CDC6、MCM7及HPV16E7在宮頸鱗癌中的表達

劉玖玖

CDC6、MCM7及HPV16E7在宮頸鱗癌中的表達

劉玖玖

目的 觀察CDC6、MCM7及HPV16E7在宮頸鱗癌中的表達異常情況和CDC6、MCM7的表達相關性。方法 采用免疫組化方法對12例正常宮頸組織, 44例宮頸上皮內瘤變(CIN), 32例子宮鱗癌組織進行研究。結果 三者隨著病變的升級表達陽性率逐漸升高, 且在正常宮頸組織、CIN I～Ⅱ、CINⅢ與子宮鱗癌組織相比差異具有統計學意義(P＜0.05), 且CDC6、MCM7在宮鱗癌組織中表達呈正相關(r=0.712, P＜0.05)。結論 通過對以上3個因子的檢測, 輔助臨床宮頸癌的診斷與治療, 并對預后的評價起著重要的指導作用。

CDC6；MCM7；HPV16E7；宮頸鱗癌

目前認為宮頸癌及癌前病變是一個多因素、多步驟的疾病, 而HPV感染是其主要病因, 99.7%以上的宮頸癌合并HPV感染, 其中以HPV16最常見, 占40%～60%。本研究采用免疫組化方法對不同宮頸組織中三者的表達情況進行研究, 以探討它們在宮頸鱗癌發生、發展中的相互關系。

1 材料與方法

1.1 組織標本 取自本院婦科2008年1月～2009年8月的住院患者中正常宮頸組織12例和經病理證實的CIN I～Ⅱ12例、CINⅢ32例、子宮鱗癌32例進行研究, 鱗癌患者術前均未經化療和放療。

1.2 試劑 均購自北京博奧森生物技術有限公司。

1.3 實驗方法 免疫組織化學法采用S-P法, 一抗濃度CDC6為1：100, MCM7為1：200, HPV16 E7為1：50, 采用磷酸鹽緩沖液(PBS)代替一抗作為陰性對照。

1.4 結果判斷標準 三者陽性表達按著色程度分為：染色與背景相似者為0分, 著色淺、略高于背景者為1分, 中度著色、明顯高于背景者為2分, 強染、著深棕色者為3分。按陽性細胞數量分為：陽性細胞數＜10%為0分, 10%～50%為1分, 51%～75%為2分, ＞75%為3分。兩項相加后分4級：(-)為0～1分, (+)為2分, (+ +)為3～4分, (+ + +)≥5分。

1.5 統計學方法 根據資料類型采用χ2檢驗, P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 CDC6、MCM7、HPVl6E7染色結果 CDC6、MCM7陽性表達多定位于細胞漿和/(或)細胞核, 呈黃色或棕黃色, HPVl6E7 陽性細胞主要彌漫性或散在性分布, 細胞核染色呈黃色或棕黃色, 較深。

2.2 CDC6、MCM7、HPVl6E7在正常宮頸組織、CIN I～Ⅱ、CINⅢ、子宮鱗癌組織中的表達情況 CDC6的表達陽性率分別為16.7%、41.7%、71.9%、87.5%；MCM7分別為16.7%、50%、78.1%、90.6%；HPV16E7分別為25%、33.3%、81.3%、93.75%。

2.3 CDC6、MCM7在不同宮頸組織中的表達相關性 兩者在正常宮頸組織、CIN I～Ⅱ、CINⅢ、子宮鱗癌組織中的表達呈正相關(r=0.712, P＜0.05)。

3 討論

宮頸癌是女性生殖系統的常見惡性腫瘤, 嚴重威脅女性的健康和生命, 近年來其發病率不但上升且有年輕化趨勢。微小染色體蛋白(MCMs)決定著染色體的復制能力, MCM7水平的高低直接反映了細胞的增殖活性, 檢測它將有助于將不典型性增生細胞與那些反應性改變的細胞區分開來。Ohtain等提出MCMs蛋白的表達調控主要是通過E2F結合到啟動子的多個E2F位點。MCM裝載因子CDC6與ATP的結合和水解對于DNA的復制是必需的, 受E2F轉錄因子的調控。目前公認HPV病毒DNA整合進入宿主細胞基因組中是細胞發生惡變的重要步驟, E7蛋白是HPV的主要轉化蛋白,與控制細胞周期有關的腫瘤抑制蛋白視網膜母細胞瘤蛋白(Rb)親和力極高, E7與Rb結合使Rb-E2F復合物解離, 導致細胞周期失控而發生永生化［1］, 還可使游離的E2F結合到啟動子的多個E2F位點, 又可上調MCM7、CDC6的表達, 進一步導致腫瘤細胞的出現和發展。本實驗說明宮頸由正常向浸潤癌進展的過程中有越來越多的細胞進入增殖周期, 可見MCM7、CDC6、HPV16E7水平的高低直接反映了細胞的增殖活性, 且三者的高表達是宮頸癌發生的早期事件, 與Brake等及Murphy 的研究結果相似, 同時也證實了兩者在不同宮頸組織中的表達呈正相關, 提示它們在宮頸炎-癌前病變-宮頸癌的發展過程中具有協同作用。因此可將三者作為對宮頸癌前病變和宮頸癌有診斷價值的標記物, 它們在反映腫瘤細胞的增殖活性方面有一致性, 其聯合檢測將有助于進一步完善宮頸癌前病變的篩查和診斷。

4 展望

MCM7在評價腫瘤增殖和診斷、預后上是較為可靠和有用的指標, CDC6作為MCM裝載因子, 通過對兩者的聯合檢測, 可以輔助臨床腫瘤疾病的診斷與治療, 并對預后的評價起著重要的指導作用, E7蛋白可作為發展HPV16相關宮頸癌及癌前病變治療性疫苗的理想靶抗原。

［1］ Brake T, Joseph PC,Daniel G, et a1.Comperative analysis of cervical cancer in women and in a human papillomavirus-trans-genic mouse model: identification of minianchromosome maintenance protein7 as an informative biomarker for humman cervical cancer.Cancer Res, 2010, 63:8173-8180.

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