朝醫方三神散對兔心房正性肌力作用的影響

申 晨 李 超 李 雪 崔昊震

（延邊大學中醫學院臨床基礎教研室，吉林 延吉 133002）

朝醫方三神散對兔心房正性肌力作用的影響

申 晨 李 超 李 雪 崔昊震*

（延邊大學中醫學院臨床基礎教研室，吉林 延吉 133002）

目的：研究朝醫方三神散對兔心房的正性肌力作用。方法：采用兔離體搏動心房灌流模型來觀察不同劑量的三神散（0.1,0.3,1 g·L-1）對心房正性肌力的變化。結果：三神散可使心房每搏輸出量（stroke volume）、心房搏動壓(pulse pressure)及灌流液中cAMP流出量比給藥前呈現濃度依賴性遞增趨勢；阻斷-腎上腺素受體（adrenergic receptor,AR）或L-型Ca2+型通道（L-type Ca2+channel,LTCC）均可抑制三神散對心房正性肌力的增強作用。結論：三神散具有增強心肌正性肌力的作用，其作用主要可能與 -AR-cAMP-LTCC信號傳導途徑有關。

三神散；心房正性肌力；-AR-cAMP-LTCC信號傳導途徑

心臟是人體重要的泵血器官，通過心肌的收縮－舒張功能，將血液輸送至全身各臟器和組織當中。Ca2+作為心肌細胞收縮—舒張功能的重要調控因子，主要經過β-AR及LTCC通道的激活等途徑參與心臟的功能活動。朝醫方三神散源自《東醫四象新編》，屬朝醫太陰人方劑，主要由遠志、石菖蒲和龍骨3味藥物組成，具有醒肺調氣，重鎮安神之功效[1]。本方根據太陰人“血濁氣澀”及“肺虛過燥”等體質特點，可調節和改善因血液黏稠及血液動力學改變引起的各種心腦血管疾病。目前，國內外三神散對心臟正性肌力的實驗研究尚未見報道。本研究通過家兔離體搏動心房灌流模型，觀察三神散對心房正性肌力作用的影響，并探討其具體作用機制。

1 實驗材料

1.1 動物：新西蘭白兔，雄性，體重為 2.0±0.2 kg，由延邊大學實驗動物中心提供，合格證號SCXK(吉)2003-0005。

1.2 藥品與試劑：三神散中的三味藥物（各 500 g）均購自北京同仁堂藥店，等量稱重后，分2次煎煮，過濾后混勻，并用旋轉蒸發儀進行濃縮。烘干后，最終獲得黃褐色粉末狀藥物78.9 g，其得率為5.26%。鹽酸普萘洛爾、硝苯地平均購自美國Sigma公司。

1.3 主要儀器：YPJ01型壓力換能器和RM6240C生物記錄儀購自成都儀器廠；cAMP檢測試劑盒（K371-100）購自BioVison公司。

2 實驗方法

2.1 離體搏動心房灌流裝置：參照Cho等[2]研制的心房灌流裝置制備離體搏動心房模型。該裝置可懸掛剝離的心房組織，通過給予適宜的電刺激 (0.3 ms，30～40 V)維持心房搏動，并用氧（95%O2+5%CO2）飽和的HEPES緩沖液對心房進行持續灌流。心房與壓力換能器相連，測定心房搏動壓的變化；心房搏出量則由心房舒縮時透明套管水柱的變化，并經過換算而測得；cAMP分泌變化量用放免試劑盒測定。

2.2 實驗步驟

2.2.1 心房組織經過3個正常組循環(12 min/循環)后，給予高、中、低3種不同劑量的三神散提取物 (0.3,0.1,0.03g·L-1)2個循環。

2.2.2 經過1個正常組循環后，預處理β-AR阻斷劑普萘洛爾 (1μmol·L-1)2個循環，并在持續阻斷 β-AR的情況下給予三神散提取物 (0.1g·L-1)2個循環。

2.2.3 經過1個對照組循環后，預處理 LTCC阻斷劑硝苯地平（1μmol·L-1）2個循環，并在阻斷 LTCC的情況下再給予三神散提取物 (0.1g·L-1)2個循環。

2.3 統計學方法:實驗數據用SPSS13.0統計軟件進行分析，實驗結果均以標準差(±s )表示，P<0.05時表示組間比較具有顯著性差異。

3 實驗結果

3.1三神散對心房正性肌力的影響：三神散提取物(0.3,0.1,0.03g·L-1)可濃度依賴性地增加心房正性肌力 (表 1)。

表1 三神散的不同劑量組對兔心房正性肌力及cAMP分泌量的影響 (±s,n=6)

表1 三神散的不同劑量組對兔心房正性肌力及cAMP分泌量的影響 (±s,n=6)

注：*P<0.05,與正常灌流組相比較；△P<0.05，與低劑量組相比較；#P<0.05，與中劑量組相比較。

藥物對照組三神散劑量 心房搏動壓mmHg心房搏出量L·g-1-0.03 0.1 0.3 3.28±0.07 3.60±0.04*4.22±0.06△4.50±0.03#692.89±12.11 730.37±8.02*770.76 ±9.64△804.84±11.55#cAMP分泌量pmol·min-1·g-1 1.27±0.06 1.61±0.04*1.99±0.07△2.68±0.09#

3.2 β-AR阻斷后三神散對心房正性肌力作用的影響：實驗結果顯示（表 2），普萘洛爾(1μmol·L-1)可阻斷三神散提取物對于心房正性肌力的增強作用。

表2 β—AR阻斷后三神散對正性肌力作用及cAMP分泌量的影響 ( ±s,n=6)

表2 β—AR阻斷后三神散對正性肌力作用及cAMP分泌量的影響 ( ±s,n=6)

注：△△P<0.01與對照組相比較。

藥物對照組普萘洛爾普+三神散劑量 心房搏動壓mmHg心房搏出量L·g-1-1 1+0.1 3.35±0.04 3.01±0.04△3.06±0.05 672.17±4.87 625.67±4.06△647.17±2.39 cAMP分泌量pmol·min-1·g-1 1.28±0.05 1.12±0.03 1.15±0.02

3.3 LTCC阻斷后三神散對心房正性肌力作用的影響：實驗結果顯示（表 3），硝苯地平(1μmol·L-1)可阻斷三神散對心房正性肌力的增強作用。

表3 LTCC阻斷后三神散對正性肌力作用及cAMP分泌量的影響 ( x±s,n=6)

4 討論

心肌細胞內Ca2+濃度的變化在心肌收縮—舒張過程中起決定性作用。其中β-AR介導的LTCC通路的激活是增加心肌細胞內Ca2+濃度的最經典途徑之一。β-AR可通過G蛋白激活腺苷酸環化酶活性，增加心肌細胞內第二信使cAMP水平，進而通過特異性蛋白激酶A的磷酸化作用，促使細胞膜上的LTCC開放,增加細胞外Ca2+內流[3]。流入的 Ca2+通過“扳機樣”作用，激活肌漿網膜上的藍尼堿受體，釋放大量的Ca2+，最終實現心肌正性肌力的增強作用[4]。本實驗結果顯示，朝醫方三神散可增強心房的正性肌力作用，同時增加心肌細胞的cAMP水平。此外，三神散的正性肌力作用可被β-AR阻斷劑普萘洛爾或LTCC阻斷劑硝苯地平所抑制。此研究表明，三神散對心臟的正性肌力作用可能與心肌細胞膜上β-AR介導的cAMP-LTCC信號途徑有關。

三神散是朝醫太陰人方劑，具有醒肺調氣，重鎮安神之功效，可用于治療太陰人的癲狂、健忘、驚悸、怔忡及久心痛等疾病。朝醫四象體質學認為太陰人“肝大肺小”的臟局結構可引起此類人群多具有“血濁氣澀，肺虛過燥”等體質弱點，易形成自身血液粘稠度增高及血液動力學改變等病理變化，并引發動脈粥樣硬化、冠心病及心衰等心血管疾病。三神散可通過加強心肌正性肌力，改善對心血管系統的調節作用，從而加強心主血脈、肺朝百脈等功能。此外，據現代藥理研究證明，石菖蒲揮發油具有抗心律失常[5]、抑制血小板聚集、增加冠脈血流量及降血脂等作用[6]；遠志皂苷通過抑制心肌組織一氧化氮形成，提高超氧化物歧化酶的活力，從而減少心肌梗死等作用[7]。

綜上所述，朝醫三神散對離體家兔心房發揮正性肌力作用，其作用機制與β-AR-cAMP-LTCC信號通路密切相關。本方中各味藥物對心臟的具體作用機制及其相關藥效成分的效應還有待于進一步深入研究。

[1]元持.東醫四象新編[M].延邊民族醫藥研究所,1955.

[2]Cho KW,Kim SH,Kim CH,Seul KH.Mechanical basis of ANP secretion in beating atria:atrial stroke volume and ECF translocation[J].American Journal of Physiology.1995,268(5 Pt 2):1129–1136.

[3]Brodde O-E,Michel MC.Adrenergic and muscarinic recep tors in the human heart[J].Pharmacological Reviews.1999,51(4):651-690.

[4]Bers DM.Cardiac excitation–contraction coupling[J].Na ture.2002,415(6868):198-205.

[5]申軍,肖柳英,張丹.石菖蒲揮發油抗心律失常的實驗研究[J].廣州醫藥,1993:24(3):44-45.

[6]吳啟端,吳清和.石菖蒲的藥理研究進展[J].中藥新藥與臨床藥理,2006:17(6):477-480.

[7]郭健龍,沈志斌.遠志皂苷對大鼠心肌缺血再灌注損傷的保護作用[J].黑龍江醫藥,2005:18(4):263-264.

The positive inotropic effect by'San Shen Powder'in beating rabbit atria

CUI Hao-zhen
(Department of clinic and basic medicine,Yanbian University,Yanji 133000,Jilin,China)

Objective:To address positive inotropic effect of'San Shen Powder'(SSP)in beating rabbit atria.Methods:the SSP-induced changes in atrial dynamics,pulse pressure and stroke volume,and cAMP efflux were measured in perfused beating rabbit atria.Results:SSP increased atrial dynamics and cAMP efflux in a concentration-dependent manner(0.1,0.3,1 g·L-1).The SSP-induced positive inotropic effect was significantly attenuated by the blockade of-adrenergic receptor(AR)or an L-type Ca2+channels(LTCC).Conclusion:These results suggest that SSP-induced positive inotropic effect is,at least in part,related with activation of-AR-cAMP-LTCC signaling pathway in beating rabbit atria.

San Shen Powder;atrial dynamics;-AR-cAMP-LTCC signaling pathway

R291.9

A

1006-6810（2013）04-0043-03

*通訊作者：崔昊震,講師,博士,中醫藥心血管藥理研究，Tel:18744339308,E-mail:cuihaozhen@ybu.edu.cn。

2013年1月4日收稿