分次與一次肝部分切除術建立大鼠肝再生模型的對比研究

劉國華，戴 東，李明意，張谷裕

（廣東醫學院附屬醫院 肝膽外科，廣東 湛江524001）

大鼠肝臟與人類肝臟在解剖學上關系密切，行大部分肝切除術后，肝再生能力極強，因此成為研究肝再生規律較理想動物模型。1931年，Higgins等首次對大鼠施行約70%肝大部分切除［1］，建立了操作簡單、均一性好、重復性高和可控性強的經典肝再生模型。然而，肝重恢復作為評價肝再生重要指標之一，肝再生度及相對肝重（肝重／體重）測定的準確程度與大鼠手術時結扎肝蒂后組織殘留程度相關［2］，因此，對大鼠肝切除手術中的精細操作要求甚高。本研究在大鼠70%肝大部分切除建立肝再生模型時，通過對比分析一次結扎肝蒂與分次結扎肝蒂技術操作方法在肝重測量上及并發癥發生率間差異，以期為研究肝再生規律提供選擇量化肝再生準確性更好的手術操作方法。

1 材料與方法

1.1 材料 實驗動物：健康成年SD雄性大鼠共180只，3月齡，體質量180－220g，由廣東醫學院實驗動物中心提供，于動物房適應性飼養一周，室溫25℃，正常飲水及進食大鼠飼料。

1.2 方法

1.2.1 實驗分組：SD大鼠按隨機化原則分為3組：①分次肝切除組（A）；②一次肝切除組（B）；③對照組（C），每組60只。

1.2.2 各組實施方法：各組具體手術實施者相同，均由相同三人完成。

對照組參考呂毅［3］等研究方法：乙醚開放吸入麻醉，取腹正中切口進腹，自動拉鉤向兩側牽開腹壁，將胃、脾提出腹外，腸道撥向左尾方，充分暴露肝臟。完整取下肝臟，結扎切斷各葉肝蒂，分別稱各葉肝重。據史冀華等對大鼠解剖特點研究［4］計算全肝重（各葉肝重之和），切除肝重（左外葉、左內葉及中葉肝重之和），殘肝重（其余三葉肝重之和），切肝比例（切除肝重／全肝重）。一次肝部分切除組：麻醉、開腹、肝臟顯露與前述方法一樣，參考Petersen［5］等肝大部分切除方法：分離切斷肝臟周圍韌帶，于肝臟左外側葉、左內葉與中葉繞1號絲線套于前三葉肝蒂處，結扎后，于結扎線外切除部分肝臟并稱切除肝重，保留右外葉、三角葉和乳頭葉，觀察無出血，關腹。術后觀察大鼠一般情況并給予正常飲食，2天后處死大鼠，完整切除肝臟稱殘肝重（如2天內死亡則死亡時稱殘肝重），并計算全肝重（切除肝重＋殘肝重）。分次肝部分切除組：麻醉、開腹、肝臟顯露與前述方法一樣，參考湯朝暉，吳孟超等［6］小鼠肝大部分切除方法：剪開鐮狀韌帶至下腔靜脈前方，用棉簽抬起左外葉，剪開肝臟臟面的肝胃韌帶和部分肝左側冠狀韌帶，完整游離肝左外葉，取1號絲線置于肝臟臟面，繞過左外葉，在肝臟膈面盡量靠近根部結扎，切除肝左外葉并稱重。然后分離肝左內葉和中葉周圍韌帶充分顯露其肝蒂根部，從臟面繞過1號絲線，在肝臟膈面靠近根部處結扎，切除這兩葉并稱肝重，計算切除肝重（左外葉、左內葉及中葉肝重之和）。術后觀察大鼠一般情況并給予正常飲食，2天后處死大鼠，完整切除肝臟稱殘肝重（如2天內死亡則死亡時稱殘肝重），并計算全肝重（切除肝重＋殘肝重）。

2 結果

2.1 各組量化肝再生所測指標情況 為了衡量不同手術技術方法實施的肝部分切除術是否影響所測肝葉肝重指標設立對照組，故從解剖學上模擬肝部分切除術，并測量相關指標作為參照。各組全肝重及肝臟臟器指數差異無統計學意義（P＞0.05）。分次肝部分切除組與對照組比較時，切除肝重、殘肝重與切肝比例無統計學意義（P＞0.05），而一次肝部分切除組與對照組、分次肝部分切除組比較時，切除肝重、切肝比例均比后者小（P＜0.05）、殘肝重則比后者大（P＜0.05）（見表1）。

2.2 不同手術操作方法對建立肝再生模型成功率的影響情況 一次肝部分切除組手術后2天內死亡的大鼠有12只，探查發現其中6只出現腹腔內出血，解剖發現肝蒂處結扎線松脫，另外6只發現肝蒂處結扎線過深致下腔靜脈狹窄明顯。剩余大鼠手術后2天取殘肝時發現8只發生膽漏，8只腹腔內有渾濁膿性腹水，發生腹腔感染。而分次肝部分切除組手術后2天內死亡的大鼠只有1只，探查發現肝蒂處結扎線松脫；剩余大鼠手術后2天取殘肝時發現1只發生膽漏，2只腹腔內有渾濁膿性腹水，發生腹腔感染。一次肝切除組膽漏、出血、腹腔感染及下腔靜脈狹窄并發癥發生率均比分次肝切除組高（P＜0.05）（見表2）。

表1 各組所測肝重及切肝比例情況

表2 各組肝部分切除術后并發癥情況

3 討論

現今對部分肝臟疾病（如肝良、惡性腫瘤）的首選治療方法仍是外科手術治療，如行區域性病變肝臟切除或肝臟移植成為肝臟外科手術常用的技術方法。而如何盡可能地促進肝臟部分切除后肝臟再生及肝功能恢復成為臨床外科必須關注的問題。因此肝再生相關的細胞和分子生物學機制一直是研究熱點。由于倫理原因，如何建立理想的肝部分切除模型成為研究肝再生的關鍵。自1931年，Higgins［1］創立了經典大鼠肝再生模型后，由于其手術方法為肝蒂集束結扎后切除肝臟，故有其自身缺點：（1）可能會影響其它肝葉的血供。（2）可能會出現下腔靜脈狹窄、出血、膽漏、腹腔感染等并發癥導致建模失敗。（3）結扎線處殘留組織過多引起殘肝重過多致所測肝再生指標準確性降低。隨后，肝部分切除手術方法不斷得到改進提高，出現了輔助顯微外科技術［7－8］并精確地完成大鼠肝大部分切除術，后又出現了腹腔鏡［9］下輔助完成大鼠肝部分切除術。盡管顯微外科技術與腹腔鏡技術具有創傷小、出血少等優點，但同時也存在手術技術要求高、手術器械及設備要求高等缺點，故在現今仍難替代簡便易行的開腹手術。因此，本研究旨在建立克服自身缺點的開腹大鼠肝大部分切除術為研究肝再生規律提供更合理技術平臺。

大多數研究表明大鼠肝臟解剖特點如下：肝臟可分為6葉，乳頭葉、左外葉、左內葉、中葉、右外葉、三角葉；大鼠肝臟各葉有相對獨立的Glisson系統和肝靜脈回流系統，易于繞線結扎肝蒂行肝葉切除術；左外葉、左內葉與中葉約占全肝重70%，而左內葉與中葉部分靜脈、膽管共干可以一并結扎切除，左外葉則可以單獨結扎切除。本研究依據大鼠上述解剖特點并參考湯朝暉等［6］小鼠建模手術技術設計分次結扎切除大部分肝臟手術方法，并與經典一次集束結扎肝臟的手術方法作對比研究。首先，從量化肝再生所測指標情況來看：各組全肝重及肝臟臟器指數差異統計學上無意義 （P＞0.05），說明手術技術處理因素間具有可比性。分次肝部分切除組與對照組比較時，切除肝重、殘肝重與切肝比例統計學上無意義（P＞0.05），說明該組操作基本達到解剖學上技術要求，另一側面說明了分次肝部分切除術手術精細程度高，能達到準確量化肝再生的要求。而一次肝部分切除組與對照組、分次肝部分切除組比較時，切除肝重、切肝比例均比后者小（P＜0.05）、殘肝重則比后者大（P＜0.05），說明一次集束結扎肝臟的手術方法易造成結扎線處殘留組織過多，從而造成殘肝重過大、切除肝重、切肝比例過少，易出現量化肝再生指標時出現較大誤差。其次，從不同手術操作方法對建立肝再生模型成功率的影響情況來看：一次肝切除組膽漏、出血、腹腔感染及下腔靜脈狹窄并發癥發生率均比分次肝切除組高（P＜0.05）。其原因不難推測：一次集束結扎肝臟的手術方法與分次結扎肝蒂分次切除肝葉的手術方式相比較，較易發生結扎過淺造成結扎線處殘留組織過多引起腹腔感染或膽漏的情況，或結扎線過深造成下腔靜脈狹窄，甚或發生結扎線松脫造成出血。而分次分葉結扎是逐一游離各肝蒂后直視下進行順次結扎、切除等操作，故減少了盲目套扎的弊端，從而減少了上述并發癥，提高手術成功率。

綜上所述，利用分次分葉結扎手術技術方法建立研究肝再生規律的大鼠肝大部分切除術動物模型要比一次結扎肝部分切除方法更加具有優勢，是簡單、易行、可控性強的手術方式。

［1］Higgin s G M，Anderson R M.Exp eriment al pathology of the liver：rest orat ion of the liver of the white rat following partial surgical removal［J］.Arch Pathol，1931，12：186.

［2］黃 峰，花蓮英，張志堅，等.肝硬化肝切除術后肝再生及評估指標研究［J］.佛山科學技術學院學報，2011，29（1）：77.

［3］呂 毅，潘承恩，孔令忠，等.SD大鼠肝臟及附屬管道的應用解剖［J］.西安醫科大學學報，1998，19（1）：70.

［4］史冀華，朱盛興，張水軍.大鼠肝部分切除術的應用解剖及實施［J］.世界華人消化雜志，2008，16（22）：2516.

［5］BE Petersen，VF Zajac，GK Michalopoulos，et al.Hepatic oval cells activation in response to injury following chemically induced periportal or pericentral damage in rats［J］.Hepatology，1998，27（4）：1030.

［6］湯朝暉，周露婷，謝志芳，等.利用分葉順次肝切除術建立小鼠肝臟大部切除后再生模型［J］.第二軍醫大學學報，2009，30（5）：524.

［7］Rodriguez G，Lorente L，Duran HJ，et al.A 70%hepatectomy in the rat using a microsurgical technique［J］.Int Surg，1999，84：135.

［8］Martins P N，Neuhaus P.Hepatic lobectomy and segmentectomy models using microsurgical techniques［J］.Microsurgery，2008，28：187.

［9］Krahenbuhl L，Feodorovici M，Renzulli P，et al.Laparoscopic partial hepatectomy in the rat：a new resectional technique［J］.Dig Surg，1998，15：140.