基因芯片和比例法藥物敏感性試驗檢測結核分枝桿菌對利福平和異煙肼耐藥性的比較研究

歐維正，駱科文，王 燕，秦 萬，蒙 俊，張廷梅

(貴陽市肺科醫院，貴州貴陽550003)

目前，用于結核分枝桿菌(Mycobacterium tuberculosis，MTB)耐藥性的檢測方法有多種，但大部分檢測方法所需時間較長。傳統方法是以培養為基礎的絕對濃度法和比例法，需要2～3個月時間才能得到藥物敏感性結果，放射性快速診斷技術(BACTEC)可將耐藥檢測縮短到2～4周，但仍不能滿足臨床的需要。隨著分子生物學理論和技術的發展，MTB基因組的破譯和耐藥分子機制的闡明，使我們從分子水平上認識了MTB的遺傳本質和耐藥機制，建立了許多先進的分子生物學方法。基因芯片就是近年發展起來的一種新方法。基因芯片是利用MTB耐藥性與基因突變有關的分子機制，對其與耐藥性相關的突變位點進行檢測，根據檢測位點的突變情況判斷MTB的耐藥性，將耐藥性檢測的時間縮短到5～6 h，達到快速、靈敏、準確檢測耐藥性的目的。我們用基因芯片與比例法藥物敏感性試驗做比較研究，檢測MTB對利福平(rifampin，RFP)和異煙肼(isoniazid，INH)的耐藥情況，初步評價基因芯片對快速診斷耐多藥結核病(MDR-TB)的臨床價值。

材料和方法

一、材料

1.檢測菌株 收集貴陽市肺科醫院2011至2012年間327株MTB臨床分離株。比例法藥物敏感性試驗以MTB標準株H37Rv(ATCC 27294)為質控菌株。

2.抗結核藥物 RFP和INH均為Sigma公司產品(批號分別為080M1506V和060M0090)。

3.培養基 改良羅氏培養基、RFP和INH含藥改良羅氏培養基自制。用于比例法藥物敏感性檢測的RFP和INH含藥培養基藥物終濃度分別為 40 和0.2 μg/mL。

4.MTB耐藥基因芯片檢測試劑 由博奧生物有限公司提供［注冊號為國食藥監械(準)字2010第 3400383號，批號為 20120201和20120601］。……