祁連圓柏葉乙醇提取物揮發性成分GC—MS分析

[摘要] 目的 采用氣相色譜-離子肼質譜聯用法測定分離祁連圓柏葉中乙醇提取物。方法 用70%乙醇常溫浸漬提取祁連圓柏葉中成分，用氣相色譜-離子肼質譜儀對所得的祁連圓柏葉浸膏進行鑒定分析，色譜圖用面積歸一化法測定組分的相對百分含量。結果 所得的質譜圖采用去卷積化分析并在 NIST 98標準圖譜庫中比對檢索化合物，共鑒定了12個組分，按面積歸一化法計算，其峰面積比重占揮發性成分的90%。結論 通過采用自動質譜退卷積定性系統（AMDIS）處理數據，增加對目標成分定性的準確性，提高色譜峰純度，從而提高了定性的準確性。

[關鍵詞] 氣相色譜-離子肼質譜；祁連圓柏；揮發性成分；面積歸一化法；AMDIS

[中圖分類號] R284 [文獻標識碼] B [文章編號] 1673-9701（2013）01-0070-02

祁連圓柏（Juniperus Przewalskii Kom）[1，2]為常綠喬木，性味苦澀、微寒，可用于治療咯血、尿血、便血等，是一種常用藏藥的藥源植物。近年來有研究發現[3]，祁連圓柏種子及樹葉中均含有揮發性的二帖類成分，藥材氣味芳香，對女性卵巢癌有較好的抑制效果。另外王索安等[4]研究發現祁連圓柏提取物對人胃癌細胞SGC-7901細胞具有明顯的增值抑制及誘導凋亡作用。本實驗采用70%乙醇提取祁連圓柏葉子中的有效成分，采用氣相色譜結合質譜分析祁連圓柏葉子中的揮發性物質，并結合標準質譜圖譜庫NIST98搜索并初步分析其中的成分，并希望通過初步的成分分析，為以后的有效成分分離確定及藥效學工作打下基礎。

1 材料與方法

1.1 材料

Finnigam Innigam Trace GC Ultra氣相色譜儀，Finnigam Polaris Q 離子肼質譜檢測器、Dikma Cp-sil 5CB-MS FS（30 m×0.25 mm ID×0.25 μm df）毛細管氣相色譜柱，Thermo AS 3000自動進樣器。祁連圓柏葉子粉末藥材采自青海甘肅（由浙江醫學高等專科學校藥學系天然藥物實驗室鄧茂芳副教授鑒定），其他溶劑（乙醇、三氯甲烷、石油醚）均為分析純。

1.2 方法

1.2.1 供試液提取及處理 稱取祁連圓柏干燥藥材葉子粉末200 g，置500 mL圓底燒瓶中，先加入適量石油醚浸提至無色，再用70%乙醇600 mL，常溫浸漬3～4次至無色。浸漬液紗布過濾后，濾液用旋轉蒸發儀揮發干凈，得浸膏。稱取約100 mg 浸膏用2 mL三氯甲烷溶解得供試液，備用。

1.2.2 GC-MS條件 毛細管氣相色譜柱Restek DB-5，載氣：高純氦氣，流速1.0 mL·min-1，進樣口溫度：300℃，接口溫度：280 ℃，離子源溫度200 ℃，進樣方式：不分流進樣，柱程序升溫：初溫80℃，保持1 min后，以5 ℃·min-1的速率升溫至200 ℃，保持15 min。進樣量為1 μL。從進樣5 min開始質譜以全掃描方式檢測，掃描范圍：（33～420） m/z，電離方式為EI，電子轟擊能量為70 eV，倍增電壓1300 V。其氣相色譜圖見圖1。

2 結果

取上述供試液，按前述“1.2.2”條件分別進行GC-MS分析。經掃描后得色譜峰的總離子流圖，采用AMDIS 處理GC/MS 數據文件，用AMDIS 對文件中每個離子的質量色譜圖進行分析，對不同的峰選取1～2個模型離子（model ion），比較其他離子與模型離子峰在保留時間和峰形上的相似度，確定該離子是否歸屬于此峰。整個文件掃描后，將所有具有相同保留值和峰形的離子組合成一張新的質譜圖，分別對新建譜圖、原始譜圖在NIST98譜庫中進行檢索，分析比較不同重疊程度對拆分結果的影響。確認各化合物；通過Xcalibur工作站數據處理系統，按峰面積歸一化法計算各化合物相對百分含量。結果見表1。

3討論

祁連圓柏是常用中藏藥。2000 年宗玉英等[5]對110 種植物藏藥進行了體外篩選實驗， 發現5 種中藏藥對人乳腺癌、肺癌、口腔上皮癌具有殺傷作用， 但抗腫瘤機制不明， 祁連圓柏是其5 種之一。本實驗采用氣相色譜-離子肼質譜法對祁連圓柏葉乙醇提取物揮發性成分進行分析， 由表可知， 已鑒定的化合物占提取物總量的80%以上， 已鑒定的成分占總峰面積的90%以上。在已鑒定的組分12個組分中， 有多種組分是文獻未曾報道過的。其中檢出一種與貝母堿結構類似的物質——Verticiol（圖2），其主要藥效表現為鎮咳也與文獻報道祁連圓柏的臨床運用基本一致。首次檢出的桃柁酚文獻報道[6]具有對金黃色葡萄球菌有很好的抑制作用。在檢出的成分中包含海松酸及海松醛等成分均在松科植物的樹脂（松脂）中發現過，說明柏科植物揮發性成分與松科植物揮發性成分物質具有一定的相似性。在處理離子肼質譜數據過程中，由于測試樣品背景比較復雜，干擾較多，常規的扣減本底干擾的方法不能很好的消除影響。通過采用自動質譜退卷積定性系統（AMDIS）處理數據，可以較好的消除重疊峰質譜圖互相干擾，增加對目標成分定性的準確性，提高色譜峰純度，從而提高了定性的準確性。

綜上，這一研究結果將為我國西北地區的祁連圓柏資源進一步開發利用提供有益的幫助。

[參考文獻]

[1] 高靜，單鳴秋. 柏科藥用植物研究進展[J]. 中藥材，2008，31（11）：1765.

[2] 周寶石. 祁連圓柏化學成分研究[J]. 陜西師范大學學報，2005，33（3）：68.

[3] 王文蜀，李二偉. 祁連圓柏中一種新的抗癌活性二萜[J]. 蘭州大學學報，2002，38（6）：121.

[4] 王索安，王瑋. 祁連圓柏對人胃癌細胞SGC-7901細胞周期和凋亡影響的實驗研究[J]. 中國中醫藥科技，2010，17（3）：208.

[5] 宗玉英，黨合群，駱桂法，等. 110 種植物藏藥進行體外篩選的實驗研究[J]. 藥學實踐雜志，2000，18（5）：290.

[6] 王曉紅，于錄. 桃柁酚對金黃色葡萄球菌生物膜及icaA表達的抑制作用，2012，42（7）：753.

（收稿日期：2012-08-02）