豬波形蛋白對PRRSV感染Marc—145細胞的抑制作用

摘 要：為了研究波形蛋白在介導豬繁殖與呼吸綜合征病毒（PRRSV）感染細胞過程中的作用，利用RT-PCR方法從PRRSV非易感細胞系豬腎細胞系PK-15細胞中擴增目的基因，克隆入pET-28a（+）載體，轉化大腸桿菌BL21（DE3）中進行誘導表達。表達的重組豬波形蛋白經SDS-PAGE和Western blot鑒定和純化后免疫新西蘭大白兔制備多克隆抗體。利用病毒抑制試驗檢測重組豬波形蛋白及多克隆抗體在PRRSV感染Marc-145細胞過程中的作用。結果表明，成功擴增豬波形蛋白基因并克隆入pET-28a載體，經誘導后得到高效表達，純化后免疫兔子產生高價血清抗體（105）。病毒阻斷結果表明，豬波形蛋白及多克隆抗體均能阻斷PRRSV感染Marc-145細胞。 這為以波形蛋白為基礎的PRRSV 受體阻斷抑制劑的研究提供了實驗依據。

關鍵詞：豬繁殖與呼吸綜合征病毒；波形蛋白；病毒抑制；受體阻斷

中圖分類號：Q939.91 文獻標識號：A 文章編號：1001-4942（2012）10-0001-07

豬繁殖與呼吸綜合征病毒（Porcine reproductive and respiratory syndrome virus， PRRSV）能引起豬繁殖與呼吸綜合征（ PRRS），俗稱豬藍耳病。臨床表現為母豬晚期流產、早產、死胎和木乃伊胎等繁殖障礙和各年齡豬群的呼吸道癥狀。該病于1996年在我國首次報道[1]，給我國的養豬業帶來了巨大的經濟損失。

波形蛋白廣泛存在于間充質細胞及中胚層來源的細胞中，主要與維持細胞及細胞器形態、參與有絲分裂和細胞分化、促進細胞粘附和移行、創傷愈合、信號傳導、移植免疫和細胞凋亡等有關[2～4]。波形蛋白除了穩定細胞結構之外，還與其他的細胞骨架纖維一起參與許多病毒的侵入或感染過程，例如Ⅰ型皰疹病毒[5]、藍舌病毒[6]、非洲豬高熱病毒[7]、人的呼吸道合胞病毒[8]、痘病毒[9]、泰勒氏小鼠腦脊髓炎病毒[10]和日本腦炎病毒[11，12]等。……