抗gp210及sp100抗體在原發(fā)性膽汁性肝硬化患者中的臨床研究

詹克勤，彭衛(wèi)華，陳建華，李俊明，鞠北華，胡意，羅忠勤

(1、婺源縣人民醫(yī)院檢驗(yàn)科，江西婺源333200；2、南昌大學(xué)第一附屬醫(yī)院,江西南昌330006)

抗gp210及sp100抗體在原發(fā)性膽汁性肝硬化患者中的臨床研究

詹克勤1，彭衛(wèi)華2，陳建華2，李俊明2，鞠北華2，胡意2，羅忠勤2

(1、婺源縣人民醫(yī)院檢驗(yàn)科，江西婺源333200；2、南昌大學(xué)第一附屬醫(yī)院,江西南昌330006)

目的探討抗gp210、sp100抗體檢測(cè)在原發(fā)性膽汁性肝硬化(PBC)患者的相關(guān)性及臨床意義。方法53例原發(fā)性膽汁性肝硬化及168例非原發(fā)性膽汁性肝硬化(非PBC)患者及50例健康對(duì)照采用免疫印跡法檢測(cè)抗gp210和sp100自身抗體并觀察其臨床評(píng)價(jià)指標(biāo)，對(duì)其結(jié)果進(jìn)行回顧性分析。結(jié)果(1)53例PBC患者采用免疫印跡法檢測(cè)gp210和sp100等自身抗體結(jié)果顯示其陽(yáng)性率分別為41.5%和17.0%；與非PBC和對(duì)照組比較，P＜0.01有非常顯著性意義。(2)53例PBC患者檢測(cè)gp210和sp100等自身抗體與非PBC及對(duì)照組比較，其臨床評(píng)價(jià)指標(biāo)結(jié)果顯示敏感性為41.5%和17.0%，特異性為97.2%和99.5%。結(jié)論P(yáng)BC患者檢測(cè)抗gp210和抗sp100抗體,對(duì)PBC的診斷及治療具有重要的作用，有助于提高PBC診療水平。

原發(fā)性膽汁性肝硬化；抗gp210抗體；抗sp100抗體

原發(fā)性膽汁性肝硬化(primary biliary cirrhosis, PBC)是一種與自身免疫相關(guān)的病因不明的慢性疾病,表現(xiàn)為肝內(nèi)小膽管進(jìn)行性破壞伴門(mén)靜脈炎癥性改變,最終導(dǎo)致肝纖維化及肝硬化。臨床上以黃疸、皮膚瘙癢、脾腫大為特點(diǎn),近年來(lái)對(duì)自身抗體的檢測(cè)如抗核包膜蛋白抗體(gp210)和抗核多點(diǎn)抗體(sp100)等對(duì)該病的診斷具有重要意義。本研究對(duì)PBC患者及非PBC患者進(jìn)行了檢測(cè)，并探討了其對(duì)PBC診斷的價(jià)值，現(xiàn)將結(jié)果分析報(bào)告如下。

1 材料與方法

1.1 材料來(lái)源53例PBC、168例非PBC患者及50例健康體檢者均為江西省婺源縣人民醫(yī)院、南昌大學(xué)第一附屬醫(yī)院自2008年1月至2012年12月門(mén)診、住院確診病例，診斷標(biāo)準(zhǔn)參照2009年美國(guó)肝病學(xué)會(huì)(AASLD)關(guān)于PBC診斷建議[1]。53例PBC患者，其中男7例，女46例，男女比例為1:7；確診時(shí)年齡22～71歲，平均48.6歲?；颊呔鶡o(wú)特殊臨床表現(xiàn)。因肝功能異常就診，確診時(shí)間為0.5～22個(gè)月，平均8.0個(gè)月；其中168例非PBC分別為31例自身免疫性肝炎(AIH)和15例原發(fā)性硬化性膽管炎(PSC)患者其中男6例，女40例，男女比例為1:7，確診時(shí)年齡為4～67歲，平均年齡為45歲；病毒性肝炎患者組63例,其中乙型肝炎41例，丙型肝炎22例，男28例，女35例，男女比例為1:1.3，確診時(shí)年齡為15～57歲，平均年齡為37歲；結(jié)締組織病患者組59例,其中系統(tǒng)性紅斑狼瘡35例,類(lèi)風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎24例，男6例，女53例，男女比例為1:8.8，確診時(shí)年齡為10～64歲，平均年齡為41歲；50例對(duì)照組均為江西省婺源縣人民醫(yī)院體檢中心健康體檢者，其中男性20例，女性30例，年齡為23～47歲，平均年齡為33歲。

1.2 試劑與方法

1.2.1 標(biāo)本的采集采集被檢患者的血標(biāo)本均為空腹不抗凝血2.0m l～3.0m l，以1000×g離心15min分離血清，取上清檢測(cè)，并將標(biāo)本放于-20℃保存待檢，避免反復(fù)凍融。

1.2.2 試劑抗gp210和抗sp100抗體采用德國(guó)歐蒙醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)診斷有限公司產(chǎn)生的免疫印跡試劑。嚴(yán)格按操作說(shuō)明書(shū)及我室的SOP標(biāo)準(zhǔn)文件進(jìn)行操作。對(duì)所檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行回顧性分析，觀察臨床評(píng)價(jià)指標(biāo)。

1.3 統(tǒng)計(jì)分析數(shù)據(jù)分析均采用SPSS 17.0統(tǒng)計(jì)軟件包進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，計(jì)數(shù)資料以例數(shù)(百分比)描述，組間單因素分析采用χ2檢驗(yàn)，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 PBC患者等采用免疫印跡法檢測(cè)自身抗體結(jié)果53例PBC、168例非PBC及50例健康體檢者采用免疫熒光法檢測(cè)gp210和是sp100抗體自身抗體檢出率結(jié)果詳見(jiàn)表1。

表1 PBC、非PBC及健康體檢者檢測(cè)各種自身抗體結(jié)果

2.2 各種疾病免疫印跡法檢測(cè)結(jié)果采用免疫印跡法檢測(cè)gp210和sp100抗體結(jié)果見(jiàn)表2。

2.3 臨床評(píng)價(jià)指標(biāo)結(jié)果53例PBC患者檢測(cè)gp210和sp100自身抗體與非PBC及對(duì)照組比較，其各項(xiàng)臨床評(píng)價(jià)指標(biāo)結(jié)果，詳見(jiàn)表3。

3 討論

PBC患者隨病情進(jìn)展,出現(xiàn)腹水、黃疸、自發(fā)性腹膜炎及肝性腦病等嚴(yán)重并發(fā)癥。對(duì)PBC患者早診斷、早治療可延緩病程進(jìn)展,改善預(yù)后。但其癥狀不典型極易造成誤診。目前，我國(guó)尚無(wú)PBC完整的流行病學(xué)資料，隨著對(duì)疾病認(rèn)識(shí)和檢驗(yàn)水平的不斷提高，其PBC發(fā)病率也逐年升高。PBC一般在50歲左右發(fā)病，多見(jiàn)于中年女性，男女之比約為1∶8[2-4]。本研究病例數(shù)男女之比為1:7，平均年齡48.6歲。PBC的確切病因和發(fā)病機(jī)制尚不清楚，目前研究發(fā)現(xiàn)，PBC發(fā)病與自身免疫、接觸化學(xué)物品、病原微生物感染、遺傳和環(huán)境因素等有關(guān)[4]，這與自身免疫病的發(fā)病機(jī)制極為相近。PBC是一種可能與自身抗體產(chǎn)生有關(guān)的慢性進(jìn)行性膽汁淤積性肝臟疾病，主要病理學(xué)表現(xiàn)為非膿性肝內(nèi)膽管慢性炎癥阻塞和匯管區(qū)淋巴細(xì)胞浸潤(rùn)，從而導(dǎo)致膽汁淤積，發(fā)生肝纖維化及肝硬化。本研究在前期工作基礎(chǔ)上，進(jìn)一步多點(diǎn)合作、擴(kuò)大標(biāo)本量對(duì)PBC患者gp210和sp100兩種自身抗體進(jìn)行檢測(cè)，結(jié)果顯示患者體內(nèi)存在gp210和sp100兩種與自身免疫病相關(guān)的自身抗體，表明免疫機(jī)制參與了PBC的發(fā)病過(guò)程，同時(shí)為PBC診斷提供了有力的自身抗體檢測(cè)依據(jù)。PBC起病緩慢而隱匿，早期癥狀多不明顯，由于缺乏對(duì)其的認(rèn)識(shí)和存在診斷水平差異等原因，容易造成臨床誤診，尤其是單純僅靠生化指標(biāo)ALP、GGT等升高更易產(chǎn)生漏診，因此，對(duì)PBC患者檢測(cè)其自身抗體更有診斷價(jià)值。

表2 免疫印跡法檢測(cè)gp210和sp100抗體結(jié)果

表3 PBC等患者抗體檢測(cè)的各項(xiàng)實(shí)驗(yàn)評(píng)價(jià)指標(biāo)結(jié)果

抗gp210抗體靶抗原是位于核孔復(fù)合物上的210kD跨膜糖蛋白,所識(shí)別的表位是gp210羧基末端上的15個(gè)氨基酸殘基[5],故名為gp210。其抗原決定簇為氨基末端的15個(gè)線樣氨基酸片段和羧基末端的氨基酸片段[6]。抗gp210抗體對(duì)PBC患者診斷雖然其敏感性不高，只有41.5%，但特異性則高達(dá)97.2%，尤其是抗線粒體抗體陰性的PBC患者中有非常強(qiáng)的診斷價(jià)值，這與文獻(xiàn)報(bào)道[5]的結(jié)果基本一致。本研究在53例PBC患者中檢測(cè)到21例gp210陽(yáng)性,疾病對(duì)照組168例非PBC患者中6例gp210陽(yáng)性,對(duì)這6例患者的臨床資料重新評(píng)價(jià)后發(fā)現(xiàn)其中3例為PBC/AIH重疊綜合征,1例是PSC患者，2例是SLE患者可能與臨床診斷有誤相關(guān)；而HBV、HCV、RA組gp210均陰性,因此可以推斷抗gp210抗體是PBC特異性自身抗體,研究結(jié)果與Nakamura等[5]的基本一致。

sp100蛋白是1個(gè)磷酸化的細(xì)胞核蛋白,電泳時(shí)sp100分子量為100KD左右。點(diǎn)狀分布于細(xì)胞核內(nèi)，sp100是一轉(zhuǎn)錄活化因子，用SV40和JC病毒轉(zhuǎn)化細(xì)胞，或者用有絲分裂原刺激淋巴細(xì)胞，以及用干擾素處理細(xì)胞都可觀察到sp100蛋白水平和mRNA水平的升高[4，7]。sp100為核多點(diǎn)型靶抗原之一。sp100是通過(guò)負(fù)向調(diào)節(jié)內(nèi)皮素1的作用來(lái)實(shí)現(xiàn)其生物學(xué)作用的。本研究對(duì)53例PBC患者檢測(cè)抗sp100抗體陽(yáng)性為9例，陽(yáng)性率為17.0%，其AIH、PSC、HBV、HCV和SLE等及對(duì)照組均陰性。

總之，應(yīng)用免疫印跡法對(duì)PBC患者檢測(cè)抗gp210和sp100自身抗體[8，9],在臨床上對(duì)PBC的診斷具有廣闊應(yīng)用前景,將會(huì)對(duì)PBC患者的診斷和治療具有重要的作用，可有助于提高PBC診療水平。

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Clinical research of anti-gp210 and anti-sp100 antibody in primary biliary cirrhosis patients

ZHAN Keqin,PENGWei-hua,CHEN Janhua,et al.Department of Clinical Laboratory ofWuyuan County People's Hospital，JiangxiWuyuan 333200,China

Primary biliary cirrhosis;Anti-gp210 antibody;Anti-sp100 antibody

R657.3+1，R446.62

A

1674-1129(2013)05-0416-03

10.3969/j.issn.1674-1129.2013.05.004

江西省科技廳支撐計(jì)劃資助項(xiàng)目(編號(hào)：2007BS23008)

詹克勤、女，1965年5月生，南昌大學(xué)醫(yī)學(xué)院、學(xué)士，副主任技師、長(zhǎng)期從事臨床免疫學(xué)相關(guān)研究。

彭衛(wèi)華,女，副主任技師，主要從事微生物及免疫學(xué)相關(guān)研究。

Absract:ObjectiveTo explore the relativity and the clinical significance of testing anti-gp210 and anti-sp100 antibody in patientswith primary biliary cirrhosis(PBC).M ethodsSamp les from 53 cases of PBC patients,168 cases of non-PBC patients and 50 cases of healthy people were collected and autoimmune antibodies including anti-gp210 and sp100 antibodieswere tested with Western blotting.Then,the clinical evaluation indexes were observed and the results were analyzed retrospectively.ResultsThe positive rates of anti-gp210 and sp100 were 41.5%and 17.0%,respectively,in 53 cases of PBC patients tested withWestern blotting.Compared with non-PBC cases and control cases,there were significant difference between these groups.The sensitivity of anti-gp210 and sp100 were 41.5%and 17.0%,respectively,and the specificity of anti-gp210 and sp100 were 97.2%and 99.5%, respectively.ConclusionDetection of anti-gp210 and sp100 has great significance in the diagnosis and treatment of PBC.