一株非A~ F群沙門菌的鑒定與分析

余慧宏，曹健，宋建新，吳建英，閔文光，黃潔瓊

(景德鎮(zhèn)市疾病預防控制中心，江西　景德鎮(zhèn)333000)

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·病例報告·

一株非A~ F群沙門菌的鑒定與分析

余慧宏，曹健，宋建新，吳建英，閔文光，黃潔瓊

(景德鎮(zhèn)市疾病預防控制中心，江西景德鎮(zhèn)333000)

摘要：目的對一株來源于本市飲食服務行業(yè)從業(yè)人員肛拭標本中的沙門菌，探求其鑒定方法，為非A~F群沙門菌的判定提供參考。方法采用噬菌體檢驗方法，在現有只涵蓋A~F群沙門菌診斷血清未能分型的情況下，結合培養(yǎng)基生長特性、全面生化試驗進行分析。結果該菌生化反應符合腸道沙門菌定義，能被沙門菌O-I噬菌體裂解，連續(xù)數代純培養(yǎng)物進行血清凝集試驗均為A~F多價O血清（-），Vi（-）。結論該菌是一株罕見的非A~F群旺茲沃思沙門菌。

關鍵詞：非A~F群沙門菌；噬菌體檢驗；血清學試驗

沙門菌是重要的腸道病原菌，根據其抗原結構和生化試驗，目前已有2000多種血清型。沙門菌的分型鑒定，主要采用血清學的方法，系用O、H 和Vi因子血清與待檢菌株作玻片凝集試驗。常見的腸炎沙門菌、鼠傷寒沙門菌等血清型，均歸屬于沙門菌A~F群，位于非A~F群的其他群沙門菌僅約占5%[1]。本中心于2013年9月，在對飲食服務行業(yè)從業(yè)人員健康體檢中，檢出一株非A~F群沙門菌，現報告如下。

1　材料與方法

1.1樣品來源景德鎮(zhèn)市某飲食服務行業(yè)從業(yè)人員汪某，在本中心進行健康檢查時，采集的肛拭標本。由專業(yè)人員采集后，立即置于亞硒酸鹽胱氨酸

增菌液中，經過增菌培養(yǎng)，分離后獲得該菌株。

1.2主要試劑和儀器亞硒酸鹽胱氨酸增菌液、WS瓊脂、三糖鐵瓊脂、M-H瓊脂、藥敏紙片均由杭州微生物試劑有限公司生產；科瑪嘉沙門菌顯色

培養(yǎng)基購自廣東環(huán)凱微生物科技有限公司；ID32E腸桿菌科生化鑒定試劑條購自法國生物梅里埃公司；沙門菌診斷噬菌體由廣州虎克生物技術有限公司生產；沙門菌屬診斷血清（60種、59種）分別由寧波天潤生物藥業(yè)有限公司和蘭州生物制品研究所提供；沙門菌參考菌株（H9812）和大腸埃希菌標準菌株（ATCC25922）由江西省疾控中心提供。法國生物梅里埃ATB細菌鑒定儀、菌液比濁儀。

1.3方法

1.3.1傳統(tǒng)培養(yǎng)將該菌株分別接種于WS瓊脂、科瑪嘉顯色培養(yǎng)基平板、普通營養(yǎng)瓊脂、三糖鐵瓊脂上。選用普通營養(yǎng)瓊脂、三糖鐵瓊脂進行傳代培養(yǎng)，培養(yǎng)至第四代。同時將沙門菌參考菌株（H9812）進行接種。

1.3.2細菌生化鑒定采用梅里埃生化分析系統(tǒng)（ATB），選用ID32E腸桿菌科生化鑒定試劑條對其進行生化鑒定。

1.3.3噬菌體試驗按照國家標準檢驗方法，GB/ T4789.31-2003食品衛(wèi)生微生物學檢驗沙門氏菌、志賀氏菌和致瀉大腸埃希氏菌的腸桿菌科噬菌體檢驗方法中，快速檢驗沙門菌的噬菌體簡化診斷法進行。

1.3.4血清學鑒定挑取該菌第一代至第四代三糖鐵、營養(yǎng)瓊脂上的培養(yǎng)物，分別與兩個生產廠家出品的沙門菌屬診斷血清，作玻片凝集試驗；取第一、第四代營養(yǎng)瓊脂上的純培養(yǎng)物制成濃菌液，置于100℃加熱30min，取菌液與沙門菌診斷血清做玻片凝集，并設生理鹽水，對照組觀察。應用人工培養(yǎng)基傳代和加熱的方式，消除有可能存在Vi抗原以外的M抗原、5抗原等因素的影響[2]。

1.3.5藥敏試驗采用WHO推薦的K-B紙片法，參照美國臨床實驗室標準化協(xié)會（CLSI）藥物敏感試驗執(zhí)行標準判斷結果，用于試驗的藥敏紙片分別含有抗微生物藥慶大霉素、氨芐西林、阿莫西林/克拉維酸、頭孢噻吩、頭孢噻肟、萘啶酸、環(huán)丙沙星、四環(huán)素、利福平、復方新諾明。用ATCC25922大腸埃希菌做質控。

2　結果

2.1培養(yǎng)特性WS瓊脂上生長出中心黑色，周邊無色透明，中等大小的圓形菌落；科瑪嘉沙門菌顯色培養(yǎng)基上生長出紫紅色、表面濕潤的圓形菌落；普通營養(yǎng)瓊脂平板上生長出圓形、半透明、邊緣整齊的菌落。三糖鐵瓊脂生化反應為：K/A、產氣、硫化氫陽性。沙門菌參考菌株（H9812)具有典型菌落，菌株經梅里埃生化分析系統(tǒng)（ATB）鑒定為沙門菌（%ID：99.9 T值：0.68）。

2.2噬菌體試驗該菌呈現出O-I噬菌體裂解，C多價、E多價噬菌體均不裂解模式。但尚未得出血清分型，為沙門菌未分型[3，4]。

2.3血清學鑒定取三糖鐵培養(yǎng)基、普通營養(yǎng)瓊脂上的第一至第四代純培養(yǎng)物，與兩個生產廠家的沙門菌診斷血清做玻片凝集，A~F多價O血清（-），Vi（-），A~F多價O血清中所包含的O因子血清、O復合血清均為（-）。H多價1（+），Hb（+），H多價4（+），H1，2，3，5(+)，H2(+)。

經血清凝集鑒定為非A~F群沙門菌，同時送江西省疾控中心進一步鑒定[5]，經過江西省疾控中心鑒定該菌株為旺茲沃思沙門菌，屬Q群沙門菌（O39：b：1，2）。

2.4藥敏試驗該菌株對利福平、復方新諾明耐藥，慶大霉素、氨芐西林、阿莫西林/克拉維酸、頭孢噻吩、頭孢噻肟、萘啶酸、環(huán)丙沙星、四環(huán)素均為敏感。

3　討論

沙門菌分布廣泛，可從人和世界各地的動物中分離得到，人體攜帶的沙門菌可通過食品等多種途徑傳播。沙門菌攜帶者不僅會給自身帶來各種健康危害，同時也是一個潛在的引起沙門菌傳播的公共衛(wèi)生危險因素[6-8]。因此，應加大從業(yè)人員食品衛(wèi)生知識宣傳教育，改變食品安全行為，自覺的提高安全食品意識[9，10]。加強從業(yè)人員沙門菌的監(jiān)督管理工作；加強對飲食（服務）行業(yè)從業(yè)人員的健康檢查。

在健康體檢監(jiān)測工作中，確定為沙門菌攜帶者的從業(yè)人員，大多數無臨床癥狀，僅有少數出現輕度腹瀉，往往是通過肛拭檢查才被發(fā)現，因此沙門菌實驗室檢測工作尤為重要。在運用噬菌體診斷檢驗方法進行沙門菌鑒定時，出現O-I噬菌體裂解，其他噬菌體不裂解模式的情況下，繼而初步判定為沙門菌，經沙門菌血清分型后報告。一般情況下，血清學分型中，常用的是只涵蓋A~F群沙門菌的診斷血清，部分基層單位選擇沙門菌診斷血清時，會從特異性、使用率、經濟實惠等方面考慮購買這類血清，進行沙門氏菌血清學鑒定。雖然可對大部分沙門菌進行鑒定，但對比較罕見的O抗原在A~F群之外的旺茲沃思沙門菌，存在無法鑒定的先天不足，易導致診斷和甄別困難。國內很少有關于旺茲沃思沙門菌的文獻報道，對于此次菌株的檢出，噬菌體檢驗方法起到了重要作用，再輔以全面系統(tǒng)的生化試驗，有效地避免了因其非A~ F群特性可能存在的漏診或漏報。

旺茲沃思沙門菌于20世紀70至80年代曾在香港有多重耐藥菌的流行，并曾一度因直腸體溫計的交叉污染引起醫(yī)院兒科病房持續(xù)院感暴發(fā)。2007年美國23個州報告69例食源性病例(除3例成人病例外，其余為10月齡至3歲的學齡前兒童)，確認為旺茲沃思和鼠傷寒混合感染的暴發(fā)病例[11，12]。因此，在沙門菌監(jiān)測工作中，不能忽視罕見血清型沙門菌對公共衛(wèi)生的威脅。

致謝：感謝江西省疾病預防控制中心楊夢主任技師、徐曉倩主管醫(yī)師給予的支持和幫助。

參考文獻

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中圖分類號：R446.5，R516.3，R378.2+2

文獻標識碼：A

文章編號：1674-1129(2016)03-0405-03

DOI：10.3969/j.issn.1674-1129.2016.03.051