樂胃飲對慢性萎縮性胃炎大鼠＊胃黏膜作用的掃描電鏡觀察

朱飛葉，吳晉蘭，徐 珊

(1.浙江中醫藥大學分析測試中心，杭州 310053;2.杭州市余杭區第五人民醫院，杭州 311100;3.浙江中醫藥大學基礎醫學院，杭州 310053)

樂胃飲是由老中醫的經驗方化裁而來，以山藥、薏苡仁、陳皮為主藥，具有清補脾胃、健運中州之功效。臨床上，對慢性萎縮性胃炎具有良好的治療效果［1］。為此，我們通過建立慢性萎縮性胃炎大鼠模型，采用掃描電鏡(SEM)技術從超微結構進一步闡明樂胃飲對胃黏膜的保護機制。

1 材料與方法

1.1 動物、藥物、主要試劑及儀器

健康8周齡雄性Wistar大鼠60只，體質量190g～210g，由浙江中醫藥大學實驗動物中心提供，按清潔級要求飼養(實驗動物許可證號SYXK(浙)2008-0115)。

淮山藥、炒薏苡仁、陳皮由浙江中醫藥大學第二門診部提供，按2∶2∶1比例水煎濃縮成生藥濃度為0.25g/ml、0.5g/ml、1g/ml的溶液。維酶素片由新鄉恒久遠藥業有限公司提供(批號20090805)，碾碎后用蒸餾水配制成濃度為0.015g/ml的混懸液。甲基-3-硝基-1-亞硝基胍(MNNG)由中國藥品生物制品檢定所提供，用蒸餾水配成1g/L的存儲液。水楊酸鈉由上海化學試劑采購供應五聯化工廠提供(分析純，批號20090701)，用蒸餾水配成2%水楊酸鈉溶液。HITACHIS-3000N掃描電子顯微鏡;HITACHI E-1010離子濺射儀。

1.2 方法

1.2.1 動物分組、模型制備及藥物干預 大鼠適應性飼養7d后，按隨機數字表法分為正常組、模型組、維酶素組、樂胃飲低、中、高劑量組。正常組充足供食，自由飲水。其余大鼠采用多重刺激法制備慢性萎縮性胃炎動物模型［2］。MNNG存儲液于臨用前將其稀釋成100μg/ml濃度的飲用液，避光作為大鼠自由飲水，每天更換。水楊酸鈉溶液每周1、4各灌胃1次，2ml/只，灌胃前后禁食禁水1h。第5周起單日禁食，雙日充足供食，連續8周。每組隨機抽取1只大鼠進行胃黏膜組織學檢查，確定模型成功后分組治療。維酶素組按0.2g/kg灌胃，樂胃飲低、中、高劑量組分別按4g/kg、8g/kg、16g/kg灌胃，正常組和模型組以等量生理鹽水灌胃，連續給藥4周，并記錄各組大鼠飲食、活動、毛發、體重的變化。

1.2.2 標本采集和處理 第12周末處死所有大鼠，剖腹，距賁門和幽門1.5cm離斷取出全胃。沿胃大彎側剖開，冰生理鹽水沖洗后，在胃竇部取5mm×5mm大小胃黏膜組織塊，迅速固定于預冷的2.5%戊二醛內，置4℃冰箱，充分固定后各組抽取2例，用0.1mol的磷酸緩沖液充分沖洗，再用1%鋨酸固定 1.5h，梯度脫水(分別用 50%、70%、80%、90%、95%、100%乙醇、純丙酮、醋酸異戊酯脫水，每次15min)，二氧化碳臨界點干燥、噴金，掃描電鏡下觀察。

1.3 統計學處理

采用SPSS16.0統計軟件處理。計量資料用均數±標準差(±s)表示，多組數據統計采用單因素方差分析。組間兩兩比較，方差齊性時用 LSD檢驗，方差不齊時用Dunnett’s T3檢驗，P＜0.05為差異顯著性標準。

2 結果

2.1 大體觀察

正常組大鼠飲食正常，活動自如，毛發有光澤，體重逐漸增加，肉眼觀察其胃黏膜色澤鮮紅，組織彈性好;模型組大鼠出現食量減少、活動減少、毛發枯槁、弓背、喜扎堆、體重明顯下降、胃黏膜變薄、彈性減弱，可見明顯暴露的血管，局部糜爛;樂胃飲低、中、高劑量組和維酶素組大鼠的一般情況及胃黏膜大體情況隨著治療有不同程度的恢復。

2.2 各組大鼠體重的比較

表1顯示，與正常組比較模型組大鼠體重明顯下降(P＜0.01)，與模型組比較，樂胃飲各劑量組及維酶素組體重均明顯升高(P＜0.01)，樂胃飲中劑量組體重較維酶素組及樂胃飲高劑量組降低(P＜0.05)。

表1 樂胃飲對慢性萎縮性大鼠體重變化的影響(±s)

表1 樂胃飲對慢性萎縮性大鼠體重變化的影響(±s)

注:與正常組比較:☆☆P＜0.01;與模型組比較:△△P＜0.01;與維酶素組比較:○P＜0.05;與樂胃飲中劑量組比較:◇P＜0.05

組別 例數 體重(g)331.38±22.46模 型 組 8 260.88±18.68☆☆維 酶 素 組 8 310.25±23.46△△樂胃飲低劑量組 8 299.38±16.12△△樂胃飲中劑量組 8 290.00±14.69△△○樂胃飲高劑量組 8 312.12±9.83正常組8△△◇

2.3 掃描電鏡觀察

正常組:大鼠胃黏膜上皮細胞緊密相連，沿著胃腺開口環形排列，結構完整，胃小凹清晰，被覆一層黏液(圖 1-①)。

模型組:大鼠胃黏膜細胞萎縮，排列紊亂，上皮廣泛破潰、脫落，出現大小不等、形狀不規則的局灶性黏膜糜爛(圖1-②)。

維酶素組:大鼠胃黏膜細胞萎縮程度較輕，細胞表面粗糙，少量破潰(圖③)。

樂胃飲低、中劑量組:大鼠胃黏膜細胞萎縮程度較輕，細胞表面粗糙，可見黏液分泌，少量細胞破潰(圖 1-④⑤)。

樂胃飲高劑量組:大鼠胃黏膜細胞萎縮不明顯，可見黏液分泌，偶見細胞破潰(圖1-⑥)。

3 討論

慢性萎縮性胃炎是臨床常見病，中醫屬“胃痛”、“嘈雜”、“痞滿”等范疇，其發病與外邪侵襲、飲食不節、情志不舒、脾胃虛弱有關，主要病機為脾運不健，水濕不運，清陽不升，濁陰不降。臨床胃鏡及組織學檢查顯示胃黏膜炎癥、糜爛、萎縮、腸上皮化生、異型增生等病理改變［3］。本實驗結果顯示，采用水楊酸鈉灌胃、自由飲用MNNG水溶液，結合饑飽失常等綜合因素，可造成大鼠胃黏膜慢性損傷。從大體上看，與正常組比較，模型組大鼠胃黏膜變薄，組織彈性減弱，可見明顯暴露的血管。SEM進一步證實，模型組上皮層脫落明顯，局部出現糜爛等病變，說明造模成功。

圖1 各組大鼠胃黏膜掃描電鏡觀察

樂胃飲具有健脾理氣之功效，方中淮山藥補脾氣而益胃陰，培補脾胃，性質平和;薏苡仁健脾滲濕，性微寒而不傷胃，益脾而不滋膩;陳皮理氣運脾，調中快膈，性溫和且燥而不烈。此方組方思想明確，配伍精煉，補其虛以助其健而無滯脾礙胃之慮，祛其濕以順其性而無傷津耗液之弊，行其氣而和其用而無耗氣傷陰之害，充分體現了“健脾關鍵在運脾”的主旨［4］。現代藥理研究證實，組方中山藥具有抗菌消炎作用，且能修復上皮組織，促進皮膚潰瘍面和傷口愈合，具有生肌作用［5］;薏苡仁具有增強機體體液免疫、鎮痛、解熱、抗炎等作用［6］;陳皮有促進小鼠胃排空和腸推進的作用，其揮發油對消化道有緩和的刺激作用，利于胃腸積氣的排出［7］。既往的臨床研究中，樂胃飲對慢性萎縮性胃炎有良好的效果。此項實驗結果顯示，樂胃飲能使慢性萎縮性胃炎大鼠體重增加。掃描電鏡觀察顯示，其使裸露的大鼠胃黏膜上皮結構修復，表面結構基本完整，還可見到黏液分泌，說明樂胃飲保護了黏膜上皮細胞的功能，具有促進組織修復的效果。

［1］朱君華，徐 珊.樂胃飲治療慢性萎縮性胃炎臨床研究［J］.中華中醫藥雜志，2007，22(8):526-527.

［2］徐 珊，周嘉鶴，王常松，等.慢性萎縮性胃炎證病結合模型的復制［J］. 中國中醫藥科技，2008，15(1):6-8.

［3］陳新宇，姒健敏，朱有法.給藥條件下表皮生長因子對萎縮性胃炎逆轉作用研究［J］.中華消化雜志，2003，23(5):312-316.

［4］徐 珊，楊 青，成信法，等.樂胃飲對脾虛實驗大鼠胃泌素和胃動素的影響［J］.中國醫藥學報，2004，19(1):20-22.

［5］李鋒濤，陳 毓.山藥的研究進展［J］.海峽藥學，2008，20(10):91-93.

［6］張明發，沈雅琴.薏苡仁藥理研究進展［J］.上海醫藥，2007，28(8):360-363.

［7］歐麗娟，劉啟德.陳皮藥理作用研究進展［J］.中國藥房，2006，17(10):787-789.