PCR法與培養法在檢測解脲支原體中的兩種方法比較

邱華琴 洪麗梅 林 萍

（解放軍第184醫院檢驗科，江西 鷹潭 335000）

PCR法與培養法在檢測解脲支原體中的兩種方法比較

邱華琴 洪麗梅 林 萍

（解放軍第184醫院檢驗科，江西 鷹潭 335000）

目的對PCR法與培養法在檢測解脲支原體中的兩種方法進行比較。方法選取了2011年1月至2012年6月期間，來自我院診治的158份樣本，并對其進行了PCR法和培養法測試比較，以對兩種檢測方法的敏感性及特異性進行比較。結果PCR法檢出陽性率為70.3%；培養法檢出陽性率為43.0%。經配對計數和χ2檢驗，PCR法的敏感性明顯高于培養法（P＜0.05）。結論PCR較培養液法具有更高的敏感性，值得在實驗條件較好的醫療機構進行推廣應用。

PCR；培養法；解脲支原體

臨床常見的慢性前列腺炎、非淋菌性尿道炎、陰道炎、附睪炎、宮頸炎、子宮內膜炎、不育等疾病都和解脲支原體（UU）有著緊密的聯系。此外解脲支原體還會從母體垂直傳染給胎兒，從而導致嬰兒出現腦膜炎、皮下脹腫等疾病[1]。目前，臨床上已將解脲支原體作為非淋菌性尿道炎的重要診斷指標之一。檢測解脲支原體最傳統的方式即是培養法，此外，為了適應臨床診斷及研究發展的需求，PCR擴增法也被用于檢測解脲支原體。本文選取了2011年1月至2012年6月期間，來自我院診治的158份標本，并對其進行了PCR法和培養法測試比較，以對兩種檢測方法的敏感性及特異性進行比較?，F報道如下。

1 資料與方法

樣本來源是于2011年1月至2012年6月在我院就診的158例泌尿科、性病?？坪蛬D科患者，其中32例為男性，126例為女性；年齡為16～47歲。經確診，上述患者具體病情為：12例為性病，55例為陰道炎，69例為盆腔炎，22例為前列腺炎。根據樣本采集的相關指導標準，臨床醫師對每例患者各采集兩份樣本，分別進行PCR檢測和培養檢測。

2 試劑來源及儀器：

2.1 試劑

PCR測定試劑為中山大學達安基因股份有限公司提供，培養法所用試劑有珠海迪爾生物工程有限公司提供的支原體（Uu/Mh）分離培養藥敏試劑盒。

2.2 儀器

DA7600擴增儀。

2.3 檢測方法

PCR方法：首先把標本放進1.5mL的消毒離心管中，加入1mL無菌生理鹽水，浸潤10min，隨后進行徹底的清洗，把棉拭子上的分泌物徹底洗于生理鹽水內，將棉拭子擠干，丟棄。將所得溶液以12 000rpm離心5min，將上清液去除，在沉淀中加入50μL DNA提取液充分混勻，100℃恒溫處理（10±1）min，12，000rpm離心5min，取2μL上清液加入含（UU）的Taq進行PCR反應。另分別取100μL陰陽性對照質控標準品，與等量提取液充分混合、恒溫浴、離心及PCR反應等與上述操作相同。按對應順序設置陰性質控品，陽性定量參考品以及樣本。設置循環條件；：93℃→2min，93℃ 45s→55℃ 60s→10個循環，93℃ 30s→55℃ 45s→30個循環。保存文件，運行。反應結束后通過曲線分析直接得出標本的數值。

解脲支原體培養：將采集的標本拭子插入培養瓶，在靠近液面上方的瓶壁擠壓旋轉拭子數次，使拭子中樣本滲入；若為精液、前列腺液標本，取200μL加入培養基中；若為中段尿，經2000轉/分離心10min，取沉渣100μL加入培養基中。充分混勻接種標本中的培養基，取100μL加入檢測卡的各孔中（除C-孔）。 各孔滴加2滴無菌礦物油，蓋上檢測卡蓋，置35℃～37℃孵箱培養，在24h和48h分別觀察結果。經48h培養，如果培養液顏色沒有改變則為陰性，如果培養基顏色從黃色變成紅色則為解脲支原體陽性。。

2 結 果

經檢驗，PCR法檢出111例為陽性，47例為陰性，陽性率為70.3%；培養法檢出68例為陽性，90例為陰性，陽性率為43.0%。在檢測中，有18例樣本經培養法檢測顯示陰性，PCR法檢測結果為陽性；另有8例樣本經PCR檢測顯示陰性，但是培養法檢測為陽性。經配對計數和χ2檢驗，PCR法的敏感性明顯高于培養法（P＜0.05）。

3 討 論

解脲支原體檢測方法有固體培養法、液體培養法和分子生物熒光定量PCR法，這些方法各有優缺點。固體培養法是直接通過培養分離出該病原體菌落，進行系統鑒定而得出結論，可謂金標準，但實驗條件要求較高費時長，不適合常規檢查[2]，目前檢測該病原體主要是液體培養法和PCR法，液體培養法是利用解脲支原體中的脲酶能分解培養基中的尿素，使PH值上升使酚紅指示劑由黃變為紅色，而進行判斷為解脲支原體陽性，此法操作簡單而且可以同時做藥敏試驗。這點是定量PCR法無法比擬的。PCR法是直接檢測病原體的核酸進行判斷是否有該病原體存在，為目前比較理想的方法。且其特異性、敏感性、準確性較高而且檢測時間短。解脲支原體培養基中包含酚紅指示劑及尿素，因解脲支原體中的脲酶會分解尿素，生產NH4和CO2，使培養液趨向堿性，酚紅指示劑從而變成為紅色[2]。然而，泌尿系統和生殖道其它的微生物內也存在脲酶，可導致假陽性結果，特別是女性的支原體培養標本都是宮頸分泌物其本身就不同程度帶有細菌，本文對8例經PCR檢測顯示陰性但培養法檢測為陽性的標本進行了鑒定，造成該情況的原因可能是引起培養物顏色變化的因素未必皆為支原體，變形桿菌、腸桿菌、克雷伯氏菌及酵母菌等污染均可能導致出現假陽性。

綜上所述，在對解脲支原體的檢測中，PCR檢測法具有敏感度及特異性較高、操作方便、檢測周期短等優勢，最重要的是通過PCR的測定可以給臨床醫師提供最直觀的療效評叛，然而此法對檢測技術要求及實驗條件有著較高的要求，如果實驗室條件不足，則其檢測結果也會受到一定的影響。因此，PCR較培養液法具有更高的敏感性，值得在實驗條件較好的醫療機構進行推廣應用。

[1] 周才麗,胡燕玲.熒光定量PCR法與培養法在檢測解脲支原體中的比較[J].現代診斷與治療,2011,22(2):107-108.

[2] 王玉珍,蘆偉.培養法及PCR法用于解脲支原體檢測結果的分析[J].醫學創新研究,2006,8(3):108-109.

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1671-8194（2013）16-0195-02