鴨坦布蘇病毒病的研究進(jìn)展

胡奇林 孫敏華

（廣東省農(nóng)業(yè)科學(xué)院獸醫(yī)研究所，廣東省獸醫(yī)公共衛(wèi)生公共實驗室 廣州 510640）

鴨坦布蘇病毒（Duck Tembusu Virus,DTMUV）病又稱“鴨黃病毒病”、“鴨出血性卵巢炎”或“鴨產(chǎn)蛋下降-死亡綜合征”等，是自2010年春季以來我國主要蛋鴨飼養(yǎng)區(qū)出現(xiàn)的一種新的禽傳染病。該病臨床上以蛋鴨采食量下降，產(chǎn)蛋量驟然減少，即5天內(nèi)減蛋超過90%或者絕產(chǎn)為主要癥狀，以卵泡膜出血、充血，卵泡變形為主要病變，給我國水禽業(yè)造成了嚴(yán)重經(jīng)濟(jì)損失。本文對該病的研究現(xiàn)狀作一綜述。

1 病原學(xué)

2010年曹貞貞等[1]從我國部分地區(qū)發(fā)病鴨群中分離到黃病毒YY5，認(rèn)為可能是鴨坦布蘇病毒病的病原。2010年滕巧泱、顏丕熙等[2]對上海、浙江和江蘇發(fā)病鴨場進(jìn)行病原分離也獲得了本病毒。2010年萬春和[3]等自表現(xiàn)產(chǎn)蛋驟降的病死種鴨中分離到有囊膜、直徑為30～50nm的病毒W(wǎng)R株。2010年Su等[4]從發(fā)病鴨臟器中分離出了一種新型黃病毒BYD，與坦布蘇病毒關(guān)系密切，證明是鴨坦布蘇病毒病病原。隨后，李玉峰等[5]、黃梅欣等[6]和孫敏華等[7-8]分別從山東蛋鴨、江蘇產(chǎn)蛋鵝和廣東產(chǎn)蛋鴨、肉鴨中分離到DTMUV。

DTMUV屬于黃病毒科（Flaviviridae）黃病毒屬。DTMUV顆粒呈球形，直徑約50nm，有囊膜，表面有纖突[1-4]。DTMUV對乙醚、氯仿及去氧膽酸鹽敏感。病毒不耐熱，50℃以上加熱60 min活性喪失。適宜pH范圍為6～9，pH＜5或pH＞10時感染性喪失[9]。DTMUV不能凝集雞、鴨、鵝、鴿、鼠、兔、豬和人的紅細(xì)胞[1，4-5]。

DTMUV經(jīng)尿囊腔接種鴨胚3～5d后死亡，表現(xiàn)為絨毛尿囊膜增厚、水腫，胚體水腫、出血。DTMUV能在鴨胚、雞胚、鴨胚成纖維細(xì)胞及Vero細(xì)胞中增殖，主要在感染細(xì)胞的胞漿內(nèi)復(fù)制[5,9]。DTMUV能在鴨胚成纖維細(xì)胞增殖，并產(chǎn)生細(xì)胞病變(CPE)，表現(xiàn)為折光性增強(qiáng)，細(xì)胞變圓及融合，最終崩解死亡[9]。

DTMUV基因組是不分節(jié)段的單股正鏈RNA，含10990個核苷酸。基因組由5'端和3'端非編碼區(qū)(UTR)及一個開放閱讀框(ORF)組成，基因組順序為5'-UTR-C-prM/M-E-NS1-NS2A/2B-NS3-NS4A/4BNS5-UTR-3'。基因組ORF翻譯后合成一多聚蛋白前體，在宿主信號肽酶和病毒絲氨酸蛋白酶的催化下切割成為C、M和E 3個結(jié)構(gòu)蛋白 (C為衣殼蛋白，M為膜蛋白，E為包膜蛋白)和7種非結(jié)構(gòu)蛋白(NS1、NS2A、NS2B、NS3、NS4A、NS4B 和 NS5)[10]。

2 流行病學(xué)

2.1 易感動物

自然條件下，蛋鴨(紹興鴨、縉云麻鴨、山麻鴨、金定鴨、康貝爾鴨、臺灣白改鴨等)、肉種鴨(櫻桃谷鴨、北京鴨等)、野鴨種鴨、肉鴨、產(chǎn)蛋鵝及肉鵝均會發(fā)病，蛋雞也會發(fā)病，番鴨未見發(fā)病[1-2,6,11]。

2.2 發(fā)病日齡

產(chǎn)蛋鴨，主要發(fā)生于120～300日齡；主要見于210～280日齡；肉鴨主要見于10～40日齡，多在20日齡左右[4,5]。

2.3 發(fā)病率、致死率

蛋鴨發(fā)病率達(dá)90%～100%，死亡率小于10%，多數(shù)在5%以下；肉鴨發(fā)病率10%～30%，死亡率為10%～20%[4,5-6]。

2.4 病程

一般為 10～30d[4,5]。

2.5 傳播途徑

推測可能與蚊蟲有關(guān)，同時本病可以經(jīng)鴨直接傳播[2]。該病毒能經(jīng)糞便排毒，污染環(huán)境、飼料、飲水、器具及運輸工具等而造成傳播[7]。

2.6 傳播速度

一般在1周左右可以感染一個養(yǎng)殖小區(qū)或聚養(yǎng)區(qū)的所有鴨群。一旦某個鴨場發(fā)生該病,很快以該場為中心，快速擴(kuò)散，幾天內(nèi)可傳遍周邊區(qū)域，特別是在鴨棚密集區(qū)傳播更迅速，發(fā)病更嚴(yán)重[1，4]。

3 臨床癥狀

產(chǎn)蛋鴨發(fā)病后，主要表現(xiàn)采食量下降，產(chǎn)蛋量驟然減少，即5天內(nèi)減蛋超過90%或者絕產(chǎn)，拉綠色糞便為主要癥狀，病程持續(xù)20～30d，隨后鴨群逐漸康復(fù)，產(chǎn)蛋率回升。肉鴨發(fā)病后，主要表現(xiàn)為發(fā)熱、食欲減退、搖頭和癱瘓等癥狀[1，4-5]。

4 病理變化

病死鴨病變主要在卵巢，初期可見部分卵泡充血和出血，中后期可見卵泡嚴(yán)重出血、變性和萎縮，嚴(yán)重時破裂，引發(fā)卵黃性腹膜炎，少部分鴨輸卵管內(nèi)出現(xiàn)膠凍樣或干酪樣物。肝臟輕微腫大，有出血或瘀血，有些鴨表面有針尖狀白色點狀壞死。部分鴨脾臟腫大、小腸黏膜出血，野鴨病變基本同上[1，4-5]。

5 檢測技術(shù)

5.1 分子生物學(xué)方法

Su等[4]建立了針對DTMUV E基因的RT-PCR方法，擴(kuò)增片斷為401bp。萬春和等[13]參照GenBank上登錄的黃病毒科黃病毒屬NS5基因片段序列設(shè)計引物，建立能檢測引起DTMUV的RT-PCR方法。該方法能使鴨坦布蘇病毒病毒擴(kuò)增出1條約470 bp的特異性片段，最低可檢出20pg病毒核酸，具有較好的特異性、敏感性和準(zhǔn)確性。顏丕熙等[14]建立了檢測鴨坦布蘇病毒的套式RT-PCR方法，該套式RT-PCR比常規(guī)RT-PCR敏感性高10倍。Wang等[15]建立了針對DTMUV E基因的RT-LAMP方法。該方法比常規(guī)RT-PCR方法敏感80倍，可檢測到2拷貝/μL病毒核酸。最近，Yan等[16]建立了針對E基因的TaqMan探針熒光定量RT-PCR，該方法比常規(guī)RT-PCR敏感100倍，最低可檢測到50個拷貝的病毒核酸。高緒慧等[17]利用RT-PCR方法擴(kuò)增DTMUV的NS3基因406bp的特異性片段，回收并純化PCR產(chǎn)物，用地高辛標(biāo)記，制備核酸探針試驗結(jié)果表明，該探針具有良好的特異性；該探針對鴨黃病毒的RNA最低檢出限量為100μg/L。對疑似黃病毒感染鴨的肝臟、肺臟、脾臟、輸卵管、卵泡膜和泄殖腔棉拭子進(jìn)行檢測，以卵泡膜的檢出率最高。張帥等[18]設(shè)計了1對特異性引物，建立了DTMUV的一步法RT-PCR檢測方法。該方法具有特異、快速、敏感和準(zhǔn)確等特點，可以檢出1.82個TCID50的病毒核酸，對2010年至2011年6月份前的106份產(chǎn)蛋下降鴨群臨床病料進(jìn)行了檢測，結(jié)果顯示樣品陽性率為46.2%。

5.2 血清學(xué)方法

姬希文等[19]以純化的FX2010株作為包被抗原，建立了檢測DTMUV血清抗體的間接ELISA法，該方法具有較高的敏感性和特異性，可以用于該病的診斷和流行病學(xué)調(diào)查。

6 防治技術(shù)

6.1 預(yù)防

6.1.1 綜合防治措施 ①建立良好的生物安全體系。養(yǎng)殖場選址時遠(yuǎn)離高速公路、屠宰場、活禽交易市場和養(yǎng)殖密集區(qū)；不要從疫區(qū)引進(jìn)種禽和購買苗禽；實行全進(jìn)全出飼養(yǎng)制度；搞好養(yǎng)殖場周圍的環(huán)境衛(wèi)生，清除污水、垃圾和衛(wèi)生死角，減少蚊子的孳生，做好驅(qū)蚊和滅蚊；病死禽和糞便統(tǒng)一無害化處理。②加強(qiáng)飼養(yǎng)管理，改善養(yǎng)殖環(huán)境。如降低飼養(yǎng)密度，冬春季節(jié)注意通風(fēng)和保溫，保證鴨舍的溫度和濕度。杜絕雞、鴨和鵝混養(yǎng)。

6.1.2 疫苗 目前尚無有效防制DTMUV的商品化的疫苗。萬春和等[20]2011年報道，研制出鴨黃病毒油乳劑滅活疫苗，攻毒試驗結(jié)果表明，免疫實驗組蛋鴨和空白對照組蛋鴨平均產(chǎn)蛋率下降無差異，且觀察期內(nèi)均未見發(fā)病死亡，觀察期滿撲殺后均無肉眼可見病變。而未免疫攻毒組蛋鴨減蛋明顯，4天內(nèi)平均產(chǎn)蛋率下降為40.85%，比疫苗免疫組平均產(chǎn)蛋率低39.15%。

6.2 治療

發(fā)病后可以采取以下綜合治療措施，如在飲水中添加復(fù)合維生素，并通過飲水適當(dāng)給予抗生素，以防止鴨群繼發(fā)感染細(xì)菌病。同時，應(yīng)對各種用具與設(shè)備、運輸車輛及種蛋進(jìn)行嚴(yán)格消毒，墊料與病死鴨應(yīng)進(jìn)行焚燒或生物處理。在發(fā)病流行期間，做好封棟、封場工作，做好飼養(yǎng)人員的生活安排，管理人員與生產(chǎn)人員必須隔離。

采集發(fā)病1周后鴨群血液，無菌操作分離血清，應(yīng)用于發(fā)病鴨群，可緩解癥狀，提高食欲，加快鴨群產(chǎn)蛋性能恢復(fù)[21]。

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