2種阿奇霉素片的人體生物等效性研究

張亞玲，何海霞

（1.重慶市長壽區人民醫院，重慶401220；2.重慶醫科大學附屬第一醫院藥學部，重慶400016）

2種阿奇霉素片的人體生物等效性研究

張亞玲1＊，何海霞2

（1.重慶市長壽區人民醫院，重慶401220；2.重慶醫科大學附屬第一醫院藥學部，重慶400016）

目的：比較2種阿奇霉素片的人體生物等效性。方法：18名健康男性志愿受試者采用雙周期雙制劑交叉試驗設計，單劑量口服2種阿奇霉素片，用微生物杯碟法測定血藥濃度，以3p97計算藥動學參數，并進行生物等效性評價。結果：2種阿奇霉素片主要藥動學參數分別為：cmax（1.21±0.56）、（1.25±0.62）μg·mL－1，tmax（1.94±0.64）、（2.44±1.15）h，AUC0～144h（11.33±7.49）、（11.61±7.15）μg·h·mL－1，受試制劑的相對生物利用度為（97.59±12.72）%。結論：經方差分析和雙單側t檢驗，2種阿奇霉素片具有生物等效性。

阿奇霉素片；藥動學；生物等效性

阿奇霉素是第2代大環內酯類抗生素，自20世紀80年代開發上市并應用于臨床以來，因其穩定性較好、抗菌譜廣、血藥濃度高、具很好的抗生素后效應[1]，為臨床醫師所青睞，國內仿制廠家較多。為評價西南藥業股份有限公司研制的阿奇霉素片是否與市售石家莊制藥集團有限公司生產的阿奇霉素片生物等效，本研究以健康男性為研究對象，采用雙周期雙制劑交叉試驗設計，單劑量口服給藥，微生物杯碟法測定其血藥濃度，對其藥動學和生物等效性進行了考察，現報道如下。

1 材料

1.1 試藥

受試制劑：阿奇霉素片（西南藥業股份有限公司，規格：每片0.25 g，批號：20040201，含量：99.83%）；參比制劑：阿奇霉素片（石家莊制藥集團有限公司，規格：每片0.25 g，批號：030901，批準文號：國藥準字H10980218）；阿奇霉素標準品（中國食品藥品檢定研究院，購于重慶市藥檢所，批號：130352-200203，每1 mg相當于946 u）；其余培養基成分均為分析純。

1.2 研究對象

18名男性健康志愿者，漢族，平均年齡（23.6±1.10）歲；平均體重（61.9±6.25）kg；平均身高（169.4±5.06）cm。試驗前所有受試者經肝腎功能、血壓、心電圖檢查均正常，于充分了解試驗內容后志愿簽署知情同意書。本試驗經重慶醫科大學附屬第一醫院醫學倫理委員會審批通過。

2 方法與結果

2.1 給藥方法及血樣采集

18名受試者隨機分成2組，雙周期雙制劑交叉空腹口服受試制劑或參比制劑500 mg。受試者試驗前禁食12 h，于次日晨8：00時空腹以200 mL溫水送服藥物，服藥后4 h進統一標準餐。試驗期間不得服用茶、咖啡及飲料。2次周期間隔3周。留取受試者服藥前和服藥后0.5、1.0、2.0、3.0、4.0、6.0、8.0、12.0、24.0、48.0、72.0、96.0、144.0 h時血樣各 3 mL 于血清管中。離心，分離血清，一式2份，置－20℃冰箱保存待測。

2.2 血藥濃度的測定

2.2.1 標準溶液的配制：準確稱取阿奇霉素標準品適量，用無水乙醇溶解后加緩沖液（pH 7.8）稀釋成1 mg·mL－1標準貯備液，置于－40℃貯存備用。

2.2.2 指示菌：藤黃八疊球菌[編號28001][2，3]。

2.2.3 Ⅱ號培養基[4]：蛋白胨6 g、牛肉浸膏1.5 g、酵母浸膏6 g、葡萄糖1 g、瓊脂20 g、蒸餾水1 000 mL，調pH值至7.8～8.0，在115℃滅菌30 min后備用。

2.2.4 測定方法：參照文獻[5]，采用微生物杯碟法，將Ⅱ號培養基熔化后冷至約50℃，加入適量藤黃微球菌菌液，混勻，于超凈工作臺上倒入經高壓滅菌的平皿中（12 mL/皿），冷凝后放入不銹鋼小杯，每個血樣分別加入2個小杯；同時另放2個小杯，內加標準溶液。靜置相同時間后，置37℃孵育14～16 h，取出，以游標卡尺測量抑菌圈直徑，按標準曲線計算血液標本中的藥物濃度。

2.3 方法學研究

2.3.1 標準曲線的制備：取空白血清，加阿奇霉素標準貯備液，配制成相當于濃度為2.4、1.2、0.6、0.3、0.15、0.075、0.038、0.019、0.009、0.005μg·mL－1的血清樣品，濃度為組間距1∶2，中心濃度為0.1μg·mL－1，用磷酸鹽緩沖液（pH 7.8）和正常人血清各半作為稀釋液。測定抑菌圈，以血藥濃度的對數為縱坐標（Y）、抑菌圈的直徑為橫坐標（X），進行回歸運算，求得標準曲線方程Y＝0.134 2X－0.631 1（r＝0.998 3）。結果表明，阿奇霉素血藥濃度在0.005～2.4μg·mL－1范圍內線性關系良好，最低檢測濃度為0.005μg·mL－1。

2.3.2 日內、日間精密度與回收率：采用2.400、0.300、0.040、0.005μg·mL－14個質控濃度的阿奇霉素血清，各配制若干份，按照“2.3.1”項下方法操作，分別于日內或日間測定其抑菌圈，計算出日內、日間相對標準差（RSD）和回收率，結果見表1。

表1 精密度及回收率試驗結果（n＝6）Tab 1 Results of precision and recovery tests（n＝6）

由表1可見，4個質控濃度的平均回收率在（96.97±1.49）%～（105.55±3.44）%之間；日內 RSD≤4.29%，日間RSD≤4.18%。因此，阿奇霉素微生物測定方法的精密性和準確性符合“化學藥物制劑人體生物利用度和生物等效性指導原則”的要求。

2.4 數據處理

采用藥動學軟件3p97進行數據處理，計算主要藥動學參數，cmax、tmax以實測值計算，AUC按梯形面積法計算，并求得受試制劑相對生物利用度（F）。取值范圍0～144 h。利用方差分析和雙單側t檢驗對2種片劑進行生物等效性評價。

2.5 生物等效性研究

2.5.1 藥-時曲線：18名受試者交叉口服受試制劑或參比制劑各500 mg后，2種阿奇霉素片的平均藥-時曲線見圖1。

2.5.2 藥動學參數：18名受試者交叉口服受試制劑或參比制劑各500 mg后，2種阿奇霉素片的主要藥動學參數見表2。2.5.3 生物等效性評價：受試制劑的相對生物利用度為（97.59±12.72）%。將所得的AUC和cmax經對數轉換后進行方差分析，并進一步采用雙單側t檢驗和1－2α置信區間法進行生物等效性評價，結果見表3。

圖1 2種阿奇霉素片的平均藥-時曲線Fig 1 Mean plasma concentration-time curves of 2 kinds of Azihromycin tablets

表2 2種阿奇霉素片在人體內的藥動學參數比較（n＝18）Tab 2 Comparison of pharmacokinetics parameters of 2 kinds of Azihromycin tablets in human body（n＝18）

表3 2種片劑主要藥動學參數雙單側t檢驗及1－2α置信區間法檢驗結果Tab 3 Results of t-tests and 1－2α confidence interval method of main pharmacokinetics parameters of 2 kinds of Azihromycin tablets

由表3可見，受試制劑與參比制劑生物等效；用非參數統計Kruskall-Wallis法，判定tmax亦無差異，P＞0.05。

3 討論

本文以2010年版《中國藥典》為依據，采用經典微生物法測定血清中阿奇霉素濃度，方法簡單易行。經方法學研究驗證，日內、日間精密度與回收率良好，靈敏度亦達到了生物樣品測定的要求。

有關阿奇霉素測定方法國內已有報道[2，3，6，7]，有高效液相色譜（HPLC）-紫外法、液-質聯用法、微生物法等。本研究采用微生物法測定阿奇霉素血藥濃度，與儀器法相比，測定的是樣品對敏感菌株的抑菌活性，與臨床應用的要求相符，更能體現其醫療價值，且具有成本低、易開展工作等優點。

18名受試者單劑量空腹口服2種阿奇霉素片后的藥動學參數與文獻報道[2，3，6，7]相似。受試制劑的 cmax、tmax、AUC0～144h和AUC0～∞經雙單側t檢驗和1－2α置信區間法檢驗，結果顯示與參比制劑具生物等效性，且試驗期間無一例受試者發生不良反應，表明受試制劑與上市的參比制劑具生物等效性。

[1] 金 躍，施玲玲，陳素芹，等.國內羅紅霉素、克拉霉素、阿奇霉素藥物不良反應回顧性分析[J].中國新藥與臨床雜志，2006，25（8）：590.

[2] 夏軍龍.阿奇霉素分散片的人體生物等效性研究[J].現代中西醫結合雜志，2009，18（3）：233.

[3] 郁繼誠，曹國英，張 菁，等.國產阿奇霉素顆粒劑在健康受試者中的生物等效性[J].中國新藥雜志，2007，16（22）：1 907.

[4] 國家藥典委員會.中華人民共和國藥典（二部）[S].2000年版.北京：化學工業出版社，2000：附錄ⅪA.

[5] 張治錟.抗生素藥品檢驗[M].北京：人民衛生出版社，1987：34.

[6] 李 東，方世平，閆小華，等.國產和進口阿奇霉素片在人體內的生物等效性研究[J].中國藥房，2006，17（24）：1 877.

[7] 任 靜，李珂佳，葉利明，等.HPLC-MS/MS評價阿奇霉素顆粒劑的人體生物等效性[J].中國藥學雜志，2008，43（19）：1 500.

Bioequivalence of 2 Kinds of Azihromycin Tablets in Healthy Volunteers

ZHANG Ya-ling
（Chongqing Changshou District People’s Hospital，Chongqing 401220，China）
HE Hai-xia
（Dept.of Pharmacy，The First Affiliated Hospital of Chongqing Medical University，Chongqing 400016，China）

OBJECTIVE：To compare the bioequivalence of 2 kinds of Azihromycin tablets in healthy volunteers.METHODS：2 kinds of Azihromycin tablets were administered by randomized crossover way in 18 male volunteers for 2 periods，and the blood concentrations of azihromycin were determined by microbiological assay.The pharmacokinetic parameters were calculated with 3p97 pharmacokinetic program and the bioequivalence was evaluated.RESULTS：Main pharmacokinetic parameters were as follows：cmax（1.21±0.56）μg·mL－1and（1.25±0.62）μg·mL－1；tmax（1.94±0.64）h and（2.44±1.15）h；AUC0～144h（11.33±7.49）μg·h·mL－1and（11.61±7.15）μg·h·mL－1.The relative bioavailability of test tablets was（97.59±12.72）%.CONCLUSION：Results of variance analysis and t-tests suggest that 2 kinds of Azihromycin tablets are bioequivalent.

Azihromycin tablet；Pharmacokinetics；Bioequivalence

R969.1；R978.1+5

A

1001-0408（2012）46-4358-03

DOI 10.6039/j.issn.1001-0408.2012.46.14

2012-07-16

2012-08-16）

＊碩士研究生。研究方向：臨床藥學。電話：022-23626417。E-mail：zhangyuan0089@126.com

#通訊作者：主任藥師，博士。研究方向：臨床藥學。電話：022-23626417。E-mail：zlq0713@yahoo.com.cn