急性白血病患者染色體核型分析

伍惠玲，秦 雪，寧自覺，何 雨，劉 波，陳以文，邱慶明，陳智平，李 山＊

（1.廣西醫科大學第一附屬醫院 臨床醫學實驗部，廣西 南寧530021；2.廣西醫科大學公共衛生學院，南寧530021）

急性白血病（AL）是一種以造血干／祖細胞獲得性突變為特征的惡性克隆性疾病［1］。隨著臨床上MIC分型的應用，要求在FAB分型的基礎上開展免疫學及染色體檢查。特異性染色體的異常是惡性血液病發生過程中的重要環節，更能代表疾病的本質，細胞染色體分析已成為研究和診斷白血病的重要方法之一［2］。本文就AL進行染色體分析，探討AL的生物學特征及其發病機制。

1 材料與方法

1.1 病例資料 本院門診和住院初診AL患者310例，其中急性髓系白血病（AML）190例，急性淋巴細胞白血病（ALL）120例。男198例，女112例；年齡1.5－77歲，中位年齡53歲。每一例于治療前同時抽取骨髓進行MIC檢測。排除繼發于MDS、治療后的白血病。

1.2 細胞形態學檢測 骨髓細胞涂片常規瑞氏－吉姆薩染色后，光學顯微鏡下計數200個有核細胞，分析各階段細胞形態和比例。常規進行過氧化物酶（POX）、PAS、鐵（Fe）組化染色。按FAB分型及基于FAB分型的國內分類法確定AL類型。

1.3 免疫表型分析 取新鮮骨髓細胞EDTA抗凝，制備白細胞懸液，采用CD45和側向角散射（ssC）雙參數散點圖設門，髓系單克隆抗體有CD13、CD33、CD64、CD14、CD117，T淋巴細胞系為cCD3、CD5、CD7，B淋巴細胞系為cCD79a、CD19、CD20，巨核系為CD41、CD61，紅細胞系為 Gly－a，干＼祖細胞為CD34、HLA－DR。流式細胞儀為Coulter Epics XL，分析5 000－10 000個細胞。結果判定以胞膜抗原陽性細胞≥20%為陽性標準，胞漿抗原≥10%為陽性標準。

1.4 染色體制備及核型分析 抽取骨髓液1－2ml進行染色體核型分析，經過直接培養法、24h培養法，收集有絲分裂中期細胞，常規制片后，用G顯帶技術進行染色體顯帶，分析10－30個中期細胞，核型異常按《人類細胞遺傳學國際命名法體制（ISCN）1995》進行描述。

2 結果

2.1 細胞形態學和免疫表型分析

按照FAB分型標準，AML 190例中M1 12例、M2 58例，M3 38例、M4 39例、M5 20例、M6 5例、M7 5例、分類不明3例，混合細胞白血病10例。免疫表型單純髓系175例，T－髓系3例，B－髓系7例，裸細胞型2例，對于形態學分類不明經免疫表型分析證實為髓系3例。

ALL 120例中 ALL－L1 2例，ALL－L2 111例，ALL－L3 7例。免疫表型單純T系20例，單純B系93例、T－B系5例、裸細胞型1例，B－髓系1例。

2.2 細胞遺傳學分析

在190例AML患者中發現染色體異常者有103例，占54.21%（103／190），包括染色體數目異常和結構異常，涉及到34種數目異常，38種結構異常。

在平衡易位中，以t（8；21）（q22；q22）為最多見，共22例，占所分析患者的11.6%（22／190），而在 M2患者中占37.9%（22／58）。t（8；21）（q22；q22）易位僅在M2中檢測到，在其他類型中未發現。在22例t（8；21）（q22；q22）中有4例同時伴隨其它異常，其中有2例檢測到＋8，1例＋4，1例del（3q）異常。M2患者中有6例檢出復雜染色體異常（涉及3條或更多條染色體的異常）。

平衡易位中出現頻率其次的是t（15；17）（q22；q12or21），共16例，僅在M3中檢測到，其他亞型未發現，占所分析患者的8.42%（16／190），而在 M3患者中占42.1%（16／38）。另一常見的特異性染色體重排inv（16）（p13q23），共檢出7例，其中 M45例，M52例。M4患者中有4例為M4Eo型，全部出現inv（16）異常，異常率為100%（4／4）。如表1所示。在120例ALL患者中染色體異常者有63例，占52.5%（63／120）。其中檢出率最高的是t（9；22）（q34；q11），共19例，占15.8%。19例中有18例為ALL－L2型，1例L3。2例L1全部檢測出異常，分別為del（9）（p21），del（3）（q21）。7例L3中有3例檢出異常，分別為del（6）（q21），t（9；22）（q34；q11），t（4；11）（q21；q23）。L2有58例檢出異常，包括11例數目異常，超二倍體易見。47例結構異常，以t（9；22）（q34；q11）檢出率最高，共18例，其次為t（8；14）（q24；q32）、t（4；11）（q21；q23）各3例。如表2所示。

表1 177例AML患者各FAB分型（M1－M7）染色體核型分析結果

表2 120例ALL患者各FAB分型（L1－L3）染色體核型分析結果

3 討論

急性白血病（AL）是一組異質性很高的惡性血液病。隨著城市污染、環境氣候變化、飲食習慣等的改變，AL的發病率呈現不斷上升的趨勢，而且跨越各個年齡層，嚴重威脅著人類的健康。AL的正確分型對白血病的診斷、確定治療方案、判斷預后、觀察療效均有十分重要的意義。1976年，法、英、美提出了AL的FAB形態學分型方案及診斷標準，是目前應用最多和最廣的分型方法，也是診斷白血病不可或缺的基本方法之一［2］。但形態學診斷存在主觀性，近年來，國際上在FAB分型的基礎上開展了大量免疫學及染色體的研究，結合臨床綜合進行分型。其中，細胞遺傳學檢查較形態學及免疫表型檢查更能反映白血病細胞的生物特征，更能代表疾病的本質，細胞染色體分析已成為研究和診斷白血病的重要方法之一。

據文獻報道，急性白血病的染色體異常檢出率通常為60%左右，這與中期細胞培養的質量技術及顯帶技術有一定的關系［3］。本研究對310例AL患者采用常規染色體核型分析技術，總共檢出166例異常核型，占53.5%，與國內外報道比例相符［3，4］。2001年，WHO提出的AML分類標準更加強調了重現性遺傳學異常：伴有t（8；21）（q22；q22）、t（15；17）（q21；q21）、inv （16）（p13；q22）和11q23染色體異常的AML［5］。這為揭示AL發病機制、靶基因治療提供了很好的參考價值。本研究AML異常核型中，以t（8；21）為最多見，主要集中在 M2亞型。其次是t（15；17），僅在 M3中檢測到，其他亞型未發現。WHO分類標準將其作為M3的一個重要標志，它對患者疾病的診斷與進一步治療有重要意義。inv（16）的異常主要在 M4患者發現。這與文獻報道的FAB相關性特異性染色體重排一致。ALL患者中異常檢出率最高的是t（9；22），數目異常以超二倍體、多倍體常見。參照染色體核型異常情況，美國國家癌癥綜合網 （NCCN）按疾病預后風險不同分為3組：①良好組，包括t（8；21）、inv（16）和t（16；16）；②中等組，包括正常核型、單純＋8、t（9；11）及其它預后良好和預后差組未提及的異常；③預后差組，包括復雜異常 （≥3個異常）、－5、－7、5q－、7q－、除t（9；11）以外的11q23異常、inv（3）、t（3；3）、t（6；9）和t（9；22）［3］。這對 AL 患者診斷、進一步治療和判斷預后具有十分重要的意義。

免疫表型分析是一種客觀的檢測手段，尤其對于形態學分類不明以及雙系列型的AL更加具有診斷意義，本研究免疫分型與細胞形態學分型符合率為93.8%，有3例分類不明AL經免疫分型確定為髓系白血病，有16例確定為雙系列型。免疫分型除了起到對形態學分型的補充外，對于認識白血病原始細胞表面分化抗原的表達，以及它們不同的分化狀態與臨床療效、預后之間的關系都有參考意義。因此，聯合細胞形態學、免疫表型分析、染色體檢查技術對于白血病的準確診斷、靶向治療、判斷預后具有十分重要的意義。

［1］黃 亮，李春蕊，張 恒，等.多重巢式RT－PCR和染色體核型分析技術在急性髓系白血病中的聯合應用［J］.癌癥雜志，2007，26（9）：1029.

［2］譚齊賢，張樹平.臨床血液學和血液檢驗.第3版.北京：人民衛生出版社，2006：197.

［3］繆扣榮，仇海榮，王 蓉，等.急性髓系白血病染色體核型異常分析研究［J］.中國實驗血液學雜志，2009，17（1）：8.

［4］Onsten T，Girardi FM，Coelho G M，et al.Cytogenetic and morphological findings in 166patients with de novo acute myeloid leukemia in southern［J］.Brazil Cancer Genet Cytogenet，2006，170：167.

［5］Harris NL，Jaffe ES，Diebold J，et al.The World Health Organization classification of neoplasms of the hematopoietic and lymphoid tissues：report of the Clinical Advisory Committee meeting［J］.Hematol J，2000，1（1）：53.