HPLC法測定蒙藥嘎古拉-11中鹽酸麻黃堿含量

楊 光

（內蒙古赤峰市醫院，內蒙古 赤峰 024000）

HPLC法測定蒙藥嘎古拉-11中鹽酸麻黃堿含量

楊 光

（內蒙古赤峰市醫院，內蒙古 赤峰 024000）

目的：測定蒙藥嘎古拉-11中鹽酸麻黃堿含量。方法 ：HPLC法，流動相：乙腈-0.1%磷酸（5：95），波長：207nm，室溫測定。結果：鹽酸麻黃堿在0.0214μg～0.214μg范圍內呈良好的線性關系。回歸方程為Y=2258708.3X-673.2，r=1.000，線性關系良好。 3批次平均含量分別為：0.373、0.407、0.382(mg·g-1)。結論：本法方法測定，簡便、易行，結果可靠。

嘎古拉-11；鹽酸麻黃堿；HPLC法；含量測定

嘎古拉 -11由草果仁、紫草茸、木鱉仁（制）等 11味藥組成，具有清熱、消食功能。其中麻黃為方中君藥，功能溫中散寒，下氣止痛。主要有效成分為1-麻黃堿，d-偽麻黃堿等。參照《中國藥典》2005年版一部“麻黃”含量測定項下麻黃的測定方法，采用HPLC法對本品中的麻黃建立含量測定方法，通過實驗摸索，確定了色譜條件，并經過方法學考察表明該方法操作簡單，重現性好，專屬性強。

1 儀器與試藥

1.1 儀器：LC10-ATVP型高效液相議，CLASS-VP色譜工作站。島津UV-2450型紫外-可見分光光度儀。

1.2 試劑與試藥：對照品 鹽酸麻黃堿（C10H15NO·HCL）（批號：171241-200303）中國藥品生物制品檢定所提供；供試品 由內蒙古赤峰市翁牛特旗中蒙醫院提供。乙腈為色譜純，水為超純水，其它試劑為分析純。

2 方法學考察

2.1 色譜條件的選擇

2.1.1 色譜柱：色譜柱填充劑為十八烷基硅烷鍵合硅膠，本實驗采用迪瑪公司Diamonsil（鉆石）色譜柱 C18（250×4.6mm，5μm）。

2.1.2 流動相的選擇：參照《中國藥典》2010年版一部“麻黃”含量測定項下麻黃的測定方法，用乙腈-0.1%磷酸為流動相，通過不同比例的比較，當流動相比例為（5：95）時，樣品中的鹽酸麻黃堿與其它成分達到較好的分離，并具有適宜的保留時間而且理論板數高，故確定流動相為乙腈 -0.1%磷酸（5：95）。

2.1.3 柱溫：由于在室溫條件下鹽酸麻黃堿峰的保留時間穩定，且分離效果較好，故選定柱溫為室溫。

2.1.4 檢測波長的選擇：精密稱取鹽酸麻黃堿對照品適量，用甲醇制成 20μg·mL-1的溶液，在 200nm～600nm波長范圍內掃描，結果鹽酸麻黃堿在207nm處有最大吸收，結合《中國藥典》2010年版一部“麻黃”含量測定項下鹽酸麻黃堿的測定方法，選用207nm作為檢測波長。

2.1.5 理論板數的確定：從對多批檢測數據可見，鹽酸麻黃堿的理論板數在3000以上，即能達到較好的分離效果，故確定理論塔板數按鹽酸麻黃堿峰計算應不低于3000。

2.2 提取溶劑及提取時間的選擇

2.2.1 提取溶劑的選擇：參照《中國藥典》2010年版一部“麻黃”含量測定項下鹽酸麻黃堿的測定方法，選用甲醇作為提取溶劑。

2.2.2 提取效率的考察：以甲醇作為提取溶劑進行超聲提取（功率 200W，頻率 50kHz），為保證被測成分提取完全，實驗中考察了模擬樣超聲提取 25、35、45、55(min)不同超聲提取時間對提取效率的影響，實驗表明超聲處理45 min、55 min鹽酸麻黃堿含量基本一致，故超聲提取時間定為45 min。

2.2.3 中性氧化鋁用量及洗脫液收集量的考察：精密量取上述提取后樣品續濾液1mL，置中性氧化鋁柱（100～200目，內徑 1cm）中，用 50%甲醇洗脫，收集洗脫液置10mL量瓶中，為保證被測成分洗脫完全，實驗中考察了氧化鋁用量及洗脫液收集量對提取效率的影響，結果表明：中性氧化鋁用量1.5g以下含量基本穩定不變，故將中性氧化鋁用量定為1.5g。洗脫液收集量在9mL以上含量基本穩定不變，故將洗脫液收集量定為9mL。

2.3 溶液的制備：對照品溶液的制備：精密稱取鹽酸麻黃堿對照品適量，加甲醇制成每1mL含0.1mg的溶液，精密量取上述溶液2.0mL,置25mL量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，即得。

供試品溶液的制備：取本品適量，研細，取細粉2.5g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇 50mL，稱定重量，超聲處理（功率 200W，頻率 50kHz）45分鐘，放冷，再稱定重量，用甲醇補足減失的重量，搖勻，濾過，精密量取 1mL，置中性氧化鋁柱（100～200目，1.5g，內徑 1cm）上，用 50%甲醇洗脫，收集洗脫液約 9mL，置10mL量瓶中，加磷酸1滴，用 50%甲醇稀釋至刻度，搖勻，即得。

陰性對照溶液的制備：按處方比例并以相同工藝制備的缺麻黃的陰性對照，按供試品溶液制備法制得陰性對照溶液。

按上述色譜條件，分別精密吸取對照品溶液、陰性對照溶液、供試品溶液各 10μL測定，結果陰性對照色譜圖在與鹽酸麻黃堿對照品以及供試品色譜圖相應的保留時間處無色譜峰出現，表明成方制劑中其它組分對測定無干擾。

2.4 線性關系考察：取鹽酸麻黃堿對照品（批號：171241-200303）約 10mg，置 100mL量瓶中，加甲醇使溶解并稀釋至刻度，搖勻，精密吸取 0.5mL、1.0mL、2.0mL、4.0mL、5.0mL，分別置 25mL量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，各取10μ l注入液相色譜儀，按上述色譜條件測定，以峰面積對進樣量進行回歸分析，結果鹽酸麻黃堿在0.0214μg～0.214μg范圍內呈良好的線性關系。回歸方程為 Y=2258708.3X-673.2，r=1.000，線性關系良好。

2.5 樣品溶液穩定性試驗：取同一份供試品溶液，分別于 0h、2h、4h、16h、24h進行了測定，記錄峰面積，求得鹽酸麻黃堿的RSD為 0.29%，24h內峰高無明顯變化，表明供試品溶液制備24h內是基本穩定的。

2.6 精密度：重復性試驗：取同一批號供試品 6份，各約2.5g，精密稱定，分別按含量測定項下方法操作，測定每份供試品含量，測得鹽酸麻黃堿含量RSD為0.18%。

2.7 準確度：加樣回收試驗：精密稱取鹽酸麻黃堿對照品 10.5mg（批號：171241-200303），置 100mL量瓶中，加甲醇使溶解并稀釋至刻度，搖勻，備用。取同一批號的供試品9份，精密稱定，分別置9個錐形瓶中，其中 3個錐形瓶中精密加入上述對照品溶液7mL；另3個錐形瓶中精密加入上述對照品溶液10mL；其余3個錐形瓶中精密加入上述對照品溶液12mL。按上述方法，精密加甲醇使總體積為25mL，同法操作，測定每份供試品的含量，計算平均回收率為99.6%，RSD為1.84%。

2.8 樣品含量測定：取對照品及供試品溶液各10μL測定，結果見表1。

表1 樣品中鹽酸麻黃堿含量測定結果

3 討論

通過以上實驗可見，采用此方法測定，簡便、易行，結果可靠。提取工藝簡單，使被測成分在提取過程中出現的偶然誤差減少，所得結果也相對準確。更好地控制了藥品質量，保證人民用藥安全。

[1]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典（一部）[S].北京:化學工業出版社,2005.

[2]徐國鈞,等.中藥材粉末顯微鑒別[M].北京:人民衛生出版社,1986.

[3]孫文基,謝世昌,等.天然藥物成分定量分析[M].北京:中國醫藥科技出版社,2002.8.

[4]南京中醫藥大學.中藥大辭典（第二版）[S].上海:上海科學技術出版社,2006.

[5]內蒙古自治區食品藥品監督管理局.內蒙古蒙藥制劑規范（第一冊）[S].內蒙古:內蒙古人民出版社,2007.

R 291.2

A

1006-6810（2013）04-0052-03

2013年2月2日收稿