表達hTERT及SV40T永生化奶牛乳腺上皮細胞系的建立

摘要：構建pcDNA3.1-hTERT、pcDNA3.1-SV40 T載體，線性化后，共轉染荷斯坦奶牛乳腺上皮細胞，研究人端粒酶逆轉錄酶（hTERT）和猿猴病毒40大T抗原（SV40 T）對荷斯坦奶牛乳腺上皮細胞體外培養的作用，并對細胞進行RT-PCR檢測分析及免疫熒光鑒定。結果表明， hTERT和SV40 T在奶牛乳腺上皮細胞中表達可以有效地延長細胞的體外培養時間，增加細胞傳代次數，獲得的細胞系可以正常表達角蛋白。說明在體外培養的乳腺細胞中共表達hTERT和SV40 T可以有效延長細胞壽命且不影響乳腺細胞特性。

關鍵詞：荷斯坦奶牛乳腺上皮細胞；永生化；端粒酶；猿猴空泡病毒40大T抗原

中圖分類號：Q786文獻標識號：A文章編號：1001-4942（2013）02-0001-04

乳腺上皮細胞具有合成和分泌乳汁的功能，在體外培養條件下仍可保持其特性，該特性在制備動物乳腺生物反應器及研究外源基因在細胞水平的表達具有重要意義[1～3]。另外，利用乳腺上皮細胞的模型，還可以在體外研究某些激素、因子等對乳腺上皮細胞的影響，分析乳腺分泌的活性物質與乳腺疾病發生之間的關系，同時也可以用于乳腺發育調控的研究[4]。但是，乳腺上皮細胞在體外傳代次數有限，且細胞活性與體外培養時間呈負相關，通過正常培養的手段獲得可以用于體外研究的乳腺上皮細胞具有很大的難度，正常體外研究中缺少乳腺細胞模型，這嚴重制約了外源基因在細胞水平表達的研究。因此，通過一些方法延長乳腺上皮細胞體外培養時間，甚至得到永生化的乳腺上皮細胞是非常有意義的。……