核因子κB、基質金屬蛋白酶-9和血管內皮生長因子在腎透明細胞癌中的表達意義及相關性

王 彧 張祖文 胡玉紋(海南醫學院附屬醫院血透室，海南 海口 57002)

腎透明細胞癌內有纖細的血管網，也是腫瘤生長及浸潤的重要生物學基礎〔1〕。核因子(NF)-κB是具有多種功能的調控因子，能調節機體中多種蛋白和基因的轉錄與表達，其與脈管生成有重要關系〔2〕。而基質金屬蛋白酶(MMP)-9作為一種重要的明膠酶，可以有效調節細胞外基質(ECM)降解，對腫瘤進展有促進作用，近年來人們更多關注MMP-9與腫瘤中血管生成的作用，并證實MMP-9與血管生成的相關性〔3〕。本實驗應用免疫組織化學技術檢測腎透明細胞癌中NF-κB、MMP-9和血管內皮生長因子(VEGF)的表達特點，并關注三者關系，以期為探討腎透明細胞癌的發生發展提供依據。

1 材料與方法

1.1 材料 2008年1月至2010年12月我院手術治療后腎透明細胞癌存檔蠟塊組織110例為觀察組，納入標準均符合WHO關于腎透明細胞癌的診斷標準，并經病理主治醫師閱片確診。年齡50～79(平均60.4)歲，男59例，女51例。手術前均未進行任何放、化療。選擇距腫瘤邊緣6 cm以上的正常腎組織50例為對照組，年齡51～80(平均60.3)歲，男女各25例。兩組一般臨床特征無明顯差別。

1.2 免疫組化檢測NF-κB、MMP-9和VEGF蛋白表達及判斷標準 NF-κB、MMP-9和VEGF抗體濃縮液均購自北京中杉金橋生物工程公司，按不同比例稀釋后進行預實驗，選擇最佳稀釋比例。應用免疫組化SP法進行，實驗過程均同一病理技師操作完成，嚴格按照說明書進行，嚴格質控。結果均由病理主治醫師閱片判讀，以細胞質中出現棕褐色細顆粒判定為陽性表達，每張病理切片均隨機選擇10個400倍高倍視野。以染色強度和陽性細胞率進行綜合判斷。染色強度判定:無細胞質著色0分，細胞質中著色淡者1分，著色深者2分;陽性細胞率判定:陽性細胞百分率 ＜10%為0分，10% ～25%1分，26% ～50%2分，＞50%3分。最終結果以染色強度×染色細胞的百分率來計算。即0～1分為陰性，≥2分為陽性。

1.3 統計學方法 應用SAS6.12統計軟件進行χ2檢驗和線性相關分析。

2 結果

2.1 兩組NF-κB、MMP-9和VEGF表達陽性率比較 觀察組三者陽性表達率明顯高于對照組(P＜0.000 1)。見表1。

2.2 觀察組NF-κB、MMP-9和VEGF陽性表達率在不同臨床病理特征中差別 觀察組NF-κB、MMP-9和VEGF陽性表達率與腫瘤體積、Fuhrman分級及TNM分期有關。見表2。

2.3 觀察組NF-κB、MMP-9和VEGF陽性表達率的關系 經線性相關性分析，觀察組 NF-κB和 MMP-9(r=0.43，P=0.028 4)、NF-κB 和 VEGF(r=0.44，P=0.021 4)、MMP-9 和VEGF(r=0.40，P=0.032 0)表達均呈正相關。

表1 兩組NF-κB、MMP-9和VEGF陽性表達率比較〔n(%)〕

表2 觀察組NF-κB、MMP-9和VEGF陽性表達率在不同臨床病理特征中的差別〔n(%)〕

3 討論

腎透明細胞癌是一種由胞質透明或嗜酸性的腫瘤細胞構成的惡性腫瘤，是腎實質癌中最常見類型，腫瘤生長時常伴有出血、壞死、囊性變和鈣化。近來研究顯示腎透明細胞癌是富于血管的腫瘤，有關腫瘤血管生成的促進因子對腫瘤進展具有促進作用〔4〕。腫瘤生長依靠血管生成，而在侵襲和轉移過程中，腫瘤細胞必須穿過由ECM和基底膜構成的屏障。當前觀察降解ECM的重要成分是MMP，而在此過程中起作用的是MMP家族，MMP-9是一種鋅離子依賴的蛋白水解酶，也稱明膠酶B，可由腫瘤細胞和間質細胞以酶原形式分泌，并經水解后激活，具有較強的降解基底膜成分的功能，被認為與腫瘤惡性進程、侵襲和轉移密切相關〔5〕。VEGF具有強大的基質血管生成促進作用，并可以作為蛋白或基因的橋聯作用的關鍵因子〔6〕。VEGF是由2條相對分子量為23 000單鏈組成的蛋白質，能直接作用于血管內皮細胞(VEC)，引起內皮細胞增殖。NF-κB作為一種在成熟的B淋巴細胞核中提取的物質，可以和免疫球蛋白κ鏈基因的增強子κB序列特異性結合，可以參與多種蛋白和基因調控，在多種腫瘤中具有促進作用〔4，7〕。

本實驗結果提示NF-κB、MMP-9和VEGF對腫瘤發生有重要促進作用，三者表達均與腫瘤體積、Fuhrman分級及TNM分期有關，因為腫瘤體積、Fuhrman分級及TNM分期不僅是傳統的判斷腫瘤預后相關的指標，也是指導治療的重要指標，因此提示對于腫瘤組織進行NF-κB、MMP-9和VEGF聯合檢測，可能有助于臨床判斷預后及為臨床治療提供依據。本實驗結果提示NF-κB、MMP-9和VEGF具有正向協同作用。NF-κB可能作為上游蛋白，調節MMP-9和VEGF高表達，進而促進MMP-9介導的降解ECM作用，也促進VEGF血管新生的作用，進而促進腫瘤生長及播散。NF-κB還可能作為其調節基因或作用的關鍵橋梁位點，使VEC凋亡并促進內皮細胞增殖，產生大量腫瘤性新生血管。也有觀點顯示NF-κB高表達可以有效提示異型細胞增殖旺盛，致使腫瘤細胞擠壓周圍間質，引起局部張力增大，使微血管受到擠壓、變形或扭曲，引起局部組織和細胞缺氧，而低氧環境可以啟動癌細胞分泌大量VEGF，進而促進VEC增殖，引起微血管延伸，使微血管密度增高，進而保證腫瘤細胞對氧和營養成分的需要，而增生的VEC又能產生大量VEGF，形成環式循環，刺激內皮細胞高速增殖〔8〕。綜上，NF-κB、MMP-9和VEGF在腎透明細胞癌中高表達促進疾病進展。三者聯合檢測可能對判斷預后及指導治療有一定價值。

1 Oka D，Nishimura K，Shiba M，et al.Sesquiterpene lactone parthenolide suppresses tumor growth in a xenograft model of renal cell carcinoma by inhibiting the activation of NF-kappaB〔J〕.Int J Cancer，2007;120(12):2576-81.

2 Meteoglu I，Erdogdu IH，Meydan N，et al.NF-kappaB expression correlates with apoptosis and angiogenesis in clear cell renal cell carcinoma tissues〔J〕.J Exp Clin Cancer Res，2008;19(27):53.

3 劉愛東，龐久玲，劉士生.胃癌中基質金屬蛋白酶-9和CD105表達關系的研究〔J〕.中國老年學雜志，2009;29(4):886-7.

4 Guo R，Chang L，Liu Z，et al.Canonical nuclear factor κB pathway links tumorigenesis of synchronous mantle-cell lymphoma，clear-cell renal-cell carcinoma，and GI stromal tumor〔J〕.J Clin Oncol，2011;29(10):e257-61.

5 劉愛東.基質金屬蛋白酶-9在胃癌中的表達及意義〔J〕.現代中西醫結合雜志，2011;20(18):2226-7.

6 劉愛東.流式細胞術檢測胃癌中血管內皮生長因子的表達及意義〔J〕. 中國中醫藥咨訊，2011;3(5):219，184.

7 Pantuck AJ，An J，Liu H，et al.NF-kappaB-dependent plasticity of the epithelial to mesenchymal transition induced by Von Hippel-Lindau inactivation in renal cell carcinomas〔J〕.Cancer Res，2010;70(2):752-61.

8 沈艷萍，盧國元，喬 青，等.NF-κB、VEGF和CD105在腎癌中的表達及其與血管生成的關系〔J〕.山東醫藥，2010;50(25):83-4.