豬、雞空腸彎曲桿菌的分離鑒定及藥敏試驗(yàn)

摘 要：為了解貴陽(yáng)市空腸彎曲菌對(duì)常用藥物的敏感性情況，從規(guī)模化養(yǎng)殖場(chǎng)和大型農(nóng)貿(mào)市場(chǎng)采集了175份豬和雞肛門(mén)拭子，進(jìn)行空腸彎曲桿菌的分離鑒定，并采用微生物藥物敏感性試驗(yàn)執(zhí)行標(biāo)準(zhǔn)（CLSI M100-S20）測(cè)定其對(duì)12種抗菌藥物的耐藥情況，結(jié)果表明，共分離得到29株空腸彎曲桿菌，分離率為16.57%。分離菌對(duì)12種抗菌藥物的耐藥率分別是多粘菌素E100%、頭孢噻呋100%、磺胺異惡唑82.76%、土霉素82.76%、氟苯尼考75.86%、氨芐西林68.96%、阿莫西林68.96%、慶大霉素62.07%、恩諾沙星55.17%、氧氟沙星51.72%、大觀霉素41.38%、SMZ34.48%。所有受試菌株中的89.96%具5重以上的耐藥性。

關(guān)鍵詞：空腸彎曲菌；耐藥性；微量肉湯稀釋法；藥敏試驗(yàn)

中圖分類(lèi)號(hào)：S852.61 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A DOI編碼：10.3969/j.issn.1006-6500.2013.03.010

空腸彎曲桿菌是引起人腸道感染的主要代表菌之一，是一種人和家畜都可攜帶的病原菌，普遍存在于恒溫動(dòng)物中，家禽中雞的帶菌率最高，除引起腸炎腹瀉外，還引起食物中毒，并伴發(fā)關(guān)節(jié)炎、肝炎、格林-巴利綜合癥等免疫損傷性疾病[1-3]。在獸醫(yī)學(xué)上，可導(dǎo)致豬、牛、羊流產(chǎn)，不孕，腹瀉以及家禽肝炎[4]。2009年6月農(nóng)業(yè)部對(duì)各省、自治區(qū)、直轄市下達(dá)的動(dòng)物源細(xì)菌耐藥性監(jiān)測(cè)計(jì)劃中包含了空腸彎曲桿菌，因此，空腸彎曲桿菌及其引起的疾病越來(lái)越受到關(guān)注。本研究就貴陽(yáng)市花溪區(qū)大型農(nóng)貿(mào)市場(chǎng)及養(yǎng)殖場(chǎng)豬源、雞源空腸彎曲桿菌對(duì)12種市售常用抗菌藥物的敏感性進(jìn)行了測(cè)定。

1 材料和方法

1.1 材 料

1.1.1 樣品 從花溪地區(qū)規(guī)模化養(yǎng)殖場(chǎng)和大型農(nóng)貿(mào)市場(chǎng)共采集175份肛門(mén)拭子，其中養(yǎng)殖場(chǎng)雞源肛門(mén)拭子125份，豬源肛門(mén)拭子25份，農(nóng)貿(mào)市場(chǎng)雞源肛門(mén)拭子25份。

1.1.2 標(biāo)準(zhǔn)菌株 空腸彎曲桿菌標(biāo)準(zhǔn)菌株（CIC222936）購(gòu)自中國(guó)工業(yè)生物菌種保藏管理中心。

1.1.3 培養(yǎng)基及試劑 bolton選擇性增菌肉湯、布氏肉湯、MH肉湯，改良CCD瓊脂，skirrow瓊脂，哥倫比亞瓊脂均購(gòu)自上海博微生物科技有限公司；3%過(guò)氧化氫、無(wú)菌脫纖維羊血購(gòu)自貴州賽蘭博生物科技公司；氧化酶試紙、馬尿酸鈉水解試劑、吲哚乙酸紙片購(gòu)自青島海博生物技術(shù)有限公司；微需氧產(chǎn)氣袋購(gòu)自上海寶曼生物科技有限公司。

1.1.4 抗菌藥物 氨芐西林（AM）、阿莫西林（A）、頭孢噻呋（CEF）、慶大霉素（GM）、大觀霉素（SPT）、氟苯尼考（FFC）、磺胺甲基異惡唑（SQ）、復(fù)方新諾明（SMZ）、恩諾沙星（ENR）、氧氟沙星（OFL）、多粘菌素E（PME）和土霉素（OTC）購(gòu)自杭州博微生物技術(shù)有限公司。

1.2 方 法

1.2.1 菌株的分離鑒定 空腸彎曲菌的分離鑒定按GB/T 4789.9—2008的標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行[5]。

1.2.2 藥敏試驗(yàn) 按照《細(xì)菌耐藥性檢測(cè)抗感染治療》及微生物藥物敏感性試驗(yàn)執(zhí)行標(biāo)準(zhǔn)（CLSI m100-s20）進(jìn)行[6-7]。抗菌藥物敏感性試驗(yàn)判定標(biāo)準(zhǔn)如表1所示。

2 結(jié)果與分析

2.1 空腸彎曲桿菌的檢出率

150份雞源肛門(mén)拭子樣品中檢出空腸彎曲菌26株，其中農(nóng)貿(mào)市場(chǎng)17株，規(guī)模養(yǎng)殖場(chǎng)9株，檢出率17.3%；25份豬源肛門(mén)拭子檢出3株；檢出率為12%，平均陽(yáng)性率16.57%。

2.2 藥敏試驗(yàn)結(jié)果

從表2可以看出，分離菌對(duì)12種抗菌藥物的耐藥率分別是多粘菌素E100%、頭孢噻呋100%、磺胺異惡唑82.76%、土霉素82.76%、氟苯尼考75.86%、氨芐西林68.96%、阿莫西林68.96%、慶大霉素62.07%、恩諾沙星55.17%、氧氟沙星1.72%、大觀霉素41.38%、復(fù)方新諾明34.48%。

2.3 多重耐藥情況

29株空腸彎曲菌中所有菌株均出現(xiàn)了多重耐藥性，最低的2重耐藥，最高12重耐藥，89.66%的菌株出現(xiàn)了5重以上的耐藥性（表3）。

3 討 論

本試驗(yàn)采用微需氧產(chǎn)氣袋分離空腸彎曲桿菌的分離率為16.57%，高于江蘇地區(qū)7.6%、河南0.6%、華東地區(qū)8.96%的分離率[9-11]，低于山東30.8%、上海43.2%、安徽45.2%、浙江30.4%等地屠宰場(chǎng)中豬盲腸的分出率[11]。在本研究中，雞源樣品檢出率高于豬源樣品，這也說(shuō)明了家禽中雞是空腸彎曲桿菌帶菌率最高的動(dòng)物，曾有報(bào)告雞攜帶空腸彎曲桿菌最高可達(dá)100%[12]，因此，做好對(duì)雞源空腸彎曲菌的有效監(jiān)控對(duì)于防控空腸彎曲菌病的發(fā)生及其傳播具有重要意義。

本試驗(yàn)采用微量肉湯法對(duì)所分離29株空腸彎曲菌進(jìn)行12種常用抗菌藥物藥敏試驗(yàn)，結(jié)果表明，大觀霉素41.38%，慶大霉素62.07%的耐藥率遠(yuǎn)高于江蘇地區(qū) 14.8%[8]；比Reina[13]、Bardon[14]報(bào)道的1%～9.4%有明顯增高；29株空腸彎曲菌對(duì)氨芐西林68.96%耐藥率高于薛峰等[10]37.96%、李彩金等[15]36%檢測(cè)結(jié)果；而對(duì)復(fù)方新諾明34.48%耐藥性低于侯鳳琴等[16]（88.5%）、黃金林等[17]99.07%，因此，上述藥物應(yīng)為本地區(qū)養(yǎng)殖場(chǎng)治療空腸彎曲菌病的優(yōu)選藥物。此外全部菌株都出現(xiàn)了多重耐藥性，多數(shù)受試株出現(xiàn)5重以上耐藥性，這提示在實(shí)際用藥中避免同時(shí)交叉用藥，應(yīng)該科學(xué)間歇性輪換用藥。

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