2，4—二硝基氯苯和對(duì)硝基氯苯對(duì)斑馬魚(yú)的急性毒理學(xué)作用

摘 要：研究2，4-二硝基氯苯和對(duì)硝基氯苯對(duì)斑馬魚(yú)的急性毒理學(xué)作用，結(jié)果表明，2，4-二硝基氯苯的24h、48h、72h、96h的LC50分別為0.371、0.444、0.642、0.928 mg/L，毒性為高毒；對(duì)硝基氯苯的24h、48h、72h、96h的LC50分別為33.732、29.843、28.714、25.593 mg/L，毒性為低毒。

關(guān)鍵詞：2，4-二硝基氯苯；對(duì)硝基氯苯；斑馬魚(yú)；毒性

中圖分類(lèi)號(hào) S965.9 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼 A 文章編號(hào) 1007-7731（2013）01-02-104-02

隨著現(xiàn)代農(nóng)業(yè)的發(fā)展，農(nóng)藥成為養(yǎng)殖水體中較為常見(jiàn)的污染物之一。在農(nóng)業(yè)生產(chǎn)中，由于在對(duì)臨近養(yǎng)殖水體的農(nóng)作物使用農(nóng)藥不當(dāng)，使得農(nóng)藥直接滲透到水域環(huán)境中[1]，直接或間接危害著人類(lèi)的健康。因此，對(duì)于各類(lèi)農(nóng)藥的毒性研究就成為一個(gè)熱點(diǎn)。常用的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物一般為水生生物，主要是黃鱔、斑馬魚(yú)、鯽魚(yú)、蝌蚪、雙殼類(lèi)等，結(jié)果發(fā)現(xiàn)這些化學(xué)物質(zhì)均對(duì)水生生物有著不同程度的毒害。

隨著水環(huán)境污染引起越來(lái)越多的關(guān)注，利用水生生物對(duì)自身生活環(huán)境變化的敏感性來(lái)對(duì)水體進(jìn)行綜合在線(xiàn)監(jiān)測(cè)預(yù)警的研究也成為了當(dāng)前的熱點(diǎn)。魚(yú)類(lèi)對(duì)水環(huán)境的變化十分敏感因而被廣泛用于毒物和廢水的生物監(jiān)測(cè)評(píng)價(jià)，近些年，魚(yú)類(lèi)急性毒性實(shí)驗(yàn)涉及了多種魚(yú)類(lèi)和有毒物質(zhì)。斑馬魚(yú)易于獲取和飼養(yǎng)，體形小，對(duì)毒物敏感，能夠?qū)σ恍┚軆x器都測(cè)不到的微量污染產(chǎn)生反應(yīng)。

2，4-二硝基氯苯和對(duì)硝基氯苯都是常用于合成農(nóng)藥的化合物。2，4-二硝基氯苯見(jiàn)于農(nóng)藥二硝散。對(duì)硝基氯苯可經(jīng)過(guò)氨解、水解、氯化、還原等反應(yīng)，得到一系列衍生產(chǎn)品，進(jìn)而合成許多農(nóng)藥品種，也可直接用作除草劑除草醚、草枯醚等的原料[2]。因此研究2，4-二硝基氯苯和對(duì)硝基氯苯與斑馬魚(yú)的毒理學(xué)效應(yīng)， 可以很好地評(píng)價(jià)2，4-二硝基氯苯和對(duì)硝基氯苯污染對(duì)區(qū)域水生態(tài)系統(tǒng)的影響， 對(duì)正確反映水環(huán)境中2，4-二硝基氯苯和對(duì)硝基氯苯污染持久性及其對(duì)周?chē)梭w健康可能產(chǎn)生的潛在風(fēng)險(xiǎn)具有重要意義。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)材料

1.1.1 斑馬魚(yú)（Brachydanio rerio） 挑選體色光澤、魚(yú)鰭完整舒展、行動(dòng)活潑、逆水性強(qiáng)、大小無(wú)太大懸殊、無(wú)任何疾病的魚(yú)作為實(shí)驗(yàn)魚(yú)。實(shí)驗(yàn)前在實(shí)驗(yàn)室條件下馴養(yǎng)2周， 自然死亡率< 1%。實(shí)驗(yàn)用魚(yú)均成熟， 平均體長(zhǎng)2～ 3 cm， 平均體重0.4g。實(shí)驗(yàn)前1 d停止喂食， 實(shí)驗(yàn)期間不喂食，以免實(shí)驗(yàn)時(shí)，剩余餌料及糞便影響水質(zhì)。

1.1.2 實(shí)驗(yàn)藥品 2，4-二硝基氯苯和對(duì)硝基氯苯均由西亞試劑公司提供。

1.1.3 實(shí)驗(yàn)用水（稀釋水）及水質(zhì)條件 為了避免水質(zhì)中所含物質(zhì)的干擾，整個(gè)實(shí)驗(yàn)所使用的飼養(yǎng)用水為曝氣水，溫度的波動(dòng)范圍不超過(guò)（25±0.4）℃。水的pH與水生生物的代謝作用有密切關(guān)系。對(duì)毒物的毒性作用也有一定的影響。因此，在實(shí)驗(yàn)中應(yīng)維持pH在魚(yú)類(lèi)適宜范圍內(nèi)。實(shí)驗(yàn)用水的pH在6.7～8.5為宜。如需調(diào)節(jié)pH，可用1M或0.1M的HCl和NaOH來(lái)調(diào)節(jié)受試物貯備液的pH。水的總硬度為200～250 mg/L（以CaCO3計(jì)）。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 預(yù)實(shí)驗(yàn) 用于確定正式實(shí)驗(yàn)所需濃度范圍，可選擇較大范圍的濃度系列設(shè)計(jì)6個(gè)濃度，每個(gè)濃度放入5條魚(yú)，在實(shí)驗(yàn)室環(huán)境下采用半靜態(tài)法進(jìn)行，不設(shè)平行組，實(shí)驗(yàn)持續(xù)96h。在24h和96h時(shí)分別記錄各容器內(nèi)的斑馬魚(yú)死亡數(shù)目，并需要及時(shí)取出死魚(yú)，以防止實(shí)驗(yàn)用水被污染。根據(jù)實(shí)驗(yàn)所得數(shù)據(jù)初步求出24h時(shí)容器內(nèi)斑馬魚(yú)100%死亡時(shí)的受試物濃度以及96h時(shí)容器內(nèi)斑馬魚(yú)無(wú)死亡的受試物濃度。

1.2.2 正式實(shí)驗(yàn) 根據(jù)預(yù)實(shí)驗(yàn)得出的結(jié)果，在包括使魚(yú)全部死亡的最低受試物濃度和96 h魚(yú)類(lèi)全部存活的最好受試物濃度之間設(shè)置6個(gè)濃度組，并以幾何級(jí)數(shù)排布。濃度間隔系數(shù)應(yīng)≤2.2。

每個(gè)實(shí)驗(yàn)濃度組中放入10尾斑馬魚(yú)。 調(diào)節(jié)實(shí)驗(yàn)環(huán)境溫度及實(shí)驗(yàn)所用曝氣水的pH等，分別在24 h、48 h、72 h、96 h時(shí)檢查受試斑馬魚(yú)的存活狀況。如果沒(méi)有任何肉眼可見(jiàn)的運(yùn)動(dòng)，如鰓的扇動(dòng)、碰觸尾柄后無(wú)反應(yīng)等，即可判斷該魚(yú)已死亡。實(shí)驗(yàn)開(kāi)始后應(yīng)在前24h內(nèi)盡可能連續(xù)觀察各處理組斑馬魚(yú)的狀況，并記錄斑馬魚(yú)的異常行為（如魚(yú)體側(cè)翻、失去平衡，游泳能力和呼吸能力減弱，色素沉積等），而且實(shí)驗(yàn)開(kāi)始和結(jié)束時(shí)要測(cè)定pH和溫度。

1.2.3 數(shù)據(jù)處理

2 結(jié)果與分析

2.1 中毒癥狀 經(jīng)2種硝基苯溶液處理后，高濃度組斑馬魚(yú)出現(xiàn)游泳遲緩、側(cè)翻等動(dòng)作；口部和鰓蓋張合頻率變快，體色變淺。低濃度組表現(xiàn)不明顯，但72h后也出現(xiàn)側(cè)翻和死亡。

2.2 急性毒性效應(yīng)

3 討論

在進(jìn)行毒理學(xué)實(shí)驗(yàn)中，受試動(dòng)物的選擇尤為重要，斑馬魚(yú)是毒理學(xué)實(shí)驗(yàn)中應(yīng)用較為廣泛的一種模式生物[3]。雖然農(nóng)藥對(duì)斑馬魚(yú)的環(huán)境風(fēng)險(xiǎn)取決于毒性、效應(yīng)和環(huán)境暴露量等方面的因素 但在目前國(guó)內(nèi)缺乏較為完善的農(nóng)藥環(huán)境暴露風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估模型的情況下，農(nóng)藥對(duì)斑馬魚(yú)的急性毒性試驗(yàn)數(shù)據(jù)在一定程度上為農(nóng)藥的風(fēng)險(xiǎn)管理和科學(xué)合理用藥提供了重要的參考依據(jù)[4]。

參考文獻(xiàn)

[1]劉祖毅，楊陽(yáng)，王志錚，等. 2種農(nóng)藥對(duì)麥瑞加拉鯪魚(yú)幼魚(yú)的急性毒性[J]. 浙江海洋學(xué)院學(xué)報(bào)（自然科學(xué)版），2010，29（2）：173-178.

[2] 馮堅(jiān).對(duì)硝基氯苯[J].江蘇農(nóng)藥，1998（1）：12.

[3] 王佳佳，徐超，屠云杰，等.斑馬魚(yú)及其胚胎在毒理學(xué)中的實(shí)驗(yàn)研究與應(yīng)用進(jìn)展[J].生態(tài)毒理學(xué)報(bào)，2007，2（2）：123-135.

[4] 才冰，袁善奎，曲甍甍，等.360種農(nóng)藥制劑對(duì)斑馬魚(yú)的急性毒性研究[J].農(nóng)藥科學(xué)與管理，2011，32（1）：31-34.

[5] 中國(guó)國(guó)家環(huán)保局. 化學(xué)農(nóng)藥環(huán)境安全評(píng)價(jià)試驗(yàn)準(zhǔn)則[ J] .農(nóng)藥科學(xué)與管理， 1990 （ 4） ： 4-9.

[6] 徐娟，陶核，吳南翔. 4種農(nóng)藥對(duì)斑馬魚(yú)的急性毒性與安全評(píng)價(jià)[J].職業(yè)與健康，2010，26（23）：2777-2778.

[7] 劉在平，張松林，楊敬輝.氯苯對(duì)斑馬魚(yú)胚胎發(fā)育和仔魚(yú)的毒性效應(yīng)研究[J]. 環(huán)境科學(xué)與技術(shù)，2012（7）：135-146.

[8] 杜青平，黃彩娜，賈曉珊.1，2，4-三氯苯對(duì)斑馬魚(yú)急性毒性及其胚胎毒性作用[C]. 持久性有機(jī)污染物論壇2008暨第三屆持久性有機(jī)污染物全國(guó)學(xué)術(shù)研討會(huì)論文集， 2008.

[9] 楊霓云，劉征濤，王宏，等. 五氯苯酚與鄰氯苯酚和2，4-二氯苯酚對(duì)斑馬魚(yú)的聯(lián)合毒性[J].環(huán)境生物學(xué)2006，19（6）：145-148.

（責(zé)編：施婷婷）