HPLC法測定呋塞米片的含量

【摘要】 目的 建立HPLC法測定呋塞米片的含量。方法 采用HPLC法。以phenomenex C18 5u 250×4.6mm為色譜柱；流動相：甲醇-水-0.01mol/L磷酸鹽緩沖液（60：35：5）；流速：1.0ml/min；檢測波長：286nm。結果 呋塞米在3-14ug范圍內線性關系良好，線性回歸方程Y=56217X-10762（r=0.9995）；回收率平均值為98.5%，RSD為0.93%（n=9）。結論 該法操作簡便，準確，可靠，適用于呋塞米片的質量研究。

【關鍵詞】 HPLC法；呋塞米片；含量

呋塞米片主要成分為呋塞米，功能主治是水腫性疾病高血壓，預防急性腎功能衰竭，用于各種原因導致腎臟血流灌注不足，高鉀血癥及高鈣血癥，稀釋性低鈉血癥，抗利尿激素分泌過多癥（SIADH），急性藥物毒物中毒等。現行《中國藥典》采用的是紫外分光光度法，專屬性不強，本文采用HPLC法測定呋塞米片的含量，現報道如下。

1 儀器與試藥

島津LC-20AT型高效液相色譜儀，島津SPD-20A紫外檢測器，島津SIL-20A自動進樣器，CTO-10AS色譜工作站。JAC-300超聲波清洗機。

呋塞米對照品（中國藥品生物制品檢定所），呋塞米片（市售品），甲醇為色譜純，其他為分析純，水為超純水。

2 方法與結果

2.1 色譜條件與系統適應性實驗 色譜柱phenomenex C18 5u 250×4.6mm；流動相：甲醇-水-0.01mol/L磷酸鹽緩沖液（60：35：5）；流速：1.0ml/min；檢測波長：286nm；進樣量：20ul；柱溫：30℃。理論板數按呋塞米計算不低于2000。

2.2 溶液制備 精密稱取呋塞米對照品100.15mg，置100ml的量瓶中，加流動相稀釋至刻度，搖勻，制成1mg/ml對照品貯備液。精密量取1ml，置100ml的量瓶中，加流動相稀釋至刻度，搖勻，即得對照品溶液。精密稱取供試品（相當于呋塞米20mg），置100ml的量瓶中，加流動相適量，超聲10分鐘，加流動相稀釋至刻度，濾過，精密量取續濾液5ml，置100ml的量瓶中，加流動相稀釋至刻度，搖勻，用0.45μm微孔濾膜過濾，即得供試品溶液。

2.3 方法學考察 線性關系的考察：精密量取貯備液0.3，0.5，0.7，1.0，1，2，1.4ml，分別置100ml量瓶中，加流動相稀釋至刻度，制成標準曲線系列溶液。按上述色譜條件，各進樣20ul，以進樣濃度為橫坐標（X），峰面積為縱坐標（Y），得回歸方程為：Y=56217X-10762（r=0.9995）結果表明，呋塞米在3-14ug范圍內線性關系良好。

精密度實驗：精密量取對照品溶液，重復進樣5次，記錄峰面積，結果RSD為0.66%（n=5）。

穩定性實驗：取供試品溶液（批號2012 0311）分別于0，2，4，6及8h時依法測定，記錄峰面積。結果呋塞米峰面積RSD為1.19%（n=5），表明供試品溶液在該體系下穩定。

重復性實驗：取同一批供試品溶液（批號2012 0311）5份，依法測定峰面積。結果RSD為1.08%。

空白干擾試驗：按溶液制備方法制備不含呋塞米的陰性對照溶液，按上述色譜條件測定，結果在陰性對照溶液中，與呋塞米保留時間處無色譜峰出現。

加樣回收率實驗：精密量取9份已知含量的供試品（批號2012 0311）（相當于呋塞米15mg），各置9個100ml的量瓶中，分別精密加入對照品溶液（1mg/ml）3ml，5ml，7ml各3份，按上述供試品溶液制備方法制備待測溶液，依法測定，記錄峰面積，結果回收率平均值為98.5%，RSD為0.93%（n=9）。

供試品含量測定：取3批供試品，按供試品溶液制備方法制備供試液，用0.45μm微孔濾膜過濾，取續濾液20ul，記錄色譜峰峰面積，以外標法計算，測定呋塞米的含量。結果批號（2011 1205，2012 0311，2012 07 06）3批供試品呋塞米含量分別為93.7%，99.5%，95.1%。

3 討 論

3.1 本實驗分別采用不同的色譜條件進行研究，結果表明，以甲醇-水-0.01mol/L磷酸鹽緩沖液（60：35：5）為流動相，末端吸收少，干擾少，具有快速，準確等特點。

3.2 本實驗采用HPLC法，同紫外分光光度法比較，專屬性更強，靈敏度更高，可作為控制該制劑質量的有效方法。

參考文獻

[1] 國家藥典委員會.中華人民共和國藥典（二部）[M].化學工業出版社，2010：336.

[2] 陳慶偉，陳華鋒.高效液相色譜法測定呋塞米片的含量[J].海峽藥學，2006（02）.