玉米籽粒中伏馬菌素檢測方法的研究

摘要：采用甲醇提取，C18固相革取柱凈化，液相色譜分離，串聯四極桿質譜多反應離子檢測，建立了玉米籽粒中中伏馬毒素的液質聯用檢測方法，結果表明：毒素的檢測限為0.08μ/kg，添加回收率在70%-115%之間。

關鍵詞：玉米籽 伏馬菌素 檢測方法

中圖分類號：S852.66 文獻標識碼：A 文章編號：1674-098X（2013）02（a）-0150-01

伏馬菌素（Fumonisin，FB）是由串珠鐮刀菌產生的一類真菌毒素，可引起動物的急慢性中毒，對肝、腎、肺和神經系統均有毒性，是目前國際上最受關注的一種真菌毒素。目前發現的伏馬菌素有FA1、FA2、FB1、FB2、FB3、FB4、FC1、FC2、FC3、FC4和FP1共11種，其中FB1是其主要組分。伏馬菌素主要污染糧食及其制品，特別是玉米及其制品，且與黃曲霉毒素的共同污染狀況較為嚴重，有研究表明，在含有黃曲霉毒素的玉米樣品中，伏馬菌素的檢出率為100%，伏馬菌素與其他真菌毒素還存在著協同作用。因此加強對伏馬菌素的檢測對于保證飼料和糧食安全具有重要意義。

1 材料

伏馬菌素Fumonisin（FB1，純度：99%）、甲醇（色譜純）、醋酸銨（色譜純）、甲酸（分析純）、三氯甲烷（分析純）、超純水、固相萃取柱：C-18，500 mg/3 mL

2 儀器與設備

低溫冷凍高速離心機、電動試管振蕩器、精密恒溫水浴箱、液相色譜儀、三重四級桿質譜儀、電子天平（精度0.0001 g）、拍打式均質器、冰箱、全支消毒自動加液器（帶濾頭）、旋轉蒸發器、氮吹儀、固相萃取儀。

3 儀器設置參數

3.1 質譜條件

電離模式：ESI+；毛細管電壓：4 kV；霧化氣壓力：40 psi；離子源溫度：100℃；錐孔電壓：140 v；脫溶劑氣溫度：350℃；脫溶劑氣流量：9 L/min；

質量分析器：

八級桿離子導引電壓：600 v；碰撞池壓力：450 psi；出口電壓：-7 V；入口電壓：1V；掃描范圍：50-2000；真空度：2.92E-6 Torr

檢測器電壓：-10kv；EMV：1540 V；delta EMV：300V

3.2 色譜條件

色譜柱：Venusil ASB C18柱4.6×150 mm粒徑3μm；柱溫：25℃；進樣體積：5.0μL；流速：0.3 mL/min；流動相A：10 mM醋酸銨溶液（加0.1%甲酸），流動相B：甲醇（加0.1%甲酸）

色譜梯度洗脫條件：30%B（0 min），80%B（10 min），100%B（10 min），100%B（10 min），35%B（15 min）。

4 試驗方法

4.1 標準溶液配制

用甲醇將伏馬菌素標準品配制成1μg/mL標準儲備液，此液在2℃下避光保存；臨用前用甲醇/10 mm醋酸銨（50/50，體積比）溶液稀釋標準儲備液，用胖肚移液管吸取儲備液1 mL定容到100 mL。此濃度為10 ng/mL，吸取1、2、5、10、mL定容到25 mL容量瓶配制濃度分別為：0、0.4、0.8、2.0、4、8 ng/mL的標準工作溶液。

4.2 樣品制備

固體樣品粉碎拌勻過篩后，準確稱取2 5 g于2 50 mL的錐形瓶中，加入100 mL甲醇溶液，超聲30 min，靜置15 min，上清液過濾于旋轉燒瓶中，再次加入50 mL甲醇溶液至錐形瓶，超聲30 min，靜置1 5 min，過濾于同一旋轉燒瓶中。將濾液蒸干。用甲醇溶液準確定容到5 mL，從中吸取2 mL過C-18柱，用20 mL甲醇溶液洗脫。用氮氣吹干后，用甲醇/10 mm醋酸銨（50/50）定容到2 mL。用0.22μm微孔濾膜過濾，濾液供測試。

4.3 方法檢出限與定量限

將伏馬菌素的標液稀釋成0.1 ng/mL和0.02 ng/mL兩種濃度。取經檢測不含伏馬菌素污染玉米樣品作為試驗樣品，分別加入混標1 mL，按樣品預處理方法進行處理。經檢測后，按3倍的信噪比計算方法檢出限，10倍的信噪比計算毒素的最低定量限。

結果如下：伏馬菌素的檢測數據自動帶入線性方程y=2914.5x-75.018相關系數為0.999，檢出限0.030μg/kg，定量限0.10μg/kg

4.4 回收率

取過100目篩玉米粉、玉米粒樣品各取4份，每份25 g，其中2份加入1 ng/mL的混標，2份做空白，按樣品預處理方法操作，過100目篩玉米粉的回收率為110.60%，玉米籽粒為79.8%。

5 結語

采用甲醇作為提取液，經C₁₈固相萃取柱凈化、濃縮，粒徑3μm的C₁₈色譜柱分離、液相色譜串聯三重四級桿質譜檢測，可以較好的檢測玉米籽粒中的伏馬菌素，該分析方法簡便、快速，檢測靈敏度高。