PSA正丁醇部位化學成分研究

【摘要】 目的 對PSA提取物正丁醇萃取部位中的化學成分進行研究。方法 利用色譜學和光譜學方法分離鑒定化合物。結果 從PSA正丁醇部位中分離得到5個化合物，分別鑒定為沒食子酸乙酯（ethyl gallate，Ⅰ）、苯甲酸（benzoic acid，Ⅱ）、芍藥苷（paeoniflorin，Ⅲ）、沒食子?；趸炙庈眨╣alloyl-oxypaeoniflorin，Ⅳ）、芍藥內酯苷（albiflorin，Ⅴ）。結論 本研究闡明了PSA提取物正丁醇萃取部位中的主要化學成分。

【關鍵詞】 PSA；化學成分；芍藥苷；沒食子酰基氧化芍藥苷；芍藥內酯苷

PSA為常用中藥材，具有多種藥理活性。為了確定其藥理作用的物質基礎，為該藥材的現代化開發利用提供科學基礎，我們對PSA的化學成分進行了較系統的研究，此論文工作為系統工作的一部分。

1 PSA正丁醇部位化學成分研究

1.1 藥材概況及選題依據

1.1.1 基源及性味歸經、功能主治 中藥PSA系毛莨科芍藥屬植物牡丹（Paenoina Suffruticosa Andr.）的根皮，始載于《神農本草經》，列為中品，性微寒，味苦，辛，歸心、肝、腎經，具有清熱涼血，活血化瘀之功效[1]。

1.1.2 化學成分 目前，國內外對牡丹根及根皮的化學成分已有一些研究。文獻報道PSA中含有丹皮酚（Paeonol）、丹皮酚苷（Paeonoside）、丹皮酚原苷、丹皮酚新苷（Apio-paeonoside）、芍藥苷（Paeoniflorin）、苯甲酰芍藥苷（Benzoylpaeoniflorin）、氧化芍藥苷（Oxypaeoniflorin）、2，3-二羥基-4-甲氧基苯乙酮、2，5-二羥基-4-甲氧基苯乙酮、3-羥基-4-甲氧基苯乙酮、Paeonilide、揮發油及植物甾醇等[2]。牡丹根還分離出2-羥基-4-甲氧基苯乙酮、Paeonisothuion、Deoxypaeonisuffrone、Isopaeonisuffral、Paeonisuffrone、3-O-Methylpaeonisuffral、Paeoninorigeaone、Paeonisuffral[3-4]；Suffruticoside A、B、C、D、E、沒食子酸（Gallic acid）、沒食子酰氧化芍藥苷等[5]。此外PSA還含有豐富的微量元素，包括Zn、Cd、Pb、Co、Mn、Cr、Cu、P、Fc、K等[6]。

1.1.3 藥理作用

1.1.3.1 抗病原微生物作用 體外試驗表明，牡丹酚對金黃色葡萄球菌、枯草桿菌和大腸桿菌的MIC分別為1：2000，1：5000和1：5000，PSA浸劑在試管內對鐵銹色小芽孢等10種皮膚真菌也有一定的抑制作用。PSA煎劑對金黃色葡萄球菌、溶血性鏈球菌、大腸桿菌、痢疾桿菌、傷寒桿菌、副傷寒桿菌、變形桿菌、肺炎雙球菌、霍亂弧菌等均有較強的抑制作用。煎劑抗菌的主要有效成分為沒食子酸[1]。

1.1.3.2 抗心肌缺血作用 PSA對實驗性心肌缺血有減輕損傷程度作用，并能夠降低心肌耗氧量，增加冠脈流量，可以認為PSA有調節血行，疏通血脈之作用，因而對心肌缺血有保護作用[7]。

1.1.3.3 抗炎作用 丹皮對由角叉菜膠誘導的大鼠足腫脹與二甲苯誘導的小鼠耳片水腫（均為急性特異性的炎癥）和福氏完全佐劑（CFA）誘導的大鼠佐劑性關節炎（AA）均有明顯的抑制作用，此作用與PSA中的活性成分丹皮總苷（TGM）有關[8]。丹皮水煎劑能抑制炎癥組織的通透性和抑制PGE的生物合成，從而對多種急性炎癥反應具有抑制作用，并且它不抑制特異性抗體的產生，不影響補體旁路途徑的溶血活性，故它在發揮抗炎作用的同時，不影響正常體液免疫功能[9]。

1.1.3.4 保肝作用 丹皮活性成分丹皮總苷（TGM）對CCl4和D-Gal-N所致小鼠化學性肝損傷的保護作用機制的研究表明，TGM能夠降低CCl4和D-Gal-N所致的血清ALT和AST的升高，促進損傷組血清蛋白含量增加和肝糖原合成增加，還可降低損傷組肝臟肝勻漿脂質過氧化物丙二醛（MDA）的含量，提高血清和肝臟谷胱甘肽過氧化物酶（GSP-Px）活力，清除體內有害自由基，增強機體抗氧化作用，且可縮短CCl4中毒小鼠ip戊巴比妥鈉后的睡眠時間，增強解毒能力，因此TGM具有肝臟保護作用[10-12]。

1.1.3.5 降血糖作用 丹皮多糖粗品100、400mg·kg-1灌胃給藥可使正常小鼠血糖顯著降低；200、400mg·kg-1灌胃給藥對葡萄糖誘發的小鼠高血糖有顯著降低作用[13]。

1.1.3.6 調節免疫細胞作用 PSA的甲醇提取物400mg/kg，牡丹酚25mg/kg或50mg/kg灌胃，能顯著增強小鼠網狀內皮系統的吞噬功能，使體內碳廓清時間明顯縮短，腹腔滲出液中細胞數明顯增加[14]；丹皮總苷（TGM）對由刀豆蛋白A（ConA）誘導的T淋巴細胞增殖和分泌以及由脂多糖（LPS）誘導B淋巴細胞和腹腔巨噬細胞增殖和分泌功能具有濃度依賴性雙向免疫調節作用。TGM還具有機能依賴性調節小鼠體液和細胞免疫的功能[15]。

1.1.3.7 其他 PSA還有鎮痛、鎮靜、解痙、退熱等中樞作用；抗動脈粥樣硬化作用；利尿作用；抗早孕作用；抑制由ADP誘導的血小板聚集等作用。

1.1.4 臨床應用 PSA在臨床上用于治療皮膚病、高血壓、過敏性鼻炎、血小板減少性紫癜等多種疾病。

綜上，牡丹皮具有清熱涼血，活血化淤的作用。

1.2 實驗部分

1.2.1 實驗儀器與材料 旋轉蒸發器R205（無錫星海王生化設備有限公司）；電子恒溫水浴鍋（天津市泰斯特儀器有限公司）；循環水式多用真空泵SHB-B95型（鄭州長城科工貿有限公司）；Bruker DRX 400超導核磁共振波譜儀；Pekin-Elmer983G型紅外光譜儀；ZAB-HS型質譜儀；X-4型顯微熔點儀。

乙酸乙酯、二氯甲烷、甲醇均為分析純（北京化工廠產），氘代二甲基亞砜、氘代丙酮（北京化工廠生產，TMS內標），薄層層析硅膠（GF254）和柱層析硅膠均為（青島海洋化工有限公司）產，葡聚糖凝膠LH-20為Pharmacia公司產。

PSA藥材購自亳州亳廣藥業，經鑒定為毛茛科芍藥屬植物牡丹（Paenoina Suffruticosa Andr）的根皮。

1.2.2 實驗步驟

1.2.2.1 提取分離 取PSA 5Kg，用十倍量70%乙醇回流提取3次，每次2小時。提取液合并，減壓回收溶劑，得總提物浸膏830g。總提物浸膏用5000ml水分散，依次用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇各萃取3次。各溶劑萃取液分別濃縮，得到石油醚部位浸膏252g，乙酸乙酯部位浸膏130g和正丁醇部位浸膏326g。正丁醇部分浸膏用熱水轉溶后，上樣D101大孔樹脂柱，依次用水、20%、50%、80%、95%乙醇洗脫，每種比例洗脫10倍柱體積。各比例的洗脫液分別濃縮得水洗浸膏158g，20%乙醇洗浸膏65g，50%乙醇洗浸膏50g，80%乙醇洗脫浸膏24g，95%乙醇洗脫浸膏8g。取20%乙醇洗脫浸膏進行常壓硅膠柱層析，以二氯甲烷-甲醇（50：1-1：1）梯度洗脫。從Fr.17-20中得到化合物Ⅰ（900mg），Fr.8-13合并經反復凝膠柱層析得到化合物Ⅱ（20mg），Fr.54-72中得到化合物Ⅲ（30g），Fr.87-93經凝膠柱層析得到化合物Ⅳ（20mg），Fr.78-81經反復凝膠柱層析得到化合物Ⅴ（10mg）。

1.2.2.2 結構鑒定。