瘤果黑種草子顆粒對腎陽虛模型小鼠影響的實驗研究△

魏鴻雁徐曉琴李曉瑾肖 瓊孫 宇

（1.新疆維吾爾自治區中藥民族藥研究所，新疆 烏魯木齊 830002；2.新疆生產建設兵團農六師醫院，新疆 五家渠 831300；3.新疆大學生命科學與技術學院，新疆 烏魯木齊 830046）

瘤果黑種草子(Nigella glandulifera Freyn.)為毛莨科植物黑種草屬瘤果黑種草的干燥種子，是我國新疆維吾爾族習用藥材，性味甘、辛、溫[1]。具有利尿，補腦，補腎，活血，解毒，下乳，通經，止咳，烏發，抗衰老等作用。常用于胸悶氣促，乳房腫痛，耳鳴，乳汁減少，熱淋，石淋，閉經等癥[2]。本課題組加工制成的瘤果黑種草子顆粒在預實驗中發現具有溫補腎陽、抗衰老的作用，因此，本文就其對腎陽虛癥的影響進行研究，為進一步研發瘤果黑種草子顆粒奠定基礎。

1 材料與方法

1.1 實驗動物：昆明品系小鼠 200只，體重（18±2）g，由新疆醫科大學實驗動物中心提供，動物合格證號：醫動字16－003號。

1.2 實驗試藥與儀器：瘤果黑種草子（新疆藥業集團西天山藥材有限公司種植基地提供）；瘤果黑種草子顆粒自制（在4℃冰箱內保存備用）；氫化可的松注射液（25mg/ml）（批號：國藥準字

H14020980，山西晉新雙鶴藥業有限責任公司生產）；Metter AE163電子天平 (瑞士梅特勒－托利多公司)；YB－Z真空恒溫干燥箱（天津藥典標準儀器廠）；N－1000旋轉蒸發儀（日本Eyela公司）；BS200S分析天平（北京賽多利斯儀器系統有限公司）；GS－671電子秤（大連星海生物有限公司）；YLS－1A型多功能小鼠自主活動記錄儀（山東省醫學科學院設備供應站）。

1.3 實驗方法[3－4]

1.3.1 模型的建立：選取健康昆明種小鼠60只,雌性，動物房飼養3天后隨機分為5組，第一組作為空白對照組，第二組為模型組，其余三組為給藥組，除空白組外，模型組與給藥組腹腔注射氫化可的松注射液（25 mg/kg·d－1）進行造模。

1.3.2 給藥方法與劑量：空白對照組與模型組給予蒸餾水灌胃

0.2 mL/10 g，其余各組分別按表1劑量給予灌胃,連續給藥10d。

末次給藥1 h后,稱重測定小鼠自主活動次數、小鼠游泳存活時間及小鼠臟器指數[5－6]。

1.3.3 觀測指標：①對小鼠自主活動次數的影響：末次給藥1h后，稱體重后，將小鼠放入自主活動儀內,前3min為適應期,后5min由計數儀統計小鼠自主活動次數。室內需安靜，室溫保持18℃～22℃、濕度 20% ～40%[7－11]。②對小鼠游泳存活時間的影響測小鼠自主活動次數后，將小鼠放入水溫為20℃±1℃，水深20cm的50cm×30cm×25cm的玻璃缸內，每次1只，小鼠尾根部負荷7%體重的重物，置水游泳，觀察小鼠游泳至力竭（在水下10s不能上浮），該時間為小鼠的游泳時間[12－16]。③對小鼠臟器指數的影響記錄完小鼠的游泳存活時間后，即刻將小鼠取出解剖，取其腎、睪丸、附睪、前列腺+精囊，用分析天平稱重并計算臟器指數[17－21]。

表1 實驗小鼠分組及給藥劑量

2 實驗結果

2.1 對小鼠自主活動次數的影響:模型組小鼠自發活動次數明顯低于空白對照組（P＜0.01），瘤果黑種草子顆粒組、原藥材組及去油瘤果黑種草子組的自發活動次數明顯高于模型組（P＜0.01），有顯著性差異。瘤果黑種草子顆粒組與原藥材組、去油瘤果黑種草子組在自主活動次數方面相近，無統計學差異。實驗結果見表2。

2.2 對小鼠游泳存活時間的影響：模型組的小鼠游泳存活時間明顯短于空白對照組(P＜0.01)，模型組的小鼠游泳存活時間明顯短于瘤果黑種草子顆粒組、原藥材組及去油瘤果黑種草子組(P＜0.01)。瘤果黑種草子顆粒組與原藥材組、去油瘤果黑種草子組在小鼠游泳存活時間方面無統計學差異。實驗結果見表3。

表2 小鼠自主活動次數（±s）

表2 小鼠自主活動次數（±s）

注: 與對照組比較,*P＜0.01,**P＜0.05，與模型組比較▲P＜0.01,▲▲P＜0.05。

組別 n 自主活動次數對照組模型組瘤果黑種草子制劑組瘤果黑種草子原藥材組去油瘤果黑種草子組12 12 12 12 12 402.33±40.33▲335.25±58.53*412.08±70.32▲440.50±38.25▲439.75±82.64▲

表3 游泳存活時間的影響（±s）

表3 游泳存活時間的影響（±s）

注: 與對照組比較,*P＜0.01,**P＜0.05，與模型組比較▲P＜0.01,▲▲P＜0.05

組別 n 存活時間(min)對照組模型組瘤果黑種草子制劑組瘤果黑種草子原藥材組去油瘤果黑種草子組12 12 12 12 12 285±105▲146±33*201±28▲207±32▲201±26.97▲

2.3 對小鼠臟器指數的影響：腎陽虛模型組的腎、前列腺+精囊、附睪、睪丸的重量較空白對照組顯著減輕，瘤果黑種草子顆粒組能提高腎陽虛癥小鼠的附睪與睪丸指數，但無統計學意義，兩組間腎指數相近；瘤果黑種草子原藥材、去油瘤果黑種草子組均能提高腎陽虛小鼠附睪、睪丸指數（P＜0.01），具有統計學差異。實驗結果見表4。

表4 對腎陽虛癥小鼠臟器指數的影響（±s）

表4 對腎陽虛癥小鼠臟器指數的影響（±s）

注: 與對照組比較 *P＜0.01,**P＜0.05，與模型組比較▲P＜0.01,▲▲P＜0.05

組別 n 腎 前列腺+精囊 附睪 睪丸(g)對照組模型組瘤果黑種草子制劑組瘤果黑種草子原藥材組去油瘤果黑種草子組12 12 12 1.86±0.15 1.67±0.20**1.66±0.23 0.64±0.12 0.45±0.17*0.40±0.12*0.18±0.09 0.10±0.02*0.11±0.03*0.61±0.09 0.51±0.09**0.58±0.15 121.66±0.210.39±0.10*121.99±0.29▲0.50±0.16**0.18±0.05▲0.23±0.05▲0.67±0.07▲0.70±0.10▲

4 討 論

4.1 腎陽虛模型的建立：現代研究認為，下丘腦－垂體－靶腺軸功能障礙和功能低下是腎陽虛癥的病理基礎。靶腺軸主要包括腎上腺軸、甲狀腺軸、性腺軸。這3個軸中的一個或幾個出現功能低下都可能引起腎陽虛癥。腎陽虛癥動物模型中，氫化可的松模型是比較經典的模型，應用最多[22]。氫化可的松所致的小鼠腎陽虛模型在病理方面與腎陽虛證實質研究成果在很大程度上取得一致,小鼠癥狀表現也較好地符合腎陽虛證的辨證診斷。造模后,小鼠出現一系列“耗竭”現象：神淡、精神不振、反應遲鈍、被毛疏松、失去光澤及脫毛、消瘦、肢尾冷、肛溫降低、畏寒肢冷、拱背蜷曲等外形衰弱及寒象。

4.2 不同給藥組對腎陽虛癥小鼠的影響：不同給藥組（瘤果黑種草子顆粒組、原藥材組、去油瘤果黑種草子組）小鼠的負重游泳時間和自主活動次數均高于腎陽虛模型組，說明瘤果黑種草子顆粒、原藥材及去油瘤果黑種草子均可改善小鼠的腎陽虛癥，增強腎陽虛小鼠的體質、提高其對環境的適應能力。腎陽虛癥小鼠的各種器官會有萎縮現象，其中以腎、睪丸、附睪、精液囊和前列腺的重量下降最為明顯。模型組小鼠的睪丸指數附睪指數明顯低于不同給藥組（P＜0.01），推測藥物可能可以改善腎陽虛小鼠生殖器官的狀況。

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