性；同時有文獻報道，RF陽性血清和TB患者血清可引起隱球菌莢膜多糖抗原乳膠凝集試驗假陽性[4]。

綜上所述，乳膠凝集試驗通過檢測隱球菌莢膜多糖抗原對隱球菌性腦膜炎的診斷有重要臨床應用價值，優于目前常用的真菌培養和鏡檢方法，可作為隱球菌性腦膜炎的早期診斷方法。

[1]盧洪洲,曹天高,周穎杰,等.乳膠凝集試驗對新生隱球菌性腦膜炎診斷及治療的意義[J].中華傳染病雜志,2005,24(3):209-211.

[2]王馮濱,歐強,勵峰,等.新生隱球菌性腦膜炎25例臨床分析[J].中國感染與化療雜志,2010,10(1):41-43.

[3]Antinori S,Radice A,Galimberti L,et al.The role of cryptococcal antigen assay in diagnosis and monitoring of cryptococcalmeningitis[J].JClin Microbiol,2005,43(11):5828-9.

[4]王露霞,劉海英,石凌波,等.隱球菌莢膜多糖抗原乳膠凝集試驗干擾因素的探討[J].臨床檢驗雜志,2010,28(2):159.

Application of latex agglutination test for detecting cryptoceccal capsular polysaccharide antigen in diagnosis of patients w ith cryptoceccal meningitis.

LIU Zhenqiong,XIONG Guoliang,XIN Chaxiang.Department of Clinical Laboratories，Jiangxi Chest Hospital，Nanchang 330006，China

ObjectiveTo exp lore the early diagnostic value of capsular polysaccharide antigens detected by latex agglutination test(LA)in the diagnosis of cryptococcalmeningitis.MethodsThe cryptococcal capsular polysaccha antigenswere tested by LA in the CSF from 56 patientswith cryptococcalmeningitis,and 25 patients with tuberculousmeningitis or viralmeningitis.The sensitivity and specificity were compared with fungal culturemethod and directmicroscopy examination.ResultsThe detection sensitivity of latex agglutination,fungal culture and directmicroscopy examination for diagnosis of cryptococcosis was 91.1%,69.6%and 73.2%,respectively;and the specificity was 96.0%,100%and 100%,respectively.ConclusionDetection of cryptococcal antigens by latex agglutination test could be considered as a test for early diagnosis of cryptococcalmeningitis.

Latex agglutination test；Cryptoceccalmeningitis；Cryptoceccal capsular polysaccharide antigen

R446.62,R519.4,R379.5

A

1674-1129(2013)05-0446-02

10.3969/j.issn.1674-1129.2013.05.015

劉珍瓊，女，1974年1月生，碩士，副主任技師，主要從事臨床檢驗工作。