不同采血部位及放置時間對樣品檢測高敏C反應蛋白的影響

彭海維，方宗君，楊 容

(上海市寶山區張廟街道長江路社區衛生服務中心，上海200431)

C反應蛋白(CRP)是一種肝臟分泌的急性時相反應蛋白，生理狀態下含量甚微，在急性感染、創傷、組織壞死時其血液中濃度急性升高。高敏C反應蛋白(hs-CRP)是使用了具備更高靈敏度的檢測方法所獲得的結果。眾多研究表明，CRP輕度增高與動脈粥樣硬化、腦卒中和周圍血管病相關，是獨立的危險因子［1］。hs-CRP在冠心病、中風、周圍血管栓塞等疾病預測中發揮重要作用，對于心血管疾病危險性評估具有重要意義。目前，臨床上常選用即時檢驗(POCT)設備來檢測hs-CRP，通常以新鮮手指末梢血作為樣品。對于大中型醫院來說，一般都有大型全自動生化分析儀，采集靜脈血后直接上機檢測hs-CRP;然而對于沒有大型全自動儀器的基層小型醫院，一些檢測項目只能由小型POCT設備完成。然而關于靜脈抗凝血直接用于POCT設備檢測hs-CRP，與末梢血之間是否有差異的報道較少。因此，我們評估了末梢血與靜脈抗凝血的差異程度以及樣品存放時間對檢測結果的影響。

材料和方法

一、對象

收集2012年4月至7月門診患者84例，其中男36例，女48例，年齡14～85歲。用含有EDTA-K2抗凝劑的真空管采集患者靜脈血2 mL，同時采集該批患者的手指末梢血20 μL加入含有800 μL CRP樣品處理液的樣品管中。

二、儀器與試劑

采用國賽特定蛋白分析儀(散射比濁法)，原裝hs-CRP測定試劑。

三、測定方法

將采集的84例抗凝靜脈血充分混勻，根據試劑盒使用說明書要求取20 μL全血加入800 μL CRP樣品處理液中，待紅細胞完全溶解(10 s)后混勻，吸取40 μL加入比色杯中按操作規程進行檢測，其余抗凝血放入4℃冰箱保存(所有樣品均加蓋)，分別于24 h、7 d再取出檢測。

將84例已加入CRP樣品處理液的手指末梢血樣品吸取40 μL加入比色杯中，按操作規程進行檢測，即刻檢測完后剩余樣品后放入4℃冰箱保存(所有樣品均加蓋)，分別于24 h、7 d再取出檢測。

取一患者靜脈血及末梢血樣品各連續檢測11次計算其精密度。

以hs-CRP參考區間(≤5.0 mg/L)為依據將患者分為≤5.0 mg/L及＞5.0 mg/L 2組。

四、統計學方法

使用SPSS13.0統計軟件進行統計分析。hs-CRP呈偏態分布，采用中位數(范圍)表示。靜脈抗凝血即刻檢測值與其余檢測值的差異性分析采用wilcoxon秩和檢驗，相關性分析采用Spearman相關分析。P＜0.05表示差異有統計學意義。

結 果

一、靜脈抗凝血樣品精密度為2.33%;末梢血樣品精密度為2.30%。

二、靜脈抗凝血樣品hs-CRP即刻檢測值與末梢血即刻檢測值比較差異無統計學意義(P＞0.05)，其他各時間段檢測值與靜脈抗凝血即刻檢測值比較差異均有統計學意義(P＜0.05)。見表1。

三、以靜脈抗凝血樣品hs-CRP即刻檢測值為參比，末梢血樣品即刻檢測值與其比較偏差最小(P＞0.05)，相關性最好;而4℃放置24 h后靜脈抗凝血及末梢血樣品相對偏差均增大，放置7 d時偏差明顯增大(P＜0.05)，相關性均明顯下降。

表1 靜脈抗凝血即刻hs-CRP與其它檢測值比較(mg/L)

表2 靜脈抗凝血hs-CRP即刻檢測值與其余時間段各檢測值的相關性分析

四、樣品放置4℃24 h后有69%的靜脈抗凝血樣品、68%的末梢血樣品測定值開始下降;放置7 d時測定值下降的樣品數分別為72%和75%，與即刻測定值比較偏移最大可達44%。但也有部分樣品放置24 h或7 d后測得的hs-CRP值高于即刻測定值，最高的1例靜脈抗凝血樣品存放7 d后增高81%。

討 論

目前常用于測定CRP的方法有酶聯免疫吸附試驗(ELISA)、散射比濁法和透射比濁法［2］。本研究采用POCT設備檢測hs-CRP，結果顯示靜脈抗凝血與末梢血樣品的精密度無明顯差異。表1、表2顯示采血后即刻檢測兩者的相對偏差小，相關性好，差異無統計學意義(P＞0.05)。臨床檢驗中可根據實際情況選用其中一種樣品進行檢測。而實際工作中無論采用靜脈抗凝血或手指末梢血，在血液的預處理階段均需手工加樣，因此應盡量避免人為因素造成的誤差，如微量毛細血管吸樣要準確;手指末梢采血時避免用力擠壓，血液自然流出后拭去第一滴血再采樣;靜脈抗凝血進行預處理時應將血液充分混勻后吸樣，并且血液預處理時應待血液完全溶血后再檢測，若溶血不完全會出現與乳糜血相同的情況，即儀器顯示空白過高無法檢測。

完整的CRP是一種環形結構的五聚體，這種特征性的結構使其歸類于五聚素家族，循環中CRP半衰期為19 h［2］。本研究將末梢血樣品和靜脈抗凝血樣品分別放置4℃保存，于24 h、7 d取出檢測的值與靜脈抗凝血即刻檢測的hs-CRP值比較差異均有統計學意義(P＜0.05)，且相對偏差增大。2種樣品放置4℃ 24 h后多數樣品hs-CRP值開始下降，放置至7 d時偏移最大可達44%，但也有部分樣品放置24 h或7 d后測得的hs-CRP值高于即刻值，最高1例靜脈抗凝血樣品存放7 d后增高81%。眾所周知，散射比濁法是檢測可溶性抗原抗體復合物在液相中形成的濁度從而測定抗原的含量［2］。脂血、類風濕因子和人抗鼠IgG抗體都會使結果假性升高［2］。而當樣品放置時間延長后檢測值大幅增高其原因有待進一步探討。

CRP是一種急性期蛋白，常用于器質性疾病的篩查和并發感染的鑒別等，因此在臨床中常作為急診項目開展。hs-CRP測定方法簡便，個體日間和生理變異較小，是心血管事件一個較好的預測指標。美國已將hs-CRP檢測作為每年健康體檢的內容之一［3］。本研究顯示在日常hs-CRP檢測中，即使作為體檢樣品，無論靜脈抗凝血或經預處理過的末梢血都應即刻檢測，若放置4℃冰箱也應在24 h內檢測完成。

本研究因為手工加樣操作，在諸多環節中有可能存在人為誤差，且樣品量不夠大，故以上結論有待進一步論證。

［1］李義龍，王 萌，唐志毅，等.全程C反應蛋白試劑盒方法學比對評價［J］.中華檢驗醫學雜志，2009，32(9):1069-1073.

［2］葉應嫵，王毓三，申子瑜.全國臨床檢驗操作規程［M］.第3版.南京:東南大學出版社，2006:590.

［3］呂 軍，王 瑋，陳 彬，等.兩種檢測血清高敏C反應蛋白方法的性能比較［J］.檢驗醫學，2009，24(9):695.