奶牛腹腔巨噬細胞的分離與鑒定

摘要：以無血清的RPMI-1640培養液灌洗奶牛腹腔，分離獲取奶牛腹腔巨噬細胞，在含10%小牛血清的RPMI-1640培養液中培養。采用倒置顯微鏡觀察細胞形態，并通過瑞氏染色計算其純度。結果表明，采用無血清的RPMI-1640培養液灌洗奶牛腹腔，能夠獲得較高純度的巨噬細胞，能為奶牛胞內寄生菌存活機制的研究提供很好的試驗材料。

關鍵詞：奶牛；巨噬細胞；分離培養

中圖分類號：S823.9+1；Q813文獻標識號：A文章編號：1001-4942（2013）02-0038-03

巨噬細胞（Macrophage）為免疫活性細胞，是機體免疫系統的重要細胞，在機體固有和適應性免疫功能中扮演著極其重要的角色，可作為抗原呈遞細胞在誘導特異性免疫反應中發揮重要作用，其產生的可溶性細胞活素類因子參與調節特異性免疫反應。巨噬細胞也是各類病原的靶細胞[1]，包括分支桿菌、沙門氏菌、衣原體等。

腹腔巨噬細胞是腹腔抗感染的第一道防線，是研究機體自然免疫和獲得性免疫關系的重要研究材料。但是迄今為止的報道多為有關小動物如大鼠、豚鼠、小鼠的腹腔巨噬細胞的分離鑒定，綿羊[2]、豬[3]、牛[4]等大家畜也有肺泡巨噬細胞分離的報道，尚未見有關奶牛腹腔巨噬細胞分離鑒定的方法。因此，本研究擬運用RPMI-1640培養液灌洗奶牛腹腔的方法，獲得高純度、高活性的腹腔巨噬細胞并進行相關鑒定，為下一步構建奶牛巨噬細胞噬菌體文庫和以巨噬細胞為模型研究奶牛免疫機制奠定基礎。

1材料與方法

1.1主要試劑和儀器

RPMI-1640培養基購自Hyclone，小牛血清購自天津灝洋生物工程公司，酸性磷酸酶染液、α-醋酸萘酚酯酶染液，HE染液試劑盒購自南京建成科技有限公司，瑞氏-姬姆薩染色液購自濟南百博生物技術有限公司；……