AMI患者ALOX5AP基因SG13S114位點SNP與ARPs的關系

孫曉盈，謝 風，金 玲，王 海

（吉林大學中日聯誼醫院，吉林 長春130033）

目前已有研究表明5脂氧合酶激活蛋白（ALOX5AP）基因SG13Sll4A／T的遺傳變異性與中國人群缺血性卒中有顯著相關性，但與心肌梗死（AMI）和急性冠脈綜合征（ACS）的易感性尚不明確。

1 對象與方法

1.1 實驗對象

2006年10月－2007年8月吉林大學中日聯誼醫院住院的AMI患者72例，男39例，平均年齡58歲；女33例，平均年齡62歲。診斷符合WHO心肌梗死的診斷標準。同時對照組冠心病78例，男43例，平均年齡61歲，女35例，平均年齡63歲。診斷符合WHO冠心病的診斷標準，部分經冠狀動脈造影證實。

1.2 方法

1.2.1 EDTA抗凝血提取白細胞進行基因檢測；另取枸櫞酸鈉抗凝血檢測血漿Fbg，并對血清進行其它相關指標檢測。

1.2.2 外周血基因組DNA提取，PCR擴增DNA引物設計：

上游：F：5′－GTGTTCAGGAAGGGAGTTTC TGT－3′；

下游：R：5′－GTCTATGGTTGCAACATTGAGATTA－3′。

1.2.3 Ase I限制性內切酶酶切PCR一RFLP內切酶在線軟件分析，并行1%瓊脂糖凝膠電泳。

1.3 統計學分析

采用統計軟件SPSS11.5分析，其中兩組（心肌梗死組與對照組）Fbgβ455G／A基因頻率及等位基因頻率分布進行χ2檢驗。

2 結果

2.1 ALOX5AP基因SG13S114位點SNP分布圖

圖1中顯示從左向右第一條帶是maker帶；第二和第四條帶為正?；騎／T型；第三條帶為異常突變雜合子T／A型；第四條帶為未經酶切的ALOX5AP基因SG13S114位點，SNP為限制性內切酶Hse I公司為驗證是否酶切有效而固定設置的酶切位點位于分子量989處。

2.2 心肌梗死組與冠心病組患者外周血基因組ALOX5AP基因SG13S114位點SNP分布 見表1。

2.3 心肌梗死組與冠心病組ALOX5AP基因SG13S114位點SNP分布與血漿纖維蛋白原濃度的關系 心肌梗死組與冠心病組A／A、T／A基因型血漿纖維蛋白原濃度均明顯高于T／T基因型，而且存在明顯正相關（P＜0.005），且心肌梗死組血漿纖維蛋白原濃度明顯高于冠心病組。見表2。

圖1 ALOX5AP基因SG13S114位點SNP分布

表1 心肌梗死組與冠心病組患者外周血基因組ALOX5AP基因SG13S114位點SNP分布［n，%］

表2 心肌梗死組與冠心病組Fbgβ455多態性分布與血漿纖維蛋白原濃度的關系

2.4 心肌梗死組與冠心病組ALOX5AP基因SG13S114位點SNP分布與血漿高敏CRP濃度的關系

心肌梗死組與冠心病組中血漿高敏CRP與ALOX5AP基因SG13S114位點SNP分布有顯著相關性（P＜0.05），且心肌梗死患者血漿高敏CRP濃度明顯高于對照組（P＜0.005）。見表3。

3 討論

ALOXSAP是LTs合成及5LO催化作用所必須的蛋白質，也是通過5LO通路促進AS的發生、發展的重要激活蛋白［1］。有種假說認為：各種刺激誘導動脈血管壁中泡沫細胞，巨噬細胞、樹突狀細胞，并使細胞內cPLA2活性激活，經5LO途徑生成LTs?，F知LTs受體可由平滑肌細胞、內皮細胞，巨噬細胞、T細胞及肥大細胞表達［2－3］。所以始動于動脈血管壁炎癥的5LO蛋白形成通路是動脈硬化形成的主要發病機制之一。LTs分別以分旁泌或自分泌方式與這些促進炎癥發展的細胞中LTs受體結合并發揮作用，例如促進白血胞參與內皮細胞的黏附、白細胞的趨化作用、促進平滑肌增生及血栓形成等，進而促進冠脈粥樣硬化的發生和發展。本研究結果顯示心肌梗死組與冠心病組患者外周血基因組ALOX5AP基因SG13S114位點多態性分布T／T，T／A，A／A 具有顯著性差異（P＜0.05），而且SG13S114A／A頻率與心肌梗死的發生有顯著正相關。本研究中在ALOX5AP基因SG13S114A／A的AMI患者中，血漿FBg及hs－CRP水平顯著高于對照組，而ALOX5AP基因SG13S114A／A多態位點與中國人群MI有顯著相關性。這可能表明ALOX5AP基因的異常遺傳表型參與了心肌梗死的發生和發展以及梗死后心室重構的整個過程。

表3 心肌梗死組與冠心病組Fbgβ455多態性分布與血漿高敏CRP濃度的關系

［1］Lotzera K，Fullk CD，Habenicht AJR.The liP oxygenase Pathway inarterial wall Biology and atheroselerosis［J］.Biochimieaet Bio Psiea Aeta，2005，1736：30.

［2］HanssonGK.I unemee hanismsin atheroselerosis［J］.Arterioseler Thromb Vase Biol，2001，21：187.

［3］StoenRA，JaeobsonBS.Modulation of cell substrate adhesion by a raehidonie acid liPoxygenase regulates cells Preading and ERKI／inducible cyclo oxygenase regulate seemigrationin N3T3fibroblasts［J］.Mol Biol Cell，2001，12：1937.