RRM1在宮頸癌中的表達及意義

劉愛華

RRM1在宮頸癌中的表達及意義

劉愛華

目的 探討RRM1在宮頸癌組織中的表達水平與宮頸癌發生、發展的關系。方法 用逆轉錄聚合酶鏈反應(RT-PCR)方法檢測35例宮頸癌組織、28例宮頸上皮內瘤變組織(CIN)和10例正常宮頸組織中RRM1 mRNA表達情況。結果 宮頸癌組織中RRM1 mRNA的表達顯著高于正常宮頸和CIN組織(P＜0.05)。宮頸癌組織中RRM1的表達水平與分化程度相關, 隨著宮頸癌組織分化程度的降低RRM1的表達增強(P＜0.01)差異均具有統計學意義。結論 RRM1在宮頸癌的發生發展中起重要作用,有望成為宮頸癌新的早期診斷指標。

宮頸癌；宮頸上皮內瘤變；RRM1

在女性的惡性腫瘤中, 宮頸癌為女性生殖道腫瘤的首位。目前認為, 腫瘤的發生與DNA修復基因的修復能力下降密切相關。RRM1基因屬于新近發現的DNA修復基因, 它為DNA修復提供必須的前體。因此研究RRM1的表達水平與宮頸癌的發生、預后的關系有重要的臨床意義。作者收集宮頸癌患者手術切除的標本, 同時收集正常宮頸組織及不典型增生組織(CIN)作為對照, 通過RT-PCR方法在mRNA水平上了解RRM1在宮頸癌組織中的表達情況, 探討其與宮頸癌發生發展的關系及臨床意義。

1 資料與方法

1.1 一般資料 RT-PCR標本：35例新鮮宮頸癌組織標本取自青島大學醫學院附屬醫院婦科2009年1月至2010年7月因宮頸癌行手術治療的患者, 臨床分期按國際婦產科聯盟(FIGO)2000 年修訂的標準, I期15例, II期12例, III期8例。宮頸癌病理分級按WHO的分級標準, 高分化11例, 中分化11例, 低分化13例。另取宮頸上皮內瘤樣病變(CIN)標本28例(其中CIN I 5例, CIN II 11例, CIN III 12例), 因子宮肌瘤行宮頸切除手術患者的正常宮頸組織10例, 新鮮標本凍存于-80℃超低溫冰箱備用。

1.2 主要試劑 Trizol為Gibico公司產品, 反轉錄試劑盒為Fermentas公司產品。引物序列：RRM1(265bp)：上游引物(5’-TGT GGA GAT GGC TGT GAC-3’), 下游引物(5’- CAG GAT CCA CAC ATC AGA CA -3’)； β-actin(229 bp)：上游引物(5’-GGA CTT CGA GCA AGA GAT GG-3’), 下游引物(5’-TGT GTT GGC GTA CAG GTC TTT G-3’)。 引物由北京賽百盛基因技術有限公司合成。

1.3 實驗方法 RNA提取和RT-PCR：取新鮮宮頸鱗癌組織80～100 mg 于液氮中速凍、玻璃勻漿器徹底勻漿, 按Trizol試劑盒說明書裂解抽提總RNA、異丙醇沉淀、DEPC水溶解、逆轉錄合成cDNA。PCR反應條件為：預變性94℃ 5 min；擴增反應變性94℃, 30 s, 退火溫度RRM1為55℃, β-actin為58℃, 45 s, 延伸72℃, 45 s, 共30個循環；最后延伸72℃, 5 min。取5 μl PCR擴增產物于含5 mg/l溴化乙啶(EB)的1.8%瓊脂糖凝膠電泳, 凝膠圖形分析儀計算平均熒光強度, 以β-actin作內參照, 計算相對值。

1.4 統計學方法 應用SPSS13.0分析軟件包對數據進行處理。采用方差分析、Kruskal-Wallis H檢驗、χ2檢驗及Fisher精確檢驗法進行分析。以P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 RRM1 mRNA在正常宮頸上皮、CIN和宮頸癌組織中的表達 宮頸癌組織中RRM1 mRNA的表達水平(0.65±0.37)明顯高于正常宮頸組織(0.28±0.13)和CIN組織(0.47±0.21)； CIN組織中mRNA表達水平也高于正常宮頸組織；差異有統計學意義(P＜0.05)。

2.2 RRM1 mRNA表達與CIN分級的關系 RRM1 mRNA在CIN I級組織中僅有弱陽性表達(2/10, 20.0%), 在CIN II級和CIN III級組織中既有弱陽性表達也有陽性表達, RRM1 mRNA的陽性表達率分別為41.7%(5/12, CIN II級)和71.4%(10/14, CIN III級)。隨著CIN組織分級的增加, RRM1 mRNA的表達強度也增加；不同分級的CIN組織中RRM1 mRNA表達的差異具有統計學意義(P＜0.05)。

3 討論

近年來, 人們發現DNA修復和復制的缺陷是細胞發生癌變的重要機制［1］。如果核苷酸損傷未得到及時、有效的修復可引起基因不穩定性的增加, 進而引起腫瘤的發生, 故可以推斷DNA損傷修復能力與癌癥發生之間存在一定的關系。RRM1是最近被廣泛關注的一個基因, 作為核糖核苷酸還原酶的其中一個亞單位, 在DNA修復、細胞的增殖、惡性腫瘤的進展、轉移等眾多細胞活動中扮演著重要角色［2］。

本研究采用RT-PCR方法檢測RRM1在宮頸癌中的表達, 結果顯示, RRM1 mRNA在正常宮頸上皮、CIN 組織中和宮頸癌中的表達程度呈進行性的增加, 表明宮頸癌組織中存在基因損傷使DNA修復基因的表達增加, 這一結果符合癌變模型假設, 認為癌是由于進行性基因損傷在上皮細胞內積聚的結果。因此, 本研究提示RRM1表達的增多與宮頸癌的發生有關。RRM1在CIN組織中的表達與CIN的分級有關, CIN組織分級越高, RRM1的表達越多, 說明RRM1參與了宮頸癌的早期發展過程, 提示其有可能成為較好的宮頸癌早期診斷的分子標記物。

［1］ Burton TR, Kashour T, Wright JA, et al.Cellular signaling pathways affect the function of ribonucleotide reductase mRNA binding proteins: mRNA stabilization, drug resistance, and malignancy (Review) .Int J Oncol, 2003, 22(1):21-31.

［2］ Jordan A, Reichard P.Ribonucleotide reductases .Annu Rev Biochem.1998(67):71-98.

265600 山東省蓬萊市人民醫院婦產科