評價血清中結核桿菌特異性蛋白抗體對診斷肺結核的應用價值

張慧慧，熊國亮

(江西省胸科醫院，江西南昌330006)

評價血清中結核桿菌特異性蛋白抗體對診斷肺結核的應用價值

張慧慧，熊國亮

(江西省胸科醫院，江西南昌330006)

目的評價結核分枝桿菌特異性蛋白抗體檢測對肺結核診斷的應用價值。方法對370例活動性肺結核患者、42例非結核性肺部疾病患者和30例健康獻血員進行血清結核分枝桿菌特異性蛋白抗體檢測，同時對全部肺結核和非結核性肺部疾病患者進行痰抗酸桿菌涂片和培養。結果370例臨床診斷的活動性肺結核患者，結核分枝桿菌特異性蛋白抗體檢測陽性284例，陽性率76.8%；42例非結核性肺部疾病患者，假陽性4例，假陽性率9.5%；30例健康獻血員對照組，假陽性1例，假陽性率3.3%。檢測菌陽肺結核的敏感性為81.4%，,菌陰肺結核的敏感性為72.9%；陽性檢出率76.8%遠高于細菌學的陽性檢出率45.1%，χ2=77.72，P＜0.05,具有統計學意義。結論結核分枝桿菌特異性蛋白抗體檢測對肺結核的診斷具有較好的敏感性和特異性。

結核分枝桿菌；抗體；診斷

結核病是一種嚴重危害健康的慢性傳染病。對肺結核做出快速準確的診斷一直是臨床工作中的一個難點。雖然細菌學診斷是結核病診斷的“金標準”，但存在痰涂片抗酸染色檢測陽性率低，結核分枝桿菌培養時間長的缺點。因此尋找快速準確而簡便的診斷方法具有積極意義[1]。本文采用一種特異的結核分枝桿菌分泌性酸性磷酸酶(TB secreted acid phosphatase,TB-SA)蛋白[2]作為抗原對活動性肺結核和非結核性肺部疾病患者血清標本抗體進行了檢測，并評價其對活動性肺結核臨床診斷的應用價值。

1 資料與方法

1.1 一般資料370例活動性肺結核病人均是2012年6月至2013年5月在我院結核內科住院的患者，其中男240例、女130例平均年齡44.7歲。42例非結核性肺部疾病病人均是2012年6月至2013年5月在我院呼吸科、腫瘤科住院患者(16例COPD、13例急性支氣管炎患者、3例哮喘、10例肺癌患者)其中男28例、女14例，平均年齡66.8歲。30例健康獻血員由江西省血液中心提供。全部病例的診斷依據為細菌學、病理學、細胞學、胸部X線、生化等指標來確診。入選病例均留取晨痰和血清為檢測標本；健康獻血員只留取血清標本。

1.2 主要儀器和試劑(1)Exl800酶標儀由美國寶特公司提供。(2)酶聯免疫法檢測TB-SA抗體試劑由成都永安制藥有限公司提供，批號：20120502,20130104。

1.3 血清TB-SA抗體檢測(1)樣本稀釋：取樣本稀釋應用液450μl加待檢血清50μl，充分混勻。(2)加樣：將所需數量的板條固定于板架，各孔分別加入100μl待測稀釋樣本，每次實驗設空白對照、陰性對照、臨界對照、陽性對照，分別加入樣本稀釋應用液、陰性、臨界、陽性對照各50μl，震蕩，封板，37℃溫育10min，棄去孔內液體，將稀釋后的洗液注滿各孔，洗板5次，拍干。(3)加酶：每孔加入酶標記液50μl，震蕩，封板，37℃溫育10min，棄去孔內液體，將稀釋后的洗液注滿各孔，洗板5次，拍干。(4)顯色讀值：每孔加入顯色劑A、B液各50μl，混勻，封板，置37℃避光顯色10min，每孔加終止液50μl，混勻，用酶標儀在450nm波長下測定各孔OD值。(5)結果判斷：陽性判斷標準為(樣本OD值) /(臨界對照品OD值)≥1.2，陰性判斷標準為(樣本OD值)/(臨界對照品OD值)≤0.8，灰區樣本重復實驗，若仍落在灰區范圍內則報告陰性。

1.4 痰抗酸桿菌涂片染色、結核分枝桿菌培養及分枝桿菌菌種鑒定操作方法參見《結核病診斷實驗室檢測規程》[3]。

1.5 統計學處理對試驗數據按χ2進行分析，P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 370例活動性肺結核病患者中菌陽(涂陽或培陽)167例，菌陰203例。血清TB-SA抗體檢測菌陽肺結核的敏感性為81.4%(136/167)；菌陰肺結核的敏感性為72.9%(148/203)；診斷活動性肺結核的總敏感性為76.8%(284/370)；特異性為93.1%(67/72)。見表1。

表1 血清TB-SA抗體檢測結果分析

2.2 TB-SA抗體檢測與細菌學檢測結果比較在370例肺結核患者中，TB-SA抗體檢測陽性檢出率為76.8%(284/370)，遠高于細菌學陽性檢出率45.1%(167/370)，χ2=77.72，P＜0.05,具有統計學意義。詳見表2。

表2 370例活動性肺結核患者TB-SA抗體檢測與細菌學檢測結果比較

3 討論

目前，國內外學者把尋找特異性高的結核分枝桿抗原作為免疫診斷研究的基礎，結核分枝桿菌主要分泌蛋白所具有的特異免疫原性，使其成為結核病血清學診斷的重中之重。研究最多的包括分泌蛋白38KD、ESAT-6、CFP10、MPT63、MPT64和MPT53等[4，5]。但這些蛋白存在靈敏度低或者特異性不高的缺點，導致結核抗體的檢測在臨床上存在較高的假陰性或假陽性現象。本文采用TBSA作為抗原，由于TB-SA蛋白僅存在于致病性結核分枝桿菌中，在其他微生物(包括非致病的分枝桿菌)中均不存在，TB-SA是一種特異性分泌性蛋白，容易被機體免疫系統識別而產生特異性抗體[2]，因此，檢測TB-SA血清特異性抗體敏感性、特異性可以得到很好的保證。

本實驗活動性肺結核TB-SA抗體檢測的敏感性為76.8%，特異性為93.1%均高于畢愛笑等人[6]的報道。對菌陰肺結核患者TB-SA抗體檢測敏感性為72.9%，具有較高的診斷價值。

42例非結核呼吸疾病患者TB-SA檢測的陽性率為9.5%，在30例健康獻血員TB-SA檢測的陽性率為3.3%，全國有近半的人口感染了結核菌，不排除受試者感染結核桿菌引起血液中結核抗體存在的可能，也可能由于非結核呼吸系統患者機體免疫應答紊亂。

總之，酶聯免疫法檢測結核TB-SA抗體操作簡便，快速，價格低廉，靈敏，適合各級醫院，可以作為一種快速準確診斷肺結核的方法，值得在臨床上推廣應用。

[1]Furin JJ,Johnson JL.Recent advances in the diagnosis and management of tuberculosis[J].Curr Opin Pulm Med,2005,11(3):189-194.

[2]Saleh MT,Belisle JT.Secretion of an acid phosphatase(SapM)by mycobacterium tuberculosis that is similar to eukaryotic acid phosplatase[J].JBacteriol,2000,182(23):6850-6853.

[3]中國防癆協會基礎專業委員會.結核病診斷實驗室檢驗規程[M].北京:中國教育文化出版社,2006.

[4]kulshrestha A,Gupta A,Verma N,et al.Expression and purification of recombinant antigens of Mycobacterium tuberculosis for app lication in serodiagnosis[J].Protein Expr Purif,2005,44(1):75-85.

[5]Hoff ST,Abebe M,Ravn P,et al.Evaluation of Mycobacterium tuberculosis-specific antibody responses in populations with different levels of exposure from Tanzania,Ethiopia,Brazil,and Dermark[J]. Clin Infect Dis,2007,45(5):575-582.

[6]畢愛笑,金文國,丁元生,等.TB-SA結核抗體檢測的臨床應用評價[J].同濟大學學報(醫學版),2008,29(2):86-88.

Clinical significance of serum tuberculosis specific antigen(TB-SA)antibody in the diagnosis of pulmonary tuberculosis

ZHANG Huihui,XIONG Guoliang.Jiangxi Provincial Chest Hospital,Nanchang 330006,China

ObjectiveTo evaluate the significance of detecting serum tuberculosis specific antigen(TB-SA)antibody in the diagnosis of pulmonary tuberculosis.M ethodsTB-SA antibody in the serum samp les from 370 cases of active pulmonary tuberculosis,42 caseswith non-tuberculosis pulmonary disease and 30 healthy volunteerswere detected using enzyme-linked immunosorbentassay(ELISA).ResultsTwo hundred and eighty-four outof 370 active pulmonary tuberculosis patients had positive results of TB-SA antibody tested by using ELISA,the positive rate was 76.8%,4 of 42 patientswith other pulmonary diseases and 1 of 30 healthy people had false positive results,the false postive rateswere 9.5%and 3.3%,respectively.The sensitivity of TB-SA antibody in diagnosis of bacteriological positive and negative pulmonary tuberculosis patients were 81.4%and 72.9%,respectively. With a total sensitivity of 76.8%,the positive rate of TB-SA detection in the diagnosis of tuberculosis was 76.8%,which was far higher than thatof 45.1%by using bacteriological examination.The difference between twomethods had statistical significance(P＜0.05).ConclusionDetection of Mycobacterium tuberculosis specific antibody has better sensitivity and specificity in diagnosis of tuberculosis

Mycobacterium tuberculosis;Antibodies;Diagnosis

R446.62,R521,R378.91+

A

1674-1129(2013)05-0419-02

10.3969/j.issn.1674-1129.2013.05.005

江西省衛生廳科技資助項目(編號：20053180)

張慧慧，女，1965年生，本科，副高。

熊國亮，男，1964年生，主任技師，主要從事結核病細菌學、免疫學、分子生物學工作。