液基夾層集菌技術檢測痰標本中抗酸桿菌對診斷肺結核的應用價值

熊國亮

(江西省胸科醫院,江西南昌330006)

液基夾層集菌技術檢測痰標本中抗酸桿菌對診斷肺結核的應用價值

熊國亮

(江西省胸科醫院,江西南昌330006)

目的評價液基夾層集菌技術檢測抗酸桿菌對肺結核診斷的應用價值。方法對134例肺結核病人晨痰標本同時進行液基夾層集菌技術與直接痰涂片進行鏡檢檢測抗酸桿菌，比較兩種方法的陽性檢出率。選取10份抗酸桿菌陽性痰標本，將處理后的消化痰液接種到羅氏培養基，37℃培養，來評價液基夾層集菌技術的安全性。結果液基夾層集菌技術和直接痰涂片檢測抗酸桿菌的陽性率分別為28.4%(38/134)和16.4%(22/134)，檢測結果差異有統計學意義。安全性試驗發現經消化液處理的痰標本，培養8周后未見分枝桿菌生長。結論液基夾層集菌技術提高了肺結核病人痰標本的陽性檢出率，且操作簡單、安全性高，是一種很有推廣價值的檢測方法。

肺結核；結核分枝桿菌；痰；集菌技術

結核病仍是嚴重威脅人類健康的重大慢性傳染病，現在每年有300萬人死于結核病，結核病在全球仍呈上升趨勢。結核病人的細菌學檢查，是發現傳染源的主要途徑和手段，傳統的結核病診斷直接涂片陽性率低，結核菌培養陽性率相對高些但培養時間需要4～8周，難以用于指導臨床和治療[1-4]。近年來，一種基于液基薄層技術的結核診斷新技術—液基夾層集菌制片技術逐步發展起來，本文應用該技術對臨床肺結核病人痰標本中的抗酸桿菌進行了檢測，并評價其對肺結核診斷的應用價值。

1 材料與方法

1.1 標本來源134例肺結核病人均是2010年10月至2012年5月在江西省胸科醫院結核內科住院的病人，其中男89例、女45例平均年齡46.7歲。所有病例的診斷依據為細菌學、病理學、免疫學、胸部X線、生化等指標，入選病例符合《結核病診斷指南》對肺結核的診斷標準。囑病人留取晨痰3.0～5.0ml。

1.2 試劑和儀器液基夾層杯抗酸染色液試劑盒、夾層杯、消化液、TQ-12自動離心涂片機、KP-1快速干片機均為湖南天騎公司提供。

1.3 直接痰涂片法接《中國結核病防治規劃---痰涂片鏡檢標準化操作及質量保證手冊》[5]進行涂片、染色、鏡檢和記錄結果。

1.4 液基夾層集菌技術(1)標本處理：將直接痰涂片鏡檢后所剩余痰液，加2倍體積消化液、置室溫約30min，其間搖動數次，待消化完全，用一次性塑料吸樣管移取消化好的痰液3.0 m l于夾層杯內，放入TQ-12自動離心涂片機中4000r/min，離心8 min，傾去上清液、瀝干，將夾層杯放入KP-1快速干片機內烘干固定。(2)染色鏡檢：在夾層杯中進行抗酸染色完畢，自然干燥或烘干后，用專用取片針頂出夾層片，使涂菌面向下，置載玻片(已滴加中性樹膠)，用鑷子輕壓，防止氣泡，油鏡檢查。

1.5 液基夾層集菌技術安全性試驗取直接痰涂片陽性的消化完全痰標本(消化時間15～20min)接種到羅氏培養基斜面上(覆蓋整個斜面)，進行37℃培養，然后觀察分枝桿菌在培養基上生長情況。

1.6 統計學方法采用卡方檢驗對液基夾層集菌技術與直接痰涂片鏡檢法檢出的陽性率進行比較，P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 134例痰標本用兩種方法進行抗酸桿菌檢測結果液基夾層集菌技術陽性38例，陽性率28.4%；直接痰涂片鏡檢法陽性22例，陽性率16.4%。比較兩種方法的陽性檢出率，差異有統計學意義(χ2=66.5,P＜0.01)，見表1。

表1 液基夾層集菌技術與直接痰涂片鏡檢法檢出結果比較

2.2 10份直接痰涂片陽性的痰標本經完全消化后培養結果接種到羅氏培養基上，37℃，培養8周后均未見分枝桿菌的生長。

3 討論

液基夾層集菌技術是一種新型的集菌技術，與直接涂片法相比本質上是一樣的，該技術的創新主要體現在離心集菌、消化液處理痰標本方面，其主要特點是：一徹底消化了痰液、細胞，完全釋放出分枝桿菌；二是滅活了分枝桿菌，保障后期操作的生物安全，然后通過加熱、高速離心，將釋放出來已滅活的分枝桿菌集聚到彭氏夾層杯底部的基片上，再進行染色鏡檢[6]。

本研究中液基夾層集菌技術對134例痰標本的陽性檢出率為28.4%，而直接涂片法陽性率為16.4%，比較兩種方法的陽性檢出率，差異有統計學意義(χ2=66.5,P＜0.01)。直接涂片法中的22例陽性標本在液基夾層集菌技術全為陽性；直接涂片法中的112例陰性標本在液基夾層集菌技術檢測到16例標本陽性，該16例陽性菌量有15例為1+，1例為2+，均沒有查出3+或以上菌含量，說明直接涂片法對菌量少的標本存在漏檢情況。

消化處理液的主要成分為含氯消毒劑，其作用主要為消化痰液，釋放分枝桿菌，本方法檢測時，除消化外的其他步驟均在生物安全柜外進行，故消化液的性能直接影響方法的安全性，本研究按照本實驗室分枝桿菌培養的液化時間將10例涂片陽性的痰標本接種到羅氏培養基上，培養8周后均未見分枝桿菌的生長，說明后期整個操作流程可以滿足生物安全的要求。

綜上所述，液基夾層集菌技術提高了肺結核病人痰標本的陽性檢出率，且操作簡單、安全性高，是一種很有推廣價值的檢測方法。

[1]王蘇民.結核病及其實驗技術的現狀與展望[J].中華檢驗醫學雜志,2001,24(1):71-72.

[2]Behr MA.Warren SA.Salamon H,et al.Transmission of Mycobacterium tuberculosis from patients smear-negative for acid-fast bacilli[J].Lancet,1999,353(9151):444-449.

[3]Grzybowski S,Barnett GD,Styblo K.Contacts of cases of active pulmonary tuberculosis[J].Bull Int Union Tuberc,1975,50(1):90-106.

[4]Urbanczik R.Present position ofmicroscopy and of culture in diagnostic mycobacteriology[J].Zentralbl Balteriol Mikrobiol Hyg A, 1985,260(1):81-87.

[5]趙雁林,姜廣路.中國結核病防治規劃—痰涂片鏡檢標準化操作及質量保證手冊[M].北京:中國協和醫科大學出版社,2009:7-14.

[6]宋紅煥,季明,唐國鋒,等.液基夾層杯技術用于基層實驗室結核病診斷的可行性研究[J].中國防癆雜志,2012,34(7):441-444.

App lication value of liquid-based interlayer vessel technique in detection of acid-fast bacilli in the diagnosis of M ycobac-terium tuberculosis

XIONG Guoliang.Jiangxi Provincial Chest Hospital,Nanchang 330006,China

ObjectiveTo explore the value of detecting acid-fast bacilliby liquid-based interlayer vessel technique in the diagnosis of pulmonary tuberculosis.MethodsA total of 134 cases ofmorning sputum specimens from pulmonary tuberculosis patientswere detected by liquid-based interlayer vessel technique and direct smearmethod simultaneously.The positive rates of the twomethodswere compared.Ten acid-fast bacilli positive sputa were treated with digestion liquid,then the digestive sputa were inoculated at Roche medium and cultured at 37℃.The security of liquid-based interlayer vessel technique was evaluated by preparing the growth ofmycobacteria.ResultsThe positive rates of detecting acid-fastbacilli by using liquid-based interlayer vessel technique and direct smearmethod were 28.4%and 16.4%,respectively.There was significant diference between the two methods(P＜0.05).The sputum samples treated with the digestive liquid were not found the growth ofmycobacteria after 8 weeks’culture.ConclusionThemethod of liquid-based interlayer vessel technique can improve the positive detection rate in TB patients.It is a simple and safemethod,and has extension value.

Pulmonary tuberculosis;Mycobacterium tuberculosis;Sputum;Liquid-based interlayer vessel technique

R446.5,R521,R446.19,R378.91+1

A

1674-1129(2013)05-0412-02

10.3969/j.issn.1674-1129.2013.05.002

江西省衛生廳科技項目(編號：20091266)

熊國亮，男，1964年10月生，主任技師，主要從事結核病的細菌、免疫、分子生物學工作。