高效液相法測定清肝利膽口服液中綠原酸含量

張 健，梁 艷

(1．開封市食品藥品檢驗(yàn)所，河南開封 475002;2．河南省醫(yī)藥學(xué)校，河南開封 475001)

清肝利膽口服液由茵陳、山銀花、梔子、厚樸4味中藥組成，有清利肝膽濕熱之功效，主治納呆、脅痛、疲倦乏力、尿黃、苔膩、脈弦、肝郁氣滯、肝膽濕熱未清等癥。山銀花中含有綠原酸［1］，綠原酸具有抗菌、消炎、解毒、利膽、降壓和升高白細(xì)胞及顯著增加胃腸蠕動(dòng)和促進(jìn)胃液分泌等藥理作用［2］。現(xiàn)用質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)為《中國藥典》2010版一部［3］，質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中無綠原酸含量測定項(xiàng)。本文采用高效液相色譜(HPLC)法，對口服液中綠原酸進(jìn)行含量的測定。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，本法簡便、快速、準(zhǔn)確，可用于含量的測定。

1 藥品、試劑與儀器

清肝利膽口服液，10 mL/支，河南信心藥業(yè)有限公司產(chǎn)品，批號100509，100607，101108。綠原酸對照品，中國藥品生物制品檢定所產(chǎn)品，批號110753-200413;乙腈、甲醇為色譜純，磷酸為分析純，水為純化水。Waters 2695/2998型高效液相色譜儀，UVIKON-XL紫外分光光度計(jì)，CP-225D電子天平。

2 方法與結(jié)果

2．1 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)［4-5］

參照文獻(xiàn)［4-5］。色譜柱為Agela C18(250 mm×4．6 mm，5 μm)，流動(dòng)相為乙腈—0．5 g/L 磷酸溶液［5］(10∶90)，檢測波長327 nm，體積流量0．8 mL/min，柱溫30．0℃，進(jìn)樣量10 μL。理論塔板數(shù)按綠原酸峰計(jì)算應(yīng)不低于4 000。

2．2 溶液的制備

2．2．1 對照品溶液

精密稱取經(jīng)五氧化二磷減壓干燥24 h的綠原酸對照品12．25 mg，置25 mL量瓶中，加500 g/L甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為對照品儲備液。

2．2．2 供試品溶液

精密量取供試品5 mL，置50 mL量瓶中，加500 g/L甲醇稀釋至刻度，搖勻，作為供試品溶液。

2．3 線性關(guān)系考察

精密量取對照品儲備液5 mL，置于50 mL量瓶中，加500 g/L甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，分別取5，10，20，30，40 μL 進(jìn)樣，記錄色譜圖，以對照品進(jìn)樣量(μg)對峰面積Y作線性回歸。結(jié)果回歸方程(n=5)為：Y=106 377X+273 843(r=0．999)。線性范圍為 0．245 ～1．960 μg。

2．4 精密度試驗(yàn)

取對照品溶液，按2．1色譜條件進(jìn)樣10 μL，連續(xù)進(jìn)樣6針，以綠原酸峰面積積分值計(jì)算RSD為0．4%。

2．5 重現(xiàn)性試驗(yàn)

取同一批號樣品(批號100509)，按2．2．2制得供試品溶液5份，測定含量，綠原酸的平均含量為0．48 g/L，RSD 為 0．05%。

2．6 穩(wěn)定性試驗(yàn)

配制一份供試品溶液，室溫下在 0，1，2，4，6，8，12，24 h 分別進(jìn)樣10 μL，測得峰面積 RSD=0．52%(n=8)。結(jié)果表明，本品的供試品溶液在室溫24 h內(nèi)穩(wěn)定性較好。

2．7 加樣回收率試驗(yàn)

精密量取對照品儲備液(0．49 g/L)和已知含量樣品(批號100509，0．48 g/L)各1 mL，置25 mL 量瓶中，加500 g/L甲醇稀釋至刻度，搖勻，作為加樣回收供試品溶液。按2．1色譜條件進(jìn)樣20 μL，各測定2次。結(jié)果：平均回收率為 98．6%，RSD為0．39%(n=6)。

2．8 樣品含量測定

分別精密量取3批樣品，按供試品溶液制備方法制備溶液，分別進(jìn)樣10 μL，測定綠原酸含量，色譜圖見圖1～2，結(jié)果見表1。

表1 3批樣品測定結(jié)果

3 討論

根據(jù)綠原酸性質(zhì)，比較提取溶劑，以500 g/L甲醇為最佳溶劑［6］。取對照品及供試品溶液，用UVIKON-XL紫外分光光度計(jì)在200～400 nm波長范圍內(nèi)掃描，結(jié)果在327 nm波長處有最大吸收，故選擇327 nm為檢測波長。通過對流動(dòng)相組分及比例的比較，最終確定以乙腈—0．5 g/L磷酸溶液(10∶90)為流動(dòng)相，樣品中綠原酸與其他雜質(zhì)峰能基線分離，理論塔板數(shù)為16 200。

［1］柴興云，竇靜，賀清輝，等．山銀花中酚酸類成分研究［J］．中國天然藥物，2004，2(6)：339-340．

［2］陳為烤，居文政，談恒山．綠原酸的體內(nèi)過程及藥物相互作用［J］．中藥藥理與臨床，2008，24(3)：118-120．

［3］國家藥典委員會．中華人民共和國藥典：一部［M］．北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2010：1115-1116．

［4］陳葉青．高效液相法測定婦科止癢膠囊中綠原酸含量［J］．中國藥業(yè)，2011，20(6)：32-33．

［5］丁家欣，張秋海，張智．高效液相色譜法測定牛蒡根中綠原酸的含量［J］．中國實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志，2008，1(14)：13-14．

［6］陳鋼，侯世祥，胡平，等．金銀花提取物中綠原酸的穩(wěn)定性研究［J］．中國中藥雜志，2003，28(3)：223-225．