牛流行熱病毒山東地方株的分離與鑒定

摘要：利用BHK-21細胞，接種山東濟南地區疑似牛流行熱病牛高熱期的抗凝血，經盲傳3代，分離到1株病毒，經RT-PCR鑒定為牛流行熱病毒，命名為BEFV-SD。理化特性試驗表明：BEFV-SD對熱敏感，56℃ 10 min、37℃18 h可被滅活，對乙醚、氯仿等敏感；BEFV-SD可被BEFV陽性血清中和，中和效價為1∶408；將BEFV-SD的G基因與GenBank中公布的BEFV進行同源性比較，同源性達到96.3%以上。

關鍵詞：牛流行熱病毒；分離；鑒定；同源性

中圖分類號：S855.3文獻標識號：A文章編號：1001-4942（2013）02-0031-04

牛流行熱 （Bovine Ephemeral Fever，BEF）是由牛流行熱病毒（Bovine Ephemeral Fever Virus，BEFV）引起的牛和水牛的一種急性、熱性傳染病，其特征是突發高熱、呼吸迫促、消化機能障礙、全身虛弱、僵硬、跛行[1]。首先發現于19世紀中期的東非，隨后流行于非洲、亞洲和大洋洲許多國家和地區[2～5]。本病流行具有明顯的季節性，多發生于雨量多和氣候炎熱的7～10月。該病傳播迅速，流行面廣，有一定的周期性[6]，曾在我國多個省份多次發生，導致奶牛產奶量降低，乳品質下降，役用牛跛行或癱瘓，部分懷孕母牛流產，給養牛業造成重大經濟損失。本實驗室采集了疑似患牛流行熱病牛高熱期的抗凝血，進行了病原分離，經各項試驗鑒定，證實分離獲得了牛流行熱病毒。

1材料與方法

1.1實驗材料

1.1.1病料來源采集山東省濟南市周邊出現急性發熱、呼吸道和消化道機能障礙的奶牛高熱期的靜脈血，肝素鈉抗凝，-20℃保存。

1.1.2實驗材料100 mm培養皿、96孔培養板為Costar產品，DMEM營養液、胎牛血清購自Giboco公司，RNA提取試劑盒、RT-PCR試劑盒、DL2000 DNA Marker等分子生物學試劑購自大連寶生物工程公司，瓊脂糖、溴化乙腚等試劑購自上海生工生物技術有限公司，BHK-21細胞為山東省農科院奶牛研究中心實驗室保存。……