化學(xué)發(fā)光法和酶聯(lián)免疫吸附法檢測(cè)丙型肝炎病毒抗體的觀察與對(duì)比

劉靜靜 劉巧玲

（河南省焦作市第二人民醫(yī)院檢驗(yàn)科，河南 焦作 454001）

化學(xué)發(fā)光法和酶聯(lián)免疫吸附法檢測(cè)丙型肝炎病毒抗體的觀察與對(duì)比

劉靜靜 劉巧玲

（河南省焦作市第二人民醫(yī)院檢驗(yàn)科，河南 焦作 454001）

目的 分析和對(duì)比應(yīng)用化學(xué)發(fā)光法（CLIA）和酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA）對(duì)檢測(cè)丙型肝炎病毒抗體（抗 -HCV）準(zhǔn)檢率和臨床意義。方法 收集臨床血清標(biāo)本 906 例，分別應(yīng)用化學(xué)發(fā)光法（CLIA）和酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA）監(jiān)測(cè)，并收集監(jiān)測(cè)后陽性標(biāo)本和可疑陽性標(biāo)本。最后用第三代重組免疫印跡法（RIBA-3）進(jìn)行確定再監(jiān)測(cè)。結(jié)果 兩種方法共篩選出血清標(biāo)本陽性者 43 例，可疑陽性標(biāo)本 4 例。其中CLIA 篩選監(jiān)測(cè)出血清陽性者 21 例，確證為 20 例，1 例可疑陽性。后經(jīng) RIBA 重新確認(rèn)監(jiān)測(cè)為陽性。敏感性 100%。ELISA 篩選監(jiān)測(cè)出血清陽性為 22 例，陰性者 3 例，確證后陽性為 19 例，后經(jīng) RIBA 重新確認(rèn)監(jiān)測(cè)后 1 例為陰性，2 例為陽性。敏感性為 95%。結(jié)論 CLIA 監(jiān)測(cè)法較 ELISA 監(jiān)測(cè)法靈敏、準(zhǔn)確，使用 CLIA 提高了臨床監(jiān)測(cè)率，減少了漏診現(xiàn)象。對(duì)于 CLIA 和 ELISA 監(jiān)測(cè)法均顯示可疑時(shí)，一定要應(yīng)用 RIBA 再確診定性。

丙型肝炎抗體；化學(xué)化光法；酶聯(lián)免疫吸附法；敏感性

近年，丙型肝炎的感染例數(shù)逐年上升，已成為一種危及全球性的感染性疾病，其危害性很大，嚴(yán)重地影響了民眾的健康。目前，各級(jí)醫(yī)院大多采取酶聯(lián)免疫吸附法監(jiān)測(cè)篩選丙型肝炎的抗體為感染依據(jù)。化學(xué)發(fā)光法具有靈敏度高、線狀范圍寬等特點(diǎn)已經(jīng)開始應(yīng)用于臨床。現(xiàn)就兩種監(jiān)測(cè)方法對(duì)HCV診斷檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行了有目的地觀察和比較性分析，現(xiàn)將方法報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

1.1.1 樣本收集

2012年1月至2012年6月之間我院收集的住院患者血清樣本共906份，男，556例，女350例，年齡在25～70歲，平均年齡（47±0.5），抽血4h內(nèi)分離血清。4℃保存，次日進(jìn)行CLIA和ELISA監(jiān)測(cè)。收集CLIA/ELISA檢測(cè)陽性血清標(biāo)本及可疑血清標(biāo)本（S/CO的臨界范圍，0.9＜S/CO＞1.0）分別置于-20℃條件下集中保存[2]。

1.1.2 儀器試劑

ELISA抗-HCV檢驗(yàn)診斷試劑，由北京萬泰生物制劑有限公司提供。高靈敏度化學(xué)發(fā)光法免疫分析儀型號(hào)為（GL-200A）由北京艾蘭科技提供。另配有相關(guān)配套的HCV抗體診斷盒。

1.2 方法

1.2.1 化學(xué)發(fā)光法

應(yīng)用間接化學(xué)發(fā)光免疫分析原理，測(cè)定其發(fā)光值（RLU），與其臨界值（CO）做比較，判斷血清樣本中是否含有GCV抗體，結(jié)果判斷以S/CO≥1.0為陽性，S/CO＜1.0為陰性。

1.2.2 酶聯(lián)免疫吸附法

采用間接ELISA法檢測(cè)樣本血清中有無HCV抗體，結(jié)果判斷以S/CO≥1.0為陽性，S/CO＜1.0為陰性。

1.2.3 第三代重組免疫印跡法

RIBA-3是臨床用于確診丙型肝炎的一種最后檢測(cè)工序。一般用于篩查抗HCV假陽性或疑似陽性病例的進(jìn)一步補(bǔ)充試驗(yàn)，通過顯色帶判斷標(biāo)本的陰性和陽性。其確認(rèn)率高，但工序繁雜，操作次數(shù)多，代價(jià)昂貴，臨床多采取CLIA和ELISA監(jiān)測(cè)，對(duì)疑似病例或假陽性者多用此法做鑒別確診。

2 結(jié) 果

化學(xué)發(fā)光法CLIA和酶聯(lián)免疫吸附法ELISA檢測(cè)結(jié)果，共檢測(cè)血清樣本906例，所有陽性及可疑陽性標(biāo)本為47例，均已經(jīng)過RIBA-3復(fù)檢，其陽性結(jié)果基本一致，陽性結(jié)果最后確定為42例，陽性率為97%。①檢測(cè)結(jié)果：CLIA檢測(cè)陽性結(jié)果為21例，可疑陽性1例；用RIBA-3法確證法確證，1例可疑陽性者被確證為陽性，合計(jì)陽性為22例。②檢測(cè)結(jié)果：ELISA檢測(cè)陽性結(jié)果為22例，陰性3例；用RIBA-3法確證法確證，20例為陽性，5例為陰性，合計(jì)陽性為20例。經(jīng)過以上兩各檢測(cè)結(jié)果的比較可以清楚看出，CLIA的檢測(cè)敏感性為100%，ELISA的檢測(cè)敏感性為95%。

3 討 論

HCV為單股正鏈線狀RNA病毒，一般是在輸血后感染，不但可以損傷肝細(xì)胞，還常可以產(chǎn)生免疫損傷和肝外病變，是導(dǎo)致肝硬化和肝癌的主要原因，其發(fā)病確切機(jī)制目前還不十分清楚，主要學(xué)說是，機(jī)體感染HVV后，明顯誘導(dǎo)免疫細(xì)胞產(chǎn)生細(xì)胞應(yīng)答和體液應(yīng)答。HCV自身抗體的說法近年來的報(bào)道越來越多，因此，檢測(cè)懷疑HCV感染的患者篩查有無HCV-Ab也成了監(jiān)測(cè)是否感染HCV的一項(xiàng)重要指標(biāo)。還有一點(diǎn)應(yīng)該鄭重說明的是，HCV和其它型的肝炎病毒和艾滋病毒一樣也有窗口期，這就為漏檢找到了借口和托辭。所以患者為新增病例，并且在窗口期者，不易檢出，另外，有一部分患者感染HCV后，其免疫功能欠佳，對(duì)外來抗原刺激不產(chǎn)生應(yīng)答，不產(chǎn)生抗體，也就是抗原為陽性，但抗體為陰性。再者，機(jī)體免疫應(yīng)答的反應(yīng)強(qiáng)度和持續(xù)時(shí)間也是造成漏檢的一個(gè)原因。但是隨著病情的進(jìn)展，機(jī)體產(chǎn)生的HCV-Ab的濃度達(dá)到了一定的閾值，血清標(biāo)本就能夠檢出[1-3]。

目前，臨床上監(jiān)測(cè)HCV感染的實(shí)驗(yàn)室方法有分子生物學(xué)方法和血清學(xué)方法，分子生物學(xué)方法試劑較為貴重，且操作復(fù)雜，血清學(xué)方法與之相比較，有著操作簡(jiǎn)單，費(fèi)用低廉等好處，多為臨床上所采用。初篩實(shí)驗(yàn)一般選取金標(biāo)法、ELISA法和CLIA法。由于在監(jiān)測(cè)HCV感染的過程中，機(jī)體愛多方面因素的影響，血清標(biāo)本也會(huì)收到相應(yīng)的影響，檢測(cè)結(jié)果因人為等多種因素影響較多，用ELISA法會(huì)因這諸多因素受到誘惑，出現(xiàn)假陽性率增高。同時(shí)，因自身試劑的因素，敏感度不夠又出現(xiàn)了一假陰性。這也是酶聯(lián)免疫吸附法的一大缺點(diǎn)。而化學(xué)發(fā)光法CLIA就較之出現(xiàn)了臨床上大受歡迎的趨勢(shì)。CLIA是應(yīng)用笨并熒蔥為發(fā)光底物，且洗滌液的特殊配方可有效清洗去諸多干擾因素，使得其檢測(cè)出HCB抗體的監(jiān)測(cè)率大大增高。本實(shí)驗(yàn)為血清標(biāo)本和溶血標(biāo)本，且為次日檢測(cè)，徹底排除了因血沉沉降不充分的干擾，但仍出現(xiàn)一例疑似陽性病例。經(jīng)過第三代重組RIBA-3的確證后仍為陽性。因此，建議不管是CLIA 法和ELISA法，只要是S/CO較低的標(biāo)本均應(yīng)慎重，對(duì)有接觸丙型肝炎患者和疑似感染HCV的患者一定要應(yīng)用第三代重組RIBA-3法進(jìn)行確證。排除其假陽性和假陰性，減少誤診和誤治率。

[1]上海第6次全國(guó)病毒性肝炎會(huì)議,病毒性肝炎防治會(huì)議試行方案[J].中華傳染病雜志,1991,9(1):52-60.

[2]湯 巧,吳 文 靜,夏 永祥.化 學(xué) 發(fā) 光 法 和 酶 聯(lián) 免 疫 吸 附 法 檢 測(cè) 丙 型肝炎病毒缸體的比較分析 [J].國(guó)際檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志,2011,32(8): 834-835.

[3]牛文強(qiáng),陳杰.慢性丙型病毒性肝炎患者相關(guān)自身抗體、血清HCV、RNA、水平及AST/ALT比值的關(guān)系探討[J].中國(guó)醫(yī)療前沿,2009, 4(14):73-74.

R512.6+3

：B

：1671-8194（2013）09-0120-02