復合血脂質控品的制備及性能評價

唐立萍，張瑞鎬，居 漪，王美娟，胡春力，諸佩超，詹方堯

(1.上海市臨床檢驗中心，上海200126;2.上海伊華醫學科技有限公司，上海201203)

載脂蛋白A1(apo A1)、載脂蛋白B(apo B)、高密度脂蛋白膽固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)、膽固醇(CHOL)及甘油三酯(TG)是臨床生化脂質代謝檢驗的最常用的檢驗項目。對高血脂癥的篩選是針對心血管危險因素的常規檢查，具有重要的臨床檢測價值。為保證檢測結果的準確性和可靠性，實驗室應通過室內質量控制(IQC)系統，使用質控品，確立質控標準，間接評價檢測結果的精密度，同時結合室間質量評價(EQA)間接評價檢測結果的準確性。但目前我國所用的多為國外進口質控品，面臨價格昂貴、入關難等問題。因此，我們研制了一種液體非定值血脂質控品，采用混合人血清為基質，可替代人血清用于臨床實驗室的日常IQC以及進行不同實驗室之間的EQA和檢測結果一致性調查使用。

材料和方法

一、材料

1.儀器和試劑 日立7180全自動生化分析儀。HDL-C、LDL-C、CHOL、TG 試劑盒由日本和光(Wako)純藥工業株式會社提供。apo A1、apo B試劑盒由羅氏診斷產品(上海)有限公司提供。

2.校準品 采用羅氏多項目校準品(c.f.a.s)、羅氏脂類多項校準品(c.f.a.s lipids)和Wako復合脂類校準品。

3.參考質控品 Bio-Rad血脂調查品。

4.主要原材料 人類免疫缺陷病毒(HIV)抗體、丙型肝炎病毒(HCV)抗體、乙型肝炎表面抗原(HBsAg)陰性的混合人血清，疊氮鈉，穩定劑。液體 apo A1抗原、apo B抗原、HDL-C、LDL-C、CHOL及TG成分由上海北加生化試劑有限公司提供。

二、制備過程

選取HIV抗體、HCV抗體、HBsAg均陰性的血清混合，儲存于 -80℃凍存備用。取潔凈50 mL量筒及250 mL三角燒瓶各2個，用工藝用水沖洗3次，置37℃，烘干。按需量取上述備用人血清，檢測各成分濃度。按需添加apo A1抗原、apo B 抗原、HDL-C、LDL-C、CHOL 及 TG 等成分。經核對無誤后，放入容器內，添加萬分之二疊氮鈉及穩定劑。將容器用薄膜密閉封口，上下左右輕輕振搖10 min，重復3次，每次間隔10 min，混勻。檢測中間品各成分，確定檢測值是否與預期值相符合(允許偏移≤15%)。用0.22 μm孔徑的硝酸纖維素濾膜抽濾，分裝，每瓶分裝1 mL，各分裝50瓶。置-20℃保存。

三、評價方法

校準儀器系統，所需檢測項目試劑重新定標。使用Bio-Rad血脂調查品做IQC。

1.精密度 取同批號的在-20℃密閉保存的自制質控品11瓶，每瓶檢測1次，計算測定結果的均值(1)和標準差(s1)，即批間精密度。另取其中1瓶連續測定11次，計算測定結果的2和s2，即批內精密度;按下列公式計算瓶間重復性［變異系數(CV)］。

2.儲存穩定性 質控品制備后各項目分別檢測2 次，計算，置 -20 ℃保存。分別于第4、5、11、13、14、16、18個月隨機抽取1瓶自制質控品，復溶、混勻后分別測定各項目2次，與其初始比較，計算偏移。偏移(%)=［(當月檢測值-初始檢測值)÷初始檢測值］×100%。

3.開瓶穩定性 取在-20℃密閉保存的質控品，開封后置2～8℃密閉存放，每天檢測2次，取。連續檢測19 d，計算連續19 d檢測結果的變異系數(CV)。

結 果

一、精密度(瓶間差)

各項目精密度應≤1/4 CLIA’88可接受性能指標，即 apo A1、apo B、HDL-C、LDL-C 的 CV≤7.5%。CHOL的CV≤2.5%，TG的CV≤6.25%。檢測結果見表1。質控品各項目瓶間差均符合要求。

表1 自制質控品各項目精密度(瓶間差)

二、穩定性

1.儲存穩定性 偏移結果應符合1/2美國CLIA’88可接受性能指標規定，即apo A1、apo B、HDL-C、LDL-C的偏移≤±15%，CHOL的偏移≤±5%，TG的偏移≤ ±12.5%。自制質控品-20℃保存18個月，各項指標的穩定性均符合要求。結果見表2。

2.開瓶穩定性 各項目CV應≤1/4美國CLIA’88 可接受性能指標，即 apo A1、apo B、HDL-C、LDL-C的 CV≤7.5%，CHOL的 CV≤2.5%，TG的CV≤6.25%。自制質控品開瓶后連續檢測19 d，各項目CV均符合要求。結果見表3。

表2 自制質控品-20℃保存第1個月與第4、11、13、14、16及18個月結果比較

表3 自制質控品開瓶后連續檢測19 d結果

討 論

隨著社會經濟的發展，生活水平的提高和生活方式的變化，我國血脂異常人群已達到1.6億［1］。大量研究表明血脂異常是心血管疾病和缺血性腦卒中發病的重要危險因素。因此，臨床工作中經常采用血脂指標評估相關疾病的發病風險，如 TG、CHOL、LDL-C、HDL-C、apo A1、apo B等［2］。

為保證檢測結果的可靠性，IQC和EQA是質量管理體系中一個重要環節，其控制著整個實驗流程，如樣本吸取、樣本測定、結果分析等，是保證高質量操作的必要措施［3］。質控品是保證室內質控工作順利進行的重要物質基礎。隨著醫學檢驗質量控制的開展和深入，生產質控品的單位日益增多，合格的質控品應具有分析物穩定、均一、瓶間差異小、合理的分析物濃度和摻入成份對測定無干擾等特性，其中分析物的穩定性是評價質控品優劣的首要指標。

目前血脂指標有多種測定試劑及方法，各試劑方法間測定的敏感性及不精確度不同，樣本采集后，由于細胞的代謝活動、化學反應、微生物降解、滲透作用、光學作用等，都將直接或間接地影響到分析結果的準確性［4］。但受多種因素的影響，特別是試劑的質量不一，不同廠家的質控品穩定性不一致，無論選用哪種均應滿足穩定性好、基質效應小的要求。而進口質控品價格比較昂貴，入關較難。本研究采用混合人血清(HIV抗體、HCV抗體、HBsAg陰性)為基質，自制了液體非定值血脂質控品，可替代人血清用于臨床實驗室的IQC以及進行不同實驗室之間的(EQA)和檢測結果一致性調查使用。我國目前尚無血脂質控品的國家或行業標準，因此參考臨床實驗室質量控制現行主要評價方法，以美國CLIA’88可接受性能指標為實驗室EQA評價指標，以1/2 CLIA’88可接受性能指標為實驗室IQC評價指標。制訂以1/4美國CLIA’88可接受性能指標為本質控品精密度技術指標，以1/2美國 CLIA’88可接受性能指標為本質控品穩定性技術指標。本研究中自制質控品的6項檢測指標精密度均符合1/4美國CLIA’88可接受性能指標。于-20℃密閉保存，連續18個月性能穩定，6項檢測指標的偏移均＜1/2美國CLIA’88可接受性能指標，符合要求。開瓶后于2～8℃密閉保存連續19 d，性能穩定，6項檢測指標19 d的偏移均＜1/4美國 CLIA’88可接受性能指標，精密度較好。本研究同時將Bio-Rad血脂質控品(進口)水平1和水平2進行了比較試驗，自制質控品精密度與之相似。開瓶后于2～8℃密閉保存可穩定19 d，長于Bio-Rad血脂質控品說明書中的14 d。Bio-Rad血脂質控品-20℃密閉保存可穩定約2年，而本研究自制質控品連續18個月性能穩定，至于更長時間的穩定性情況需作進一步研究。由于時間、實驗條件等限制，本研究自制質控品在不同儀器、不同試劑(方法)等的測定特性還有待進一步研究、完善。

綜上所述，本研究自制質控品均勻性、穩定性都能滿足要求，且有原料來源方便，價格便宜之優勢，有利于開展IQC和EQA，提高檢測質量。為國內相關診斷試劑產業的全面、健康發展，為臨床實驗室間最終實現結果的準確、可比性提供可行的實驗技術支撐。

［1］中國成人血脂異常防治指南制訂聯合委員會.中國成人血脂異常防治指南［J］.中華心血管病雜志，2007，35(5):390-419.

［2］Burtis CA，Ashwood ER，Bruns DE.Tietz textbook of clinical chemistry and molecular diagnostics［M］.6th edition.St.Louis Missouri:Elsevier Saunders，2008:402-430.

［3］王治國，李小鵬，武平原.臨床檢驗定量測定室內質控系統的建立［J］.檢驗醫學，2004，19(1):6-9.

［4］章晉林，張小鵬.血液標本的保存條件與保存時間對常規生化檢測結果的影響［J］.現代檢驗醫學雜志，2005，20(6):9-10.