阿魏葉的指紋圖譜研究

摘 要：采用高效氣相色譜法，對不同產地和不同肥料種植的阿魏葉中的成分進行指紋圖譜研究。結果表明，氣相色譜指紋圖譜中多數組分可以達到較好的分離，共得到17個共有峰，不同施肥條件下相似度較好，但不同產地之間相似度差異較大。本方法具有較好的穩定性、精密度和重復性，所建立的指紋圖譜可用于阿魏藥材及阿魏葉的鑒定及質量評價。

關鍵詞：阿魏葉；氣相色譜；指紋圖譜

中圖分類號：R282 文獻標識碼：A DOI編碼：10.3969/j.issn.1006-6500.2013.03.004

阿魏是著名的“西域藥材”之一，別名臭阿魏。《中華人民共和國藥典》2010年版收載的阿魏來源于傘形科（Umbelliferae）阿魏屬（Ferula）植物新疆阿魏Ferula sinkiangensis K.M.Shen或阜康阿魏Ferula fukanensis K.M.Shen分泌的樹脂。阿魏屬植物全世界有150種，在我國有25種[1]。1987年國務院發布《野生藥材資源保護管理條列》，國家醫藥管理局頒布“國家重點保護野生藥材物種名錄”，新疆阿魏和阜康阿魏被列為三級保護植物。《中國植物紅皮書》新疆阿魏被列為三級瀕危植物。為此，是否更能夠有效保護及可持續利用珍惜藥用植物阿魏，以保根采集葉片和地上部分的方法。通過高效氣相色譜法建立不同產地的新疆阿魏葉的指紋圖譜，為新疆阿魏葉藥材質量控制研究提供依據。

1 材料和方法

1.1 試驗材料

選用在新疆伊犁野生條件下生長的阿魏與新疆阜康人工種植的阿魏作為試驗對象，設計人工種植的阿魏以N、K、P、NK、KP、NP、NPK等單混施肥條件來處理。根據同一時期采集兩個不同產地阿魏進行相似度比較，為建立阿魏藥材及阿魏葉的指紋圖譜和質量評價提供技術支持。

1.2 儀器與條件

美國惠普公司HP6890氣相色譜儀，毛細管柱：HP-5柱（30 m × 0.32 μm），氫火焰離子化檢測器，ER-182A型電子天平，DRT-TW形調溫電熱套（鄭州長城科工貿有限公司），揮發油提取器。

色譜條件：進樣口溫度260 ℃，分流比5∶1；柱溫：60 ℃以3 ℃·min-1 升至246 ℃；檢測器溫度280 ℃，H2流速30 mL·min-1；N2為載氣，流速1.02 mL·min-1；進樣量1 μL。

1.3 供試品制備

吸收劑的選擇：稱取阿魏葉10 g，粉碎過0.84 mm篩后置于500 mL圓底燒瓶，用揮發油提取器進行水蒸氣蒸餾4 h，因為其揮發性成分較少、樣品量限制、采用無溶劑方法無法得到揮發油成分，分別以石油醚、正己烷和乙酸乙酯（1 mL）作為吸收劑，提取物定容到100 μL，進樣1 μL。結合譜圖分析最終選擇乙酸乙酯為吸收劑。

樣品制備：稱取阿魏葉10 g，粉碎過0.84 mm篩后置于500 mL圓底燒瓶，用揮發油提取器進行水蒸氣蒸餾4 h，乙酸乙酯1 mL作為吸收劑，提取物定容到100 μL，進樣1 μL。

2 結果與分析

2.1 精密度試驗

取同一供試品溶液（以Y8為代表），連續進樣5次。以峰6為對照，計算各共有峰的相對保留時間和相對峰面積百分比。結果各共有峰的相對保留時間RSD均小于0.1%，大于10%相對峰面積百分比RSD均小于5%，表明本方法精密度良好。

2.2 穩定性試驗

取新疆阿魏葉揮發油，按照確定的供試品溶液制備方法操作，分別于2，4，6，8，10 h進樣測定。結果各共有峰的相對保留時間RSD均小于0.1%，相對峰面積百分比RSD均小于5%，表明供試品溶液在24 h內穩定。

2.3 重復性試驗

取同一批阿魏6份，按照確定的供試品溶液制備方法操作并測定，計算各共有峰的相對保留時間和相對峰面積百分比。結果各共有峰的相對保留時間RSD均小于0.1%，相對峰面積百分比RSD均小于5%，表明本方法重復性良好。

2.4 指紋圖譜與技術參數

2.4.1 指紋圖譜共有峰的標定 將17批次阿魏制成供試品溶液進行測定，應用《中藥色譜指紋圖譜相似度評價系統》（2004A版，國家藥典委員會）比較17批次阿魏的色譜圖（圖1，2），確定其中17個色譜峰是共有的，確定為共有峰。

2.4.2 相似度評價 應用《中藥色譜指紋圖譜相似度評價系統》（A版，國家藥典委員會）對17批次阿魏的色譜圖進行相似度評價。以17批次樣品色譜圖擬合圖譜為對照圖譜，經一系列分析得知，峰12對整體的相似度影響較大，且其峰面積百分比大于10%，因此不能舍去，17批次樣品與對照圖譜的相似度部分偏小。此外，因17批次樣品中前14批為人工種植，后3批為野生，分開進行評價，相似度均在0.8以上，說明阿魏人工種植和野生化學成分有一定的差異性（表1）。

3 結論與討論

由于峰6的峰面積和保留時間均居中，且與鄰近色譜峰的分離度較好，故以峰6作為參照峰。本研究采用GC法測定了17批次不同產地及不同施肥方法栽培的阿魏葉指紋圖譜，結果表明，不同種植方式阿魏葉的化學組成有一定的差異，同種種植方式化學組成的相似度均在0.8以上，可據此評價和控制阿魏藥材的質量。但是不同產地的阿魏所含成分的含量差異較大，相對峰面積百分比RSD差異很大，說明不同產地阿魏藥材的化學成分含量有差異，這可能是受氣候、生態環境和栽培種植方法等的影響。

參考文獻：

[1] 中國科學院. 中國植物志[M].北京：科技出版社，2004.

[2] 王珊，柯瑾，蒲旭峰. 阿魏揮發油成分GC指紋圖譜研究[J].中成藥， 2008，30（4）：472-475.

[3] 鄧衛萍，解成喜，符繼紅. 新疆阿魏揮發油成分氣相色譜-質譜分析[J].質譜學報，2007，28（2）：114-116.

[4] 周欣，陳華國，趙超，等. 蓬莪術藥材的指紋圖譜研究[J]. 時珍國醫國藥，2008，19（6）：1359-1360.

[5] 王月娥，司建勇，李曉瑾，等. 新疆阿魏種子化學成分研究（I）[J]. 中國現代醫藥，2011，13（1）：26-28.

[6] 國家中醫藥管理局中華本草編委會. 中華本草維吾爾藥卷[M].上海：上海科技出版社， 2005.

[7] Pimenov M G， Sklyar Y E ，Savina A A， et al. Chemosystematics of section palaeonarthex of the genus Ferula[J]. Bioehem Sys tern Ecol， 1982，10（2）：133-138.

[8] Min Z D， Maio Q F，Mi Z， et al.Polysulfanes in the volatile oil Ferula species[J].PlantMedical，1987， 53（3）：300-302.