國產松露乙醚提取物的GC-MS分析

蔡佳仲，黃珍珍，周 娟，李兆生，胡英杰*

1廣州中醫藥大學熱帶醫學研究所藥學研究室，廣州510405;2云南恒大藥業有限公司，玉溪652605

松露又名塊菌，是一種子囊菌類食用大型真菌，主產于歐洲，我國西南也有分布。塊菌具有奇特的香味和豐富的營養價值，是世界上最珍貴的可食用菌根菌之一，其中又以法國黑松露(Tuber melanosporum)和意大利白松露(Tuber magnatum)最為珍貴［1］。國外已對歐洲多種松露品種的化學組成和芳香氣味開展了分析研究，報道了眾多揮發性成分［2-4］。鑒于對國產松露香味物質的分析報道較少［2，5］，本文對云南產黑塊菌(Tuber indicum)香味物質進行了化學成分分析，以作為研究開發國產松露資源的化學成分基礎。

1 儀器與材料

1.1 儀器

BS224S型電子分析天平(德國Sartorius公司);氣相色譜-質譜聯用儀(QP-2010，日本SHIMADZU公司)。

1.2 材料

黑塊菌采自云南;樣品經廣東省微生物分析檢測中心鑒定為黑塊菌Tuber indicum(鑒定報告編號: 2011ZD0307)。試劑均為分析純。

2 方法

2.1 松露乙醚提取物

稱取100 g新鮮塊菌，洗凈、切成碎片，加2倍量水，勻漿，加乙醚在室溫下振搖提取3次，每次加乙醚500 mL。合并乙醚提取液，加無水硫酸鈉脫水，濾過，取濾液室溫下揮去乙醚，得具有黑塊菌濃烈芳香氣味的黃棕色油狀液體，得率為0.19%(w/ w)。

2.2 測定條件

2.2.1 氣相色譜條件

DB-5MS毛細管色譜柱(30 m ×0.25 mm × 0.25 μm)，程序升溫:50～280℃，程序升溫10℃/min;柱流量1.0 mL/min;進樣口溫度250℃;柱前壓54 kPa;進樣量0.5 μL;分流比2∶1;載氣為高純氦氣。

2.2.2 質譜條件

電離方式EI:電子能量70 eV;離子源溫度200℃，接口溫度230℃;倍增器電壓0.9 kV;溶劑延時4 min;質量掃描范圍20～500 amu。

3 結果與分析

按照上述條件對塊菌乙醚提取樣品進行分析，獲得其乙醚提取物成分的總離子流圖(圖1)。色譜峰相應質譜圖經人工解析及NIST147譜庫檢索定性鑒定化學成分;采用面積歸一法計算出各成分的相對百分含量(圖1)。從塊菌乙醚提取物中共檢測到74個化學成分，鑒定了其中56個化合物，占化合物總數的75.68%，所鑒定的化合物含量占提取物總含量的87.37%。塊菌乙醚提取物的化學成分涵蓋了酸、醇、酯、醛、烴和苯衍生物等化合物。其中，脂肪酸類物質13種(占總峰面積的59.98%，下同)，醇類物質5種(占7.96%)，酯類物質5種(占2.79%)，醛類物質5種(占2.44%)，烷烴類物質25種(占13.12%)，苯衍生物3種(占1.08%)。相對含量在2%以上的化合物依次為亞油酸(26.51%)、棕櫚酸(13.00%)、油酸(9.09% )、硬脂酸(6.94%)、菜子甾醇(4.93%)、環己醇(3.17%)、異丙基-8-(3-辛基-2-環氧乙烷)-辛酸酯(2.18%)、2-辛基環丙烯-1-庚醇(2.02%)等。

圖1 松露乙醚提取物的總離子流圖Fig.1 Total ion chromatogram of the ethyl ether extract from T.indicum

表1 松露乙醚提取物的化學成分分析Table 1 Components analysis of the ethyl ether extract from T.indicum

23 壬酸Nonanoic acid C9H18O2 94 0.15 24 3，4-二甲基癸烷3，4-Dimethylundecane C13H28 93 0.07 25 3-癸烯酸3-Decenoic acid C10H18O2 83 0.79 26 正癸酸n-Decanoic acid C10H20O2 82 0.96 27 5-甲基-2-苯基-2-己烯醛5-Methyl-2-phenyl-2-hexenal C13H16O 92 0.16 28 3，5-二叔丁基苯酚3，5-bis(1，1-Dimethylethyl)-Phenol C14H22O 83 0.16 29 月桂醛Dodecanal C12H24O 94 0.09 30 肉豆蔻酸Tetradecanoic acid C14H28O2 94 0.07 31 9-十六碳烯酸9-Hexadecenoic acid C16H30O2 94 0.29 32 棕櫚酸n-Hexadecanoic acid C16H32O2 95 13.00 33 十七烷酸乙酯Heptadecanoic acid，ethyl ester C19H38O2 90 0.31 34 十七烷酸Heptadecanoic acid C17H34O2 92 0.10 35 10-甲基-十九烷10-Methylnonadecane C20H42 90 0.08 36 亞油酸(Z，Z)-9，12-Octadecadienoic acid C18H32O2 96 26.51 37 油酸(Z)-9-Octadecenoic acid C18H34O2 93 9.09 38 硬脂酸Octadecanoic acid C18H36O2 96 6.94 39 (順，順，順)-7，10，13-二十碳三烯酸甲酯(E，E，E)-7，10，13-Eicosatrienoic acid，methyl ester C21H36O2 83 0.17 40 (順，順，順)-8，11，14-二十碳三烯酸(Z，Z，Z)-8，11，14-Eicosatrienoic acid C20H34O2 80 0.67 41 (順，順)-9，12-十八碳二烯酰氯(Z，Z)-9，12-Octadecadienoyl chloride C18H31C10 79 0.34 42 1-十八炔1-Octadecyne C18H34 82 0.81 43 六氫-4，4，7a-三甲基-2(3H)-苯并呋喃酮Hexahydro-4，4，7a-trimethyl-2(3H)-benzofuranone C21H18O2 81 0.85 44 9-二十炔9-Eicosyne C20H38 85 1.39 45 2-辛基環丙烯-1-庚醇2-Octylcyclopropene-1-heptanol C18H34O 82 2.02 46 二十四烷Tetracosane C24H50 96 1.33 47 9-酮基-10，12-十八碳二烯酸9-Oxo-10，12-octadecadienoic acid C18H30O3 84 1.18 48 異丙基-8-(3-辛基-2-環氧乙烷)-辛酸酯Isopropyl-8-(3-octyl-2-oxiranyl)-octanoate C21H40O3 79 2.18 49 二十五烷Pentacosane C25H52 90 0.78 50 鄰苯二甲酸二正辛酯Di-n-octyl phthalate C24H38O4 82 0.08 51 二十八烷Octacosane C28H58 96 0.24 52 1-氯代二十七烷1-Chloroheptacosane C27H55Cl 83 0.46 53 二十九烷Nonacosane C29H60 94 0.14 54 反式角鯊烯All-trans-Squalene C30H50 94 0.09 55 三十四烷Tetratriacontane C34H70 93 0.11 56 菜子甾醇Brassicasterol C28H46O 89 4.93

4 討論

分析結果表明:含有滇產黑塊菌香味物質的乙醚提取物中的主成分是脂肪酸，包括不飽和脂肪酸亞油酸(26.51%)、油酸(9.09%)和飽和脂肪酸棕櫚酸(13.00%)、硬脂酸(6.94%)，主要不飽和脂肪酸(油酸和亞油酸)和飽和脂肪酸(棕櫚酸和硬脂酸)總量分別為35.60% 和19.94%。不飽和脂肪酸是人類必需的脂肪酸，具有多種有利于人體健康的生理活性。其中亞油酸具有抗癌、抗氧化、抑制脂肪積累、降低血清膽固醇等作用［6］。而油酸作為一價不飽和脂肪酸，代替膳食中的飽和脂肪酸，具有降低低密度脂蛋白膽固醇的效果［7］。棕櫚酸(十六烷酸、軟脂酸)和硬脂酸(十八烷酸)等高級飽和脂肪酸，是自然界中分布最廣的脂肪酸之一。棕櫚酸除了具有抗腫瘤、抗衰老的生物活性外［8，9］，還是合成化妝品成分棕櫚酸異丙酯、棕櫚酸異辛酯的基本原料。

本研究同時從滇產黑塊菌提取物中鑒定出了八碳化合物1-辛烯-3-醇(0.81%)。1-辛烯-3-醇俗稱蘑菇醇，帶有濃烈的鮮菇香味，是許多蕈菌中最典型的風味物質，也是自然界內蕈菌的主要揮發性物質之一［10］。Splivallo等［2］從中國產塊菌Tuber indicum的揮發油中曾鑒定出了1-辛烯-3-醇(27.47%)、2-辛烯醛(7.85%)、3-辛酮(3.92%)、2-辛烯-1-醇(3.14%)等多種八碳化合物。鑒定出的八碳化合物在含量和種類上與文獻報道的有明顯區別，原因在于分析對象為乙醚可溶的脂溶性成分，含有較多的非揮發性成分，與Splivallo等所分析的揮發油不同。據報道，1-辛烯-3-醇等八碳化合物在蕈菌中是由亞油酸或亞麻酸經脂肪氧合酶等催化轉變而成的［11］，滇產黑塊菌乙醚提取物中油酸和亞油酸總和為35.6%，檢測出的八碳化合物種類和含量狀況可能與塊菌所處的生長階段有關［2，12］。

本研究對黑松露乙醚提取物進行了初步分析并發現了多種生物活性成分，說明滇產黑松露除了食用價值外，還可能有藥理作用。分析結果為滇產松露資源的深入研究開發提供了一定的科學依據，有望在藥物研究、食品和香精產業中得以推廣應用。

致謝GC-M S由中國科學院廣州化學研究所的劉倩老師和梁慶優老師測定，謹致謝忱!

1 Wang XE(王曉娥)，Yao FJ(姚方杰)，Li Y(李玉).Research advances of Truffles.Edib Fungi Chin(中國食用菌)，2005，24:6-9.

2 Splivallo R，Bossi S，Maffei M，et al.Discrimination of truffle fruiting body versus mycelial aromas by stir bar sorptive extraction.Phytochemistry，2007，68:2584-2598.

3 Diaz P，Ibanez E，Senorans FJ，et al.Truffle aroma characterization by headspace solid-phase microextraction.J Chromatogr A，2003，1017:207-214.

4 Aprea E，Biasioli F，Carlin S，et al.Rapid white truffle headspace analysis by proton transfer reaction mass spectrometry and comparison with solid-phase microextraction coupled with gas chromatography/mass spectrometry.Rapid Commun Mass Spectrom，2007，21:2564-2572.

5 Gao JM，Wang CY，Zhang AL，et al.A new trihydroxy fatty acid from the ascomycete，Chinese truffle Tuber indicum.Lipids，2001，36:1365-1370.

6 Gu LW(谷利偉)，Zhao JL(趙金蘭).Research advance of conjugated linoleic acids.Sci Tech Cereals Oils and Foods (糧油食品科技)，2001，9:28-29.

7 Tang CH(唐傳核)，Xu JX(徐建祥)，Peng ZY(彭志英).Recent study on nutrition and function of fatty acids.Chin Oils Fats(中國油脂)，2000，25:20-23.

8 Harada H，Yamashita U，Kurihara H，et al.Antitumor activity of palmitic acid found as a selective cytotoxic substance in a marine red alga.Anticancer Res，2002，22:2587-2590.

9 Xu HY(徐紅穎)，Yu XM(禹曉梅)，Liang YZ(梁逸曾)，et al.Analysis of the volatile oil from Radix Isatidis by GC-MS.Nat Prod Res Dev(天然產物研究與開發)，2008，20:292-294.

10 Hadar Y，Dosoretz CG.Mushroom mycelium as a potential source of food flavour.Trends Food Sci Technol，1991，2:214-218.

11 Assaf S，Hadar Y，Dosoretz CG.Biosynthesis of 13-hydroperoxylinoleate，10-oxo-8-decenoic acid，and 1-octen-3-ol from linoleic acid by a mycelial-pellet homogenate of Pleurotus pulmonarius.Agric Food Chem，1995，43:2173-2178.

12 Zeppa S，Gioacchini AM，Guidi C，et al.Determination of specific volatile organic compounds synthesised during Tuber borchii fruit body development by solid-phase microextraction and gas chromatography/mass spectrometry.Rapid Commun Mass Spectrom，2004，18:199-205.