煙草疫霉分離及生長培養基的選擇

摘要：采用不同的基本培養基添加抗生素組合對煙草疫霉（Phytophthora nicotianae）進行分離培養。結果表明，以V8培養基（100 mL/L V8汁+0.02 g/L CaCO3+2 g/L洋菜）為基本培養基附加10 mg/mL氨芐青霉素+5 mg/mL制霉素+5 mg/mL多菌靈的選擇培養基分離煙草疫霉的效果較好，分離成功率達100%，菌絲的生長狀態也較好。菌絲分離后在V8基本培養基中培養，菌絲緊密、濃白、粗壯，菌落大、長勢旺。

關鍵詞：煙草疫霉（Phytophthora nicotianae）；培養基；分離；生長

中圖分類號：S435.72 文獻標識碼：A 文章編號：0439-8114（2013）03-0708-02

煙草疫霉（Phytophthora nicotianae）為疫霉屬真菌，寄生于煙草等作物，引起煙草的黑脛病，造成煙草生產的巨大損失。近年來黑脛病對作物的為害日益嚴重，引起了廣大植物病害研究工作者的重視。在工作中常進行的室內藥劑篩選、抗藥性監測以及抗病育種工作中都要用到病原菌種，但煙草疫霉的寄生性很強，分離困難[1]。本研究參考國內外有關資料，對比了幾種選擇培養基的分離效果[2-6]，對已經報道的煙草疫霉分離方法進行改進，優化基本培養基及選擇培養基配方，為煙草黑脛病發病機制的研究和防治工作奠定基礎。

1 材料與方法

1.1 供試材料

發病的煙草黑脛病植株采自貴州省發病嚴重的煙區，采集的標本以莖稈剖開時組織是土黃色為最佳[7]。

1.2 方法

1.2.1 培養基 基本培養基配方見表1，選擇培養基中添加抗生素的種類及用量組合見表2，各培養基的配制方法參照文獻[7]。將6種抗生素組合分別加到經121 ℃高壓滅菌后冷卻至50 ℃左右的基本培養基中，共配成了36種不同的選擇培養基。

1.2.2 煙草疫霉的分離培養 將采集的新鮮煙草黑脛病標本用自來水沖洗干凈，晾干，剖開莖基部發病部位，取病健交界處的病組織。將病組織切成約2 mm×2 mm的小塊，直接置于各種選擇培養基中央[5，6]。每種選擇培養基設4個重復，每個培養基中接種10個煙草黑脛病組織塊。觀察記載各組織塊的萌發及菌絲生長情況，測量菌絲的生長速度。

2 結果與分析

2.1 選擇培養基中煙草疫霉的分離和生長結果

各選擇培養基中煙草疫霉的分離結果、生長勢及生長速度見表3。在供試的36種選擇培養基上，發病組織塊中的煙草疫霉均能萌發，但不同選擇培養基中的分離成功率不同。在以V8為基本培養基的選擇培養基上分離成功率最高，平均達到了95.0%；而在以DCA為基本培養基的選擇培養基上分離成功率最低，平均只有77.4%。OA-4、CMA-2、CMA-4、CMA-5、SMA-3、SMA-4、V8-1、V8-2、V8-4、V8-6、PDA-5、PDA-6培養基中分離成功率均達到了100.0%。

分離培養5 d后觀察統計各培養基中菌絲的生長情況，發現V8-1選擇培養基中菌絲生長勢極強，生長速度最快，達到了11.45 mm/d，其次是DCA-4，為10.40 mm/d，以PDA為基本培養基的各選擇培養基中菌絲生長速度最慢，平均生長速度只有4.17 mm/d。綜合考慮菌絲的分離成功率和生長情況，以V8-1作為選擇培養基分離效果最好。

2.2 基本培養基中煙草疫霉的生長情況

分離的煙草疫霉菌絲在6種基本培養基上的生長情況見表4。由表4可以看出，菌絲在V8、SMA和CMA 3種基本培養基中的生長情況較好，菌絲生長前端整齊緊密，菌絲白、菌落大、粗壯、長勢旺。其他3種基本培養基中的菌絲生長前端不整齊，菌絲較稀疏，長勢一般。

3 小結與討論

不同的選擇培養基對煙草疫霉的分離成功率有較大的影響，OA-4、CMA-2、CMA-4、CMA-5、SMA-3、SMA-4、V8-1、V8-2、V8-4、V8-6、PDA-5、PDA-6選擇培養基中的分離成功率均達到100.0%，其中以V8-1選擇培養基中分離得到的菌絲生長情況最好，在很短時間內就能在顯微鏡下挑取到煙草疫霉的菌絲，且沒有根霉、青霉、毛霉等雜菌出現，使得分離的過程簡便，可以作為分離煙草疫霉時的培養基。

將分離純化好的煙草疫霉移入基本培養基中繼續培養，結果顯示V8、SMA和CMA基本培養基中菌絲生長情況好于其他3種基本培養基，有利于提高其菌絲生長和產孢速率。本研究初步篩選了適宜煙草疫霉菌絲分離和生長的培養基，為后續研究奠定了基礎。

參考文獻：

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