海芋葉枯病病原菌鑒定

摘要：2008年以來，在湖北省武漢市的海芋[Alocasia macrorrhiza （Linn.） Schott]葉片上新發(fā)生一種葉部病害，由于發(fā)病后期葉片干枯撕裂，故稱之為葉枯病。海芋葉枯病主要發(fā)生在葉片，病斑多從葉緣開始，初期癥狀是病斑呈水漬狀褪綠，后期病斑中央灰白色，邊緣褐色，周圍有黃色暈圈。從海芋病葉分離得到了病菌，經(jīng)柯赫氏法則驗證為致病病原菌。據(jù)病原菌的培養(yǎng)性狀及形態(tài)特征將該病原菌鑒定為海芋鏈格孢。病原的確定將為海芋葉枯病發(fā)生規(guī)律的研究和控制奠定基礎(chǔ)。

關(guān)鍵詞：海芋[Alocasia macrorrhiza （Linn.） Schott]；葉枯病；病原鑒定；海芋鏈格孢（Alternaria alocasiae）

中圖分類號：S435.121.4+8 文獻標(biāo)識碼：A 文章編號：0439-8114（2013）03-0580-03

海芋[Alocasia macrorrhiza（Linn.）Schott]又名滴水觀音，屬天南星科（Araceae）海芋屬（Alocasia）多年生常綠大型草本植物。莖粗壯，高可達3 m，葉片盾形，肥大翠綠，株態(tài)優(yōu)美，佛焰苞淡綠色至乳白色，下部綠色，花期夏季。海芋喜好溫暖、濕潤和半陰環(huán)境，生命力旺盛，適應(yīng)性強，適合用大盆栽植，用來布置會議室、大客廳等，也可栽植在池邊、假山旁較陰蔽處，是優(yōu)良的大型觀葉植物。近年來，海芋深受人們的喜愛而廣泛應(yīng)用于園林景觀中[1]。2008年7月至2009年10月，在湖北省武漢市解放公園和月湖公園的海芋葉片上發(fā)現(xiàn)一種病害，導(dǎo)致海芋葉片干枯撕裂，嚴(yán)重影響了海芋的觀賞價值。為做好該病害的防治工作，對海芋葉枯病原菌進行了分離培養(yǎng)并鑒定，現(xiàn)將結(jié)果報道如下。

1 材料與方法

1.1 材料來源

材料從湖北省武漢市解放公園和月湖公園的發(fā)病典型的海芋病葉上采集獲得。

1.2 癥狀描述

按常規(guī)方法對田間病株出現(xiàn)的癥狀進行描述與拍攝。

1.3 病原菌的分離和菌種純化

采用常規(guī)組織分離法分離：切取發(fā)病典型的病健交界處的海芋葉片，大小為5 mm×5 mm；用70%乙醇消毒5 s；0.1% HgCl2表面消毒30 s；滅菌水沖洗3～4次；無菌操作接種到馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基（PDA）上，25 ℃下恒溫培養(yǎng)，進行菌種純化和轉(zhuǎn)移至斜面保存。

1.4 病原菌致病性的測定

將純化后產(chǎn)孢的病原菌孢子用無菌水配制成1×106個/mL孢子懸浮液，田間噴灑在海芋健康寄主植株的葉片上，以無菌水作為對照；保濕，觀察并記錄發(fā)病情況。取接種后海芋病葉進行病原菌再分離，根據(jù)分離到的病原菌形態(tài)特征進行鑒定。

1.5 病原菌形態(tài)觀察

參照方仲達[2]的方法進行單孢分離，并將單孢接種在PDA培養(yǎng)基上，25 ℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，觀察菌落顏色、形狀、大小；將單孢接種到馬鈴薯胡蘿卜培養(yǎng)基（PCA）上，置于培養(yǎng)箱中，光照和黑暗各12 h交替，25 ℃下培養(yǎng)5～7 d，觀察病原菌在PCA和自然基質(zhì)上的分生孢子梗、分生孢子及喙的形態(tài)并測量其大小。

2 結(jié)果與分析

2.1 癥狀描述

該病發(fā)生在葉片，病斑多從葉緣開始，發(fā)病初期葉緣出現(xiàn)褪綠小斑點，隨著病斑的擴大，病斑呈現(xiàn)不規(guī)則形，中央灰白，邊緣褐色，周圍有黃色暈圈，發(fā)病后期葉片大部分干枯撕裂（圖1）。在潮濕環(huán)境下，病部中央產(chǎn)生暗褐色的霉層，且正反面均有。

2.2 致病性測定

接種3 d后，用孢子懸浮液接種的葉片均發(fā)病，病斑初期為水漬狀小點，隨著病害的發(fā)展，病斑灰白，邊緣褐色有黃色暈圈，引起的癥狀相同，并從病斑上重新分離到相同的病原菌，遵循柯赫式法則。而對照的葉片均不發(fā)病。

2.2 病原菌培養(yǎng)性狀及形態(tài)

在PDA培養(yǎng)基上該菌菌落圓形擴展，致密絨狀，邊緣為白色，向內(nèi)為墨綠色，菌落略突起，接種3 d后菌落半徑1.5 cm；接種6 d后菌落半徑2.5～3.0 cm；接種8 d后菌落半徑3.5～4.0 cm。分生孢子梗單生或簇生，淺褐色，直立，直或膝狀彎曲，分隔，分枝或不分枝，從菌絲生出或生于簡單的子座上，（32.50～65.00 μm）×（3.75～6.25 μm）。分生孢子多數(shù)單生，少數(shù)短鏈生（2～4個孢子），孢子鏈分枝或不分枝。分生孢子倒棍棒形，黃褐色，具橫隔膜6～9個，縱、斜隔膜3～6個，橫隔膜處縊縮明顯，孢身基部鈍圓，至頂部漸窄，頂細(xì)胞延伸成喙，孢身（37.5～62.5 μm）×（12.0～17.5 μm ），柱狀真喙或假喙，色淡，無隔膜或少隔膜，隔膜間距較大，（16.50～50.00 μm）×（2.50～3.75 μm）。根據(jù)病原菌培養(yǎng)性狀、分生孢子的成鏈特征和形態(tài)及典型的分生孢子特性等，可確定所分離的真菌為半知菌類鏈格孢屬海芋鏈格孢（Alternaria alocasiae）[3]。

3 小結(jié)與討論

海芋鏈格孢是張?zhí)煊畹萚4]于1999年報道的生于天南星科植物上的新種，其主模式為海芋，新種模式標(biāo)本保存在山東農(nóng)業(yè)大學(xué)植物病理學(xué)標(biāo)本室（HSAUP）。此次試驗的病原菌分離、鑒定及致病力測定結(jié)果表明， 海芋鏈格孢是湖北省武漢地區(qū)海芋葉枯病的主要致病菌。

鏈格孢屬級特征醒目而種級特征變異較大，易于鑒定到屬而難以鑒定到種。傳統(tǒng)的鏈格孢屬真菌分類主要是以分生孢子和產(chǎn)孢結(jié)構(gòu)的形態(tài)為根據(jù)的，而形態(tài)特征受營養(yǎng)基質(zhì)和溫、濕、光、pH等條件的影響而不穩(wěn)定。此次試驗中還采用在PDA培養(yǎng)基上，25 ℃恒溫培養(yǎng)下誘導(dǎo)產(chǎn)孢及在PCA培養(yǎng)基上12 h光照和12 h黑暗交替，25 ℃恒溫培養(yǎng)，5 d后用滅菌玻片劃碎菌絲誘導(dǎo)產(chǎn)孢這兩種方法。結(jié)果表明，這兩種方法產(chǎn)孢量小，且分生孢子形態(tài)、大小、喙長、縱橫隔數(shù)、成鏈特性等與在自然基質(zhì)上的差異較大。說明培養(yǎng)基質(zhì)對鏈格孢分生孢子的形態(tài)、大小、喙長、縱橫隔數(shù)、成鏈特性等有明顯的影響。

此次試驗的報道結(jié)果是從形態(tài)學(xué)角度進行鑒定的，隨著分子生物學(xué)技術(shù)在鏈格孢系統(tǒng)學(xué)中的應(yīng)用[5-7]，采用分子生物學(xué)手段對病原菌進行鑒定越來越廣泛，但目前形態(tài)學(xué)特征仍是最簡便、快速、經(jīng)濟的分類依據(jù)。該病病原的確立為進一步研究該病害的流行及防治技術(shù)提供了科學(xué)依據(jù)。

參考文獻：

[1] 周淑榮，包秀芳，郭文場，等.海芋的栽培管理[J].特種經(jīng)濟動植物，2010，13（12）：30-31.

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[3] 張?zhí)煊?中國真菌志：鏈格孢屬[M].北京：科學(xué)出版社，2003.

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