布魯氏菌S19疫苗免疫奶牛血清凝集抗體的動(dòng)態(tài)變化與水解素皮膚變態(tài)反應(yīng)相關(guān)分析

摘要：觀察奶牛在布魯氏菌S19疫苗免疫狀態(tài)下血清凝集抗體的動(dòng)態(tài)變化規(guī)律和免疫后奶牛對(duì)布魯氏菌水解素的皮膚遲發(fā)性變態(tài)反應(yīng)差異，并探索兩者的相關(guān)性，尋找選擇布魯氏菌病抗性牛的方法。選擇布病陰性的性成熟青年黑白花奶牛50頭，注射S19疫苗1×109 CFU/頭，定期采集血液測(cè)抗體水平，第60天用布魯氏菌水解素皮內(nèi)注射，檢測(cè)變態(tài)反應(yīng)。結(jié)果顯示，所有免疫牛均能在15天時(shí)檢測(cè)到凝集抗體，30天達(dá)到峰值。遲發(fā)性變態(tài)反應(yīng)表明，免疫牛對(duì)布魯氏菌水解素具有良好的敏感性，變態(tài)反應(yīng)強(qiáng)度與抗體峰值水平存在相關(guān)性，但差異不顯著，相關(guān)系數(shù)為0.235。

關(guān)鍵詞：奶牛；布魯氏菌；凝集抗體；變態(tài)反應(yīng)

中圖分類號(hào)：S852.4+5文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)號(hào)：A文章編號(hào)：1001-4942（2013）02-0011-04

布魯氏桿菌病是一種廣泛流傳的重要的動(dòng)物傳染病。在多數(shù)宿主動(dòng)物中主要表現(xiàn)為流產(chǎn)。依據(jù)對(duì)宿主的偏好性可以將其分為9個(gè)主要種，其中6個(gè)經(jīng)典種包括：Brucella melitensis（羊種）， Brucella abortus （牛種）， Brucella suis （豬種）， Brucella canis （犬種）， Brucella neotomae （沙林鼠種）， Brucella ovis （綿羊附睪種）。根據(jù)培養(yǎng)和生物學(xué)特性又將這6個(gè)種劃分為18個(gè)亞型。最近又鑒定到3個(gè)新種，分別為B. microti（田鼠型），Brucella pinnipediae（鰭型）和 Brucella cetacea（鯨型）。這些種主要感染山羊、牛、豬以及綿羊等[1]。

世界上約有101個(gè)國(guó)家和地區(qū)的牛有布病流行。目前在我國(guó)31個(gè)省市區(qū)中有25個(gè)省市區(qū)的人、畜有布病存在和流行。我國(guó)受布病威脅的人口約有3.5億。人間布病發(fā)病率的回升與動(dòng)物布病的發(fā)病率呈正相關(guān)，這些數(shù)據(jù)表明，我國(guó)動(dòng)物布病的危害非常嚴(yán)重[2]。

致病布魯氏菌通過在胎盤滋養(yǎng)層定殖引起雌性動(dòng)物流產(chǎn)以及雄性動(dòng)物不育。人感染B. abortus 或B. Melitensis后表現(xiàn)不同的癥狀甚至威脅生命。該病的確診主要依靠在流產(chǎn)的組織、分泌物中分離出布魯氏菌來確認(rèn)[3]。疑似病例的診斷一般采用血清學(xué)反應(yīng)來進(jìn)行診斷： 孟加拉玫紅試驗(yàn)、玻片凝集試驗(yàn)，補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn)或酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA）等。然而，由于凝集抗體的消失，還沒有一種血清學(xué)方法能很好地檢測(cè)個(gè)體或群體流行情況下的布病的存在。間接ELISA或乳汁環(huán)狀試驗(yàn)在檢測(cè)批量的乳牛布魯氏菌時(shí)還是很有效的。但是乳汁環(huán)狀試驗(yàn)檢測(cè)大量的獸群布病的結(jié)果卻不太可信[4～6]。

布魯氏菌素皮膚試驗(yàn)又稱變態(tài)反應(yīng)試驗(yàn)，主要檢測(cè)機(jī)體變態(tài)反應(yīng)水平的高低。因?yàn)樽儜B(tài)反應(yīng)一般在感染后20～25天出現(xiàn)，因此不宜做早期診斷。本方法主要用于動(dòng)物的大群檢疫。本實(shí)驗(yàn)具有極高的特異性，布魯氏菌素陽性而血清學(xué)陰性的動(dòng)物可視作感染動(dòng)物。但布魯氏菌素試驗(yàn)不能檢出所有感染動(dòng)物個(gè)體，因此，在國(guó)際貿(mào)易中不能單獨(dú)作為正式的診斷試驗(yàn)，而應(yīng)有可靠的血清學(xué)試驗(yàn)進(jìn)一步證實(shí)。皮內(nèi)注射布魯氏菌素可誘導(dǎo)細(xì)胞反應(yīng)的暫時(shí)性無應(yīng)答，因此同一動(dòng)物兩次檢查之間應(yīng)間隔6周以上。布魯氏菌作為胞內(nèi)寄生的細(xì)菌，能誘導(dǎo)機(jī)體發(fā)生變態(tài)反應(yīng)，該方法也是判斷動(dòng)物是否感染布魯氏菌的經(jīng)典方法之一[7，8]。

目前評(píng)價(jià)布病疫苗效果的主要方法仍是攻毒實(shí)驗(yàn)，這是一種耗時(shí)而昂貴的評(píng)價(jià)手段。如何利用抗體水平、變態(tài)反應(yīng)強(qiáng)度或二者結(jié)合評(píng)價(jià)布病疫苗的免疫效果，是布病疫苗研究領(lǐng)域中值得探討的課題之一。本實(shí)驗(yàn)用布魯氏菌疫苗免疫奶牛，分析了奶牛在免疫情況下抗體水平和變態(tài)反應(yīng)強(qiáng)度之間的相關(guān)性，為布病的防控和疫苗評(píng)價(jià)提供技術(shù)方法。