ELISA法測梅毒抗體假陽性原因分析及對策

【摘要】 酶聯免疫吸附試驗（ELISA）具有高特異性、高敏感性以及低檢測費用等特點，其操作簡單，無需特殊設備，適宜大批量檢測，已在國內廣泛應用。但因為影響因素諸多，難免會造成假陽性，因此了解假陽性出現的原因，避免假陽性結果的產生是極其必要的。

【關鍵詞】 梅毒抗體；酶聯免疫吸附試驗（ELISA）；假陽性原因分析及對策

梅毒血清學試驗對梅毒的診斷有很大的價值，但它存在著一定的假陽性和假陰性情況，其結果一定要結合病史和臨床、體格檢查綜合分析考慮。

近年來梅毒在我國的發病率呈上升趨勢。梅毒是由梅毒螺旋體感染引起的一種性傳播性疾病之一，可侵犯全身各臟器，幾乎可以引起全身所有組織器官的損害和病變，導致功能障礙。梅毒螺旋體抗體檢測在輸血前及手術前安全篩查中的意義已遠遠超出其自身病原體篩查的范疇[1]。酶聯免疫吸附試驗（ELISA），因其價格低廉、操作方便、靈敏度高、特異性強而被廣泛使用。但在臨床工作中遇到的最大問題是出現假陽性的問題，而假陽性容易引起醫療糾紛，為了減少假陽性的產生，現將假陽性的原因進行分析，總結如下。

1 假陽性原因分析

1.1 機體因素

1.1.1 老年人隨著年齡的增長，出現免疫功能下降或免疫功能的異常，而產生白蛋白抗體或異常蛋白質，從而干擾檢測結果，出現假陽性。

1.1.2 某些疾病中由于感染或免疫紊亂等會使機體產生與梅毒相交叉的抗體反應，造成生物性假陽性，如瘧疾、麻風、系統性紅斑狼瘡、類風濕性關節炎、結節性多動脈炎、肝硬化。傳染性單核細胞增多癥，系統性紅斑狼瘡，非典型性肺炎、甚至妊娠都可出現陽性。可能發生急性BFP反應的感染性疾病有風疹、上呼吸道感染、病毒性肺炎等等。而二酯嗎啡（海洛因）成癮者，抗體滴度可達1：64-1：128。對于陽性結果不能以此認定梅毒。而需進一步分析，除病史和臨床之外，應分析如為非特異性試驗陽性，必須明確其非特異性試驗的滴度（定量試驗結果）高低，在RPR滴度在1：8以下，應作確認試驗，即特異性梅毒檢測，如熒光梅毒螺旋體抗體或TPDA試驗。這些特殊成分在反應過程中具有一定的吸附作用，使顯色反應結果出現假陽性。

1.2 標本因素

1.2.1 標本處理不當 抽血后標本凝集不完全即離心分離，纖維蛋白未完全析出，容易在板孔中形成纖維蛋白薄膜或絮狀物，粘附在板孔堵塞洗板機針頭，造成洗板時清洗不徹底，測量時吸光度（OD）偏高，造成假陽性結果。

1.2.2 標本溶血 標本溶血造成的假陽性結果是臨床最常見情況之一，Hb具有類過氧化物酶的活性，其效應與辣根過氧化物酶類似，溶血后反應孔非特異性吸附Hb，洗滌時不易洗去，催化底物產生一定程度的顯色，使本底吸光度值升高而造成假陽性[2]。解決的辦法是防止標本溶血，一旦溶血發生，并且梅毒實驗陽性，必須重新采血進行測定。

1.2.3 標本污染 某些細菌菌體內可能含有內源性辣根過氧化物酶會產生非特異性干擾，造成假陽性結果。

1.2.4 標本保存不當 采取即采血即做實驗的方法，因為存放過久的標本，血清中IgG可聚合成多聚體，AFP可形成二聚體，造成假陽性[3]。

1.3 技術性因素 如實驗室操作錯誤，洗滌過程中有孔內的洗液溢出現象，尤其是洗滌的前幾次，陽性標本孔的洗液污染臨近的陰性孔而出現假陽性；這就要求在工作中嚴格按照操作規程操作，避免不必要的交叉感染。

1.4 儀器因素 全自動加樣儀加樣時不是一份標本一個加樣頭，遇到高濃度抗體標本時，由于加樣針清洗程度不夠，同一加樣針拖帶污染導致其后一孔甚至多孔出現假陽性的現象。酶標儀使用過程中當反應板底部有氣泡或污染時，酶標儀對反應孔進行垂直比色，易出現A值升高，導致假陽性結果的產生[4]。

2 對 策

2.1 嚴格按照《全國臨床操作規程》及試劑使用說明書操作。

2.2 血液處理 首先要做好采血環節的工作，方法要正確，操作要規范；盡量使用抗凝血標本，血液抽取后，應及時、完全的分離血清；血液不要存放過久，避免溶血及細菌污染，加強離心和防止標本溶血能減少假陽性發生。在運送標本的過程中，要避免標本管的振動，采集后的血液標本最好應先在37℃水浴箱中放置30分鐘后再離心。

2.3 吸頭滅菌 最好盡量使用一次性吸頭，使用前應先徹底清洗，后使用高壓蒸汽滅菌。實驗證明：經高壓滅活處理后，其檢測結果的假陽性率顯著降低[5]。

2.4 洗滌液配制及洗滌時間 洗滌液需現用現配，洗板機的洗液瓶及管道應定時用次氯酸鈉消毒液浸泡，防止細菌生長。洗滌時間不易過短，洗滌次數不能低于5次，洗滌要充分。洗滌過程中尤其是洗滌的前幾次盡量避免出現溢出現象，避免污染，拍板須盡量扣干。

3 小 結

梅毒血清學試驗是診斷梅毒的重要依據，但不能成為唯一依據。對于TPPA陽性的標本，不能簡單的用正在或曾經感染梅毒進行解釋。陽性結果只提示所測標本中有抗類脂抗體和（或）抗T.pallidum抗體存在，不能作為患者感染梅毒螺旋體的絕對依據；檢測結果應結合臨床及病史進行綜合分析。從事梅毒血清學檢驗的專業人員及相關醫務工作者應注意學習相關知識，在對檢測結果有爭議時，能給患者及其親屬作出合理解釋。

目前我國梅毒的發病有增加趨勢，梅毒檢查、篩查也日漸增多。由于梅毒血清反應本身存在假陽性，而患者的自我保護意識也逐步增強，一旦出現假陽性極易引發醫療糾紛。在梅毒抗體檢測過程中，了解出現假陽性的影響因素，對于減少工作中差錯事故的發生有著極其重要的意義。

參考文獻

[1] 于麗君，甘新宇，黃菲.ELISA檢測梅毒抗體假陽性產生的原因分析[J].西南國防醫藥，2008，18（5）：773-774.

[2] 彭明喜.酶聯免疫吸附試驗檢測梅毒抗體假陽性的原因分析[J].現代實用醫學雜志，2006，18（2）：127-128.

[3] 王鳳玲，馮秀河，畢麗鳳，劉靜.酶聯免疫吸附法檢測梅毒抗體假陽性產生的原因探討[J].實用醫技雜志，2007，14（11）：1417-1418.

[4] 張佑貴.酶聯免疫吸附試驗檢測梅毒抗體產生假陽性的原因分析[J].檢驗醫學與臨床，2012，9（1）：122-123.

[5] 汪德宇.酶聯免疫吸附法出現假陽性的原因分析和解決方法[J].中國當代醫藥，2009，16（19）：137-138.