分光光度法測定硒鹽中的硒（IV）含量

陳愛敏 魏海英

（河北大學 化學與環境科學學院，河北 保定071002）

1 前言

硒是人體必需的微量元素之一，缺硒會導致克山病和大骨節病，會提高心血管和冠心病動脈硬化等疾病發病率［1］。目前市場上補硒藥品，保健品，種類繁多，價格高低不一，效果參差不齊。在我國得以普及的補硒方法是在食鹽中加入亞硒酸鈉。

與鐵、鋅等微量元素不同，硒是有毒的，硒的有效量和毒量非常接近。在2000年制定的“中國居民膳食營養元素參考攝入量”中提出，18歲以上者推薦攝入量為50μg／d，可耐受最高攝入量為400μg／d。因此，不能盲目補硒，如果攝入過量會造成硒慢性中毒［2］，出現脫發、脫甲等癥狀。食用硒鹽是人們最易接受的日常補硒的方式，所以對硒鹽中的硒含量進行控制，準確分析硒含量具有重要意義。目前測定微量硒的方法很多［3－4］，各有優缺點。而實際實驗中要根據實驗要求和實驗條件綜合考慮選擇合適的測定方法。利用鄰苯二胺與硒（IV）配位能產生黃色配合物，采用環己烷萃取后在330nm處測定萃取液吸光度，建立標準曲線，進而求得硒含量，實驗對儀器要求低，試劑廉價且毒性小，在普通實驗室就可完成，易于在基層推廣。

2 實驗部分

2.1 儀器與試劑

TU－1810紫外可見分光光度計（北京普析通用有限公司），PHS－3C型酸度計（上海偉業），分析天平（奧豪斯儀器有限公司）。

硒標準儲備溶液 （1.0mg／mL）：準確 稱取2.1905g Na2SeO3加水配成1L溶液。

硒標準工作溶液（4μg／mL）：移取1.00mL硒儲備溶液于250mL棕色容量瓶，稀釋定容。

鄰苯二胺溶液（10g／L），乙二胺四乙酸二鈉（EDTA－2Na，50g／L）溶液，HCl溶液（6mol／L），環己烷。

所用試劑均為分析純，水為二次去離子水。

樣品：硒強化營養鹽（山東肥城）、硒強化營養鹽（河南鄭州）、多元素營養鹽（山東肥城）。

2.2 實驗方法

按順序移取一定量硒標準溶液，加入1.00mL EDTA－2Na（50g／L），1.50mL鄰苯二胺（10g／L）于25mL比色管中，加水近刻度線，用 HCl（6mol／L）調pH值到2.00后定容，混合均勻，室溫下置于暗處反應50min。加10.00mL環己烷，振搖3min，靜置8min，轉入分液漏斗分液。同樣步驟得到試劑空白，以試劑空白作參比在波長330nm處測環己烷層吸光度。

3 結果與討論

3.1 波長的選擇

取5.00mL硒標準溶液（4μg／mL）于25mL比色管中，按實驗方法，以試劑空白作參比，在190～900nm范圍內對環己烷層掃描，選擇最大吸收波長330nm作為測量波長。

3.2 溶液的pH值選擇

依次取5.00mL硒標準溶液（4μg／mL）于5個25mL比色管中，用 HCl（6mol／L）調pH值分別為1，2，3，4，5，其他步驟同實驗方法，結果如圖1所示。pH值在1～2時對吸光度影響不大，考慮實際操作方便，實驗選擇pH值為2。

圖1 pH的影響Figure 1. Effect of pH on absorbance.

3.3 鄰苯二胺用量

鄰苯二胺（2g／L）試液在冰箱中僅可保存數天，改用鄰苯二胺（10g／L）試液在冰箱中可保存30～60 d，且反應速度加快［5］，實驗選用鄰苯二胺（10g／L）。

依次取5.00mL 硒標準溶液（4μg／mL）于25mL比色管中，分別加入0.50，1.00，1.50，2.00，2.50mL鄰苯二胺（10g／L），其他步驟同實驗方法，結果見圖2。由圖2分析可知，當鄰苯二胺（10g／L）用量1.50mL時，吸光度達到最大，再增大用量，吸光度變化不大，所以選擇鄰苯二胺（10g／L）用量為1.50mL。

圖2 鄰苯二胺用量對吸光度影響Figure 2. Effect of the amount of o－phenylenediamine on absorbance.

3.4 反應時間

依次取5.00mL硒標準溶液（4μg／mL）于7個25mL比色管中，其他步驟同實驗方法，結果如圖3。由圖3可知，反應初期吸光度受時間影響較大，40min時吸光度基本不變。為保證反應完全，實驗選擇50min。

3.5 EDTA－2Na用量

常見離子的干擾實驗證明，Fe3＋，Cu2＋對實驗干擾較大，可用一定量EDTA－2Na消除干擾［6］。但EDTA－2Na的溶解度隨酸度增大而減小，反應體系中酸度較大，加入EDTA－2Na過多會形成不溶物，影響結果。為了探究最佳用量，依次取5.00mL硒標準溶液（4μg／mL）于25.00mL比色管中，分別加入0.00，1.00，2.00，3.00，4.00，5.00，6.00mL EDTA－2Na（50g／L），其他步驟如實驗方法。結果如圖4所示，加入EDTA－2Na的體積小于1.00mL時對體系無影響，但太少又不能消除共存離子的影響，所以實驗選擇加入EDTA－2Na的體積為1.00mL。

3.6 萃取振搖時間

加入環己烷萃取時，分別振搖不同時間，其它步驟如實驗方法，結果如圖5，當振搖3min時吸光度最大，再延長時間到8min時略有下降。實驗過程發現當振搖過于劇烈或者時間超過10min時，出現乳化現象，影響萃取效果。所以實驗選擇振搖時間為3min。

圖3 反應時間對吸光度的影響Figure 3. Effect of reaction time on absorbance.

圖4 EDTA－2Na用量對吸光度影響Figure 4. Effect of EDTA－2Na content on absorbance.

圖5 振搖時間對吸光度影響Figure 5. Effect of shaking time on absorbance.

3.7 共存離子

取3.00mL硒標準溶液（4μg／mL）若干份，一份直接按實驗方法進行最后測定，其余的分別加入硒的不同濃度倍數的可能產生干擾的離子，按實驗方法操作。結果如表1。由表1可知，Cu2＋，Fe3＋對本體系有干擾，加EDTA－2Na后可消除。當IO－3的濃度是硒的100倍時才會干擾測定。

表1 共存離子的影響Table 1 The influence of coexisting ions

3.8 工作曲線及檢出限

依次取 硒 標 準 溶 液 1.00，2.00，3.00，4.00，5.00mL于25mL比色管中，按實驗方法操作，以吸光度A對硒的濃度c作圖得到工作曲線，硒含量在4～20μg／mL時線性關系良好，線性方程A＝0.1999c－0.0011，相關系數R＝0.9995，可用于定量分析。

取11份試劑空白測定，計算標準偏差為0.0020，由公式計算得檢出限為0.03μg／mL。

4 樣品測定

目前，我國硒鹽中的硒是以NaSeO3的形式加入，不需要消化。樣品1為山東產硒強化營養鹽，樣品2為河南產硒強化營養鹽，樣品3為山東產多元素強化營養鹽，3種硒鹽均稱取5份，每份質量均為2.0000g，分別置于25mL比色管中，按實驗方法操作，測定硒含量，結果如表2所示，相對標準偏差為0.9%～1.6%。

表2 硒鹽中硒含量Table 2 Selenium contents in salt（n＝5） ／（μg·g－1）

5 回收率實驗

向每份樣品中加入2.00mL硒標準溶液（4μg／mL）進行加標回收實驗，回收率在99.7%～102.8%，結果如表3所示。

表3 回收率實驗Table 3 The recovery tests（n＝5） ／μg

6 穩定性實驗

取樣品和加標后樣品各一份，均在不同時間段測其吸光度，在30h內吸光度幾乎沒有變化，說明穩定性良好。

7 結論

探究了配位劑用量、體系酸度、反應時間、干擾離子等對實驗的影響，得到最優化測定條件為反應pH＝2，1.50mL鄰苯二胺（10g／L），1mL EDTA－2Na（50g／L），反應時間50min，萃取振搖時間3min。

用毒性較低的環己烷代替傳統方法中毒性較高的甲苯作萃取劑，在優化實驗條件測定了硒鹽中硒的含量，結果顯示，準確度高，穩定性好，操作簡單，對設備要求低，藥品價格低廉，在一般實驗室就能完成。

［1］張萬明，曹江峪，李文東，等.微波消解－紫外分光光度法測定彝藥中微量元素硒［J］.中國無機分析化學，2011，1（3）：62－65.

［2］Reid M E，Stratton M S，Lillico A J，et al.A report of high－dose selenium supplementation：response and toxicities［J］.Joumal of Trace Elements in Medicine and Biology，2004，18（1）：69－74.

［3］張維宇，張土秀，倪天增.程序控溫石墨消解－原子熒光光譜法測定土壤中的硒［J］.中國無機分析化學，2011，1（4）：36－39.

［4］陳殿耿，袁玉霞，王皓瑩.氫化物發生－原子熒光光譜法（HG－AFS）測定特硬鉛合金中硒和碲［J］.中國無機分析化學，2012，2（2）：38－40.

［5］劉慶堂，李銳增，李堅.紫外分光光度法測定龍膽中微量元素硒［J］.廣東藥學，2001，11（6）：30－32.

［6］周躍花，楊菊香，張娜.紫外分光光度法測定紫陽富硒茶中的硒［J］.西北農業學報，2009，18（4）：229－232.