當歸補血湯促血管新生的實驗研究進展

景海波 潘立群

（1.南京中醫藥大學，江蘇 南京 210029；2.南京中醫藥大學第一附屬醫院，江蘇 南京 210029）

當歸補血湯出自金元時期李東垣的《內外傷辨惑論》，其問世以來一直作為補氣生血的經典名方，在臨床上廣泛應用于各個系統疾病中。隨著中醫現代化進程的不斷深入，該方在促血管新生的研究方面，國內學者已進行了較多的實驗研究，并對其作用機制進行了探討。現將當歸補血湯促血管新生的實驗研究進展概述如下。

1 立方基礎及配伍意義

當歸補血湯由黃芪、當歸按5∶1組成，“重用黃芪大補脾肺之氣，以資氣血生化之源”，符合“有形之血生于無形之氣”的理論，又配伍當歸養血和營，使陽生陰長，氣旺血生，為補氣生血的名方。通過現代技術，從化學和藥理指標方面研究發現，當歸補血湯不管從配伍比例還是有效組分的溶出度、生物活性等方面均體現出組方之嚴謹，配伍之精當。

王文萍等[1]從藥動學角度研究發現，黃芪合用當歸后增強了黃芪中黃芪甲苷在體內的活力，提前了黃芪甲苷發揮功效的進程，體現了當歸臣藥的輔佐之功。金芳等[2]采用反相高效液相色譜法測定不同配伍比例的當歸補血湯中阿魏酸煎出率，結果發現黃芪與當歸按5∶1配比時，阿魏酸煎出率最高，還發現黃芪與當歸按5∶1配比時對提高小鼠胸腺指數作用最強。張子忠等[3-4]采用擬合定量技術與聯用反相高效液相色譜（RP-HPLC）與二極管陣列檢測器（DAD）技術，分別對黃芪、當歸以及當歸補血湯研究發現，當黃芪用量變化時，全方中黃芪、當歸的物質組分濃度也有一些變化，這種變化為物質組分間發生關聯反應，產生新的物質提供了重要條件。由此可見，當黃芪、當歸用量變化時，復方中的物質組分質變現象不同，究其是何成分，有待今后進一步研究。

趙奎君等[5]對當歸補血湯原方進行煎煮，通過一系列的化學檢測、生物活性研究結果顯示，無論是黃芪中的黃芪甲苷、毛蕊異黃酮、芒柄花素，還是來源于當歸的阿魏酸、藁本內酯；或者總黃酮、總皂苷、總多糖等有效組分，共煎的當歸補血湯的含量均高于單煎的黃芪、當歸及“黃芪+當歸”分煎后重組的混合物。說明中藥復方“分煎”和“共煎”并不是“1+1=2”的簡單數學關系。并且在免疫調節、促紅細胞生成素生成、增強類雌激素活性以及對骨骼細胞生物活性的影響方面，共煎的當歸補血湯與黃芪、當歸、“黃芪+當歸”分煎后重組的混合物相比均有更強的生物活性。甚至研究發現免疫相關因子IL-2、IL-6、IL-10僅在共煎的當歸補血湯條件下才顯現出特殊的活性。由此，趙氏等大膽推斷，黃芪當歸的多種活性成分在共煎過程中形成“雞尾酒”式的協同作用，使共煎的當歸補血湯顯現出獨特的活性和療效，而簡單的 “黃芪+當歸”分煎的效果是無可比擬的。

綜上所述，當歸補血湯組方簡單，配伍配比精當，同時現代研究亦表明，復方中黃芪、當歸的多種活性成分在共煎時有協同作用，其促進血管新生的黃芪甲苷、黃芪多糖、阿魏酸的含量比單煎含量要多，不僅揭示了古方的科學內涵，同時為研究復方促進血管新生提供了理論依據。

2 體外實驗研究

雷燕等[6]建立離體培養的人臍靜脈內皮細胞（HUVEC）模型，探討黃芪、當歸及其組方對HUVEC增殖和細胞周期的影響。結果表明，黃芪、當歸能促進細胞增殖及DNA合成，兩藥配伍應用，即組成當歸補血湯時具有協同效應，提示了在缺血心肌新生血管的發生和發展中可能具有一定的作用。根據當歸補血湯重用黃芪的方意，雷燕等[7]又通過制備雞胚絨毛尿囊膜（CAM）模型，觀察應用黃芪與當歸5∶1配比的含藥血清后CAM血管生成的情況。結果顯示：黃芪與當歸5∶1配比合用后，在血管生成表現以及血管計數方面，均明顯優于生理鹽水對照組及其他配比組。黃芪與當歸按5∶1配伍具有較好的促進CAM新生血管生成的作用。另外，劉清君等[8]直接將當歸補血湯超濾膜提取物過載體加到CAM上，發現能明顯促進血管新生，且作用與劑量呈正相關，以0.3g/L作用最顯著，但與表皮生長因子（EGF）比較，促CAM血管新生作用相對較弱（P<0.05）。由此當歸補血湯促血管新生的作用在體外實驗中得到很好的證明。

3 體內實驗研究

苗明三等[9]發現當歸補血湯可拮抗通過放血和環磷酰胺所致氣血雙虛模型大鼠胸腺和脾臟的病理損傷，可增加胸腺皮質厚度、皮質細胞數及脾小葉淋巴細胞數。胸腺、脾臟均是人體重要的免疫器官，含有大量的B、T細胞，是進行特異免疫應答的場所，提示當歸補血湯對氣血虧虛型機體的免疫增強作用。吳建新等[10]對黃芪、當歸及其配伍對大鼠紅細胞電泳、血紅蛋白的影響的實驗研究表明，黃芪、當歸能升高血虛型紅細胞壓積，增加紅細胞計數，從而體現了當歸補血湯對血液的影響。楊長春等[11]建立鼠動脈骨皮脫落模型，應用形態學觀察和在基因水平的研究，發現黃芪和當歸單獨及聯合使用均可不同程度地抑制內皮損傷所致的內膜增生，改善血液循環，其機制與保護血管內皮、促進NO合成及抑制FAK基因表達和活化有關。秦臻等[12]在探討當歸補血湯對兔動脈粥樣硬化的機制研究中發現，當歸補血湯抗動脈粥樣硬化的作用與促進骨髓內皮祖細胞的數量和活性密切相關。以上研究表明，當歸補血湯可通過調節免疫功能，促進血管內皮細胞、血細胞、血紅蛋白等方面改善組織缺血狀態，體現了傳統中醫學“補氣生血”的基本理論。因此，當歸補血湯在促血管新生方面有著廣泛的應用前景。

4 作用機制研究

血管新生是一個復雜的多步驟生物學過程，涉及多種細胞（內皮細胞、血管壁細胞、炎性細胞等），是細胞與細胞因子、細胞外基質及蛋白水解酶等之間相互作用的結果。機體受眾多的正性與負性調節因子的控制，即存在著多種促進血管新生的因素，同時也存在多種抑制血管新生的因素，兩者的平衡使血管生成維持在生理范圍，這一系列過程包括細胞外物質降解，內皮細胞遷移及增殖，毛細血管形成與吻合等。當歸補血湯具有促進造血和血管生成的作用已得到證實，但其作用機制仍不明確。雷燕等[13-14]研究表明，當歸補血湯具有增加缺血心肌微血管密度和促進血管生成因子表達，促進血管內皮細胞增殖的作用，使血管密度增加，其機制尚不清楚。

王培利等[15]將當歸補血湯含藥血清作用于常規培養和低氧培養的人臍靜脈內皮細胞（HUVEC），觀察其表面VEGF受體的變化以及VEGF mRNA的表達，結果發現益氣活血之當歸補血湯可以上調VEGF受體以及VEGF mRNA的表達。VEGF是一類多功能生長因子，VEGF和受體結合后最明顯的生物學效應是促使內皮細胞有絲分裂，誘導血管內皮細胞增殖和遷徙，增殖和遷徙的內皮細胞又分泌其他生長因子，一方面作用于非內皮細胞，促進它們的有絲分裂，以此和內皮細胞形成新生血管，另一方面還可以使非內皮細胞分泌VEGF，再通過旁分泌機制作用于內皮細胞。從而為當歸補血湯促血管新生的體外作用機制提供了理論證據。同時表明當歸補血湯促血管新生的效應是一種調節作用機制，這也符合中醫整體調節的特征。

張瑩雯等[16]研究結果顯示，當歸補血湯可以有效地降低糖尿病腎病大鼠腎小球和腎小管TGF-β1mRNA表達，進而減輕ECM積聚和腎臟肥大。TGF-β是血管新生重要的調節因子，該實驗表明當歸補血湯對糖尿病大鼠腎臟病變的保護作用可能是通過調節腎小球和腎小管血管的改變而實現的。

秦臻等[17]也通過觀察當歸補血湯對兔動脈粥樣硬化模型外周血內皮祖細胞（EPCs）功能及血清血管內皮生長因子（VEGF）、基質細胞衍生因子 1（SDF-1）表達的影響，發現當歸補血湯能明顯升高家兔血清VEGF和SDF-1水平，且EPCs的增殖、黏附、遷移和形成小管能力均有增強。EPCs在血管生成中扮演主要的角色，它參與血管內皮損傷后的再生與修復，VEGF本身具有促血管新生的作用，而SDF-1也是影響EPCs向內皮細胞分化的主要因子，研究證實了當歸補血湯對EPCs的調節作用，其機制可能通過維持循環VEGF和SDF-1水平來參與EPCs活性的調控。

另外，李亞芹等[18]通過觀察當歸補血湯對高尿酸血癥大鼠血管內皮細胞功能的影響中發現，當歸補血湯能降低尿酸從而改善血管內皮細胞功能，其機制可能與提高超氧化物歧化酶（SOD）活力，降低過氧化脂質丙二醛（MDA）有關。

綜合目前文獻研究所示，其作用機制仍不明確，初步分析可能為：一方面，當歸補血湯中黃芪多糖、黃芪皂苷、阿魏酸等有效成分具有益氣養元、促進血管生長的作用[19-21]，其機制與促進血管內皮生長因子、轉化生長因子等生長因子的表達，提高組織血細胞、血紅蛋白和羥脯氨酸含量等相關；另一方面，當歸補血湯作為復方的整體能調節免疫細胞、基因活性及生長因子，保護血管內皮、促進NO合成、刺激內皮祖細胞等作用應是其主要原因。當歸補血湯中沒有某一部分、部位或單體能代表全方功效及其物質基礎[22]，當歸補血湯促進血管新生的作用應歸結于湯劑整體，這與中醫的整體觀及現代復雜性系統理論不謀而合。

5 結語

中醫學認為，氣血是構成機體和維持生命活動的核心，氣血與機體健康、疾病和生命的關系極為密切。當歸補血湯是一首組方簡單、療效確切的補氣生血方，這里的血，不是單純靶點和物質意義上的血（Blood），而是體現出基于審證求因的病機概念，其補氣生血的基礎表征是通過促進新生血管的生長，以增加物質能量的產生、交換與耗散所表現出來的那種氣血旺盛的功能態[23]。相反，有些疾病過程中伴有血管新生不足，無法滿足機體組織修復或生長需要，如心肌缺血側支循環代償建立不足、創傷和骨折愈合緩慢、閉塞性脈管炎等，這類疾病需要促血管新生治療。研究表明許多中藥能通過影響血管調控因素，調節血管新生，從而有效治療血管新生異常的疾病。

有關當歸補血湯促進血管新生的藥理研究日趨活躍，目前已取得一定進展，尤其是對黃芪及當歸的單體研究較多，而從中醫原創性理論和系統科學思維角度而言，補氣生血的功能應當在當歸補血湯類的整體系統中才能實現，孤立靶點的思路并不適合中醫這一系統科學的研究。但目前多數研究集中在體內、外動物整體、器官、細胞等水平，在分子、受體、靶作用點的研究還較薄弱，有待細致深入。隨著分子生物學理論和技術在醫學領域的廣泛應用，當歸補血湯補氣生血機理將在分子水平深入研究，充分開發和利用中醫中藥，使樸素的中醫學理論得到現代最新科學的闡述。

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